Génération de cancer de la prostate des patients Dérivé modèles de xénogreffe de cellules tumorales circulantes

Résumé

Ce manuscrit détaille une méthode utilisée pour générer des xénogreffes dérivées de patients atteints d’un cancer de la prostate (PDX) à partir de cellules tumorales circulantes (CTC). La génération de modèles PDX à partir de CTC fournit un modèle expérimental alternatif pour étudier le cancer de la prostate ; La tumeur la plus fréquemment diagnostiquée et une cause fréquente de décès par cancer chez les hommes.

Résumé

Les modèles de xénogreffes dérivées de patients (PDX) gagnent en popularité dans la recherche sur le cancer et sont utilisés pour l’évaluation préclinique des médicaments, l’identification de biomarqueurs, les études biologiques et les stratégies de médecine personnalisée. Les cellules tumorales circulantes (CTC) jouent un rôle essentiel dans les métastases tumorales et ont été isolées chez des patients atteints de plusieurs types de tumeurs. Récemment, les CTC ont été utilisés pour générer des modèles expérimentaux PDX du cancer du sein et de la prostate. Ce manuscrit détaille la méthode de génération de modèles PDX du cancer de la prostate à partir de CTC développés par notre groupe. Les avantages de cette méthode par rapport aux modèles PDX conventionnels comprennent l’indépendance vis-à-vis de la collecte d’échantillons chirurgicaux et la génération de modèles expérimentaux à différents stades de la maladie. La centrifugation à gradient de densité suivie de la lyse des globules rouges et de la déplétion en cytométrie en flux des cellules mononucléées CD45 positives est utilisée pour enrichir les CTC à partir d’échantillons de sang périphérique prélevés sur des patients atteints d’une maladie métastatique. Les CTC sont ensuite injectés à des souris immunodéprimées ; Les xénogreffes générées par la suite peuvent être utilisées pour des études fonctionnelles ou récoltées pour la caractérisation moléculaire. La principale limite de cette méthode est la méthode de sélection négative utilisée pour l’enrichissement CTC. Malgré cette limitation, la génération de modèles PDX à partir de CTC fournit un nouveau modèle expérimental à appliquer à la recherche sur le cancer de la prostate.

Introduction

Patient xénogreffes dérivés sont des modèles expérimentaux de plus en plus populaires utilisés pour la recherche sur le cancer. Ils peuvent être utilisés pour la caractérisation de biomarqueurs et de voies biologiques, l'évaluation pré-clinique de l'efficacité des médicaments, et la création d'avatars pour les thérapies personnalisés du cancer ^1,2. Auparavant, les autres groupes de recherche ont développé des modèles PDX soit par implantation ou injection de suspensions de cellules tumorales uniques ou des explants tumoraux chez des souris immunodéprimées entier ^1. Ces PDX modèles nécessitent collection chirurgical....

Protocole

Ce protocole a été réalisée à notre institution avec l'approbation du conseil institutionnel d'éthique de la recherche et est en conformité avec toutes les directives institutionnelles, nationales et internationales pour le bien-être humain.

1. Collecte de sang périphérique de patients atteints de cancer de la prostate avancé

Remarque: Sélectionnez les patients atteints de cancer de la prostate métastatique. Obtenir le consentement écrit du patient et enregistrer les caractéristiques cliniques des patients, y compris l'âge à l'isolement et une chimiothérapie antérieure et les traitements hormonau....

Résultats

Ce protocole permettra à la génération de modèles de PDX isolés CD45 prostate négative CTC cancéreuses. Basé sur la méthode de sélection négative utilisée dans notre protocole, il est nécessaire d'exclure les cellules mortes en utilisant DAPI tache. Le pourcentage de cellules CD45 négatives détectées par cytométrie de flux est variable et dépend de la charge tumorale du patient (figure 1A). La coloration par immunofluorescence de cellules non triées à l'aide de CD45 et DAPI (pour identifier les .......

Discussion

Ce manuscrit décrit un procédé pour la génération de modèles PDX cancer de la prostate à partir de CTC. L'utilisation de CTC pour la génération de PDX modèles présente plusieurs avantages potentiels importants par rapport aux méthodes existantes. Tout d'abord, la collecte des CTC accessible à partir de sang périphérique permet de générer des modèles expérimentaux chez le même patient à différents stades de la maladie. D'autre part, la collecte de sang représente un procédé plus sûr et peu .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640	Gibco Life Technologies	11875-093
Sérum de veau fœtal (FBS)	Gibco Life Technologies	10437-028
Pénicilline Streptomycine	Gibco Life Technologies	15140-122
Solution saline tamponnée au phosphate (PBS)	Corning Cell Gro	21-031-CM
35 µ ; m Cell Strainer	BD Falcon	352340
50 ml tube conique en polystyrène	Crystalgen	23-2263
Tampon de lyse des globules rouges	Sigma	R7757
DAPI	Invitrogen	d3571
Ficoll-Paque Plus	GE Healthcare	17-1440
12 mm x 75 mm Tubes en polystyrène avec capuchon de filtre de cellules	BD Falcon
BD Vacutainer Tubes de prélèvement de sang lavande avec EDTA
Kit de prélèvement de sang ailé BD avec aiguille rétractable à bouton-poussoir Calibre
BD Vacutainer Porte-aiguille
à usage unique Garrot
en latex ou sans latextampons imbibés d’alcool
			de gaze de coton
Pansement
Aiguille
g seringue

35223523en latex jetableGants 2 x 2 tampons adhésif25 de 1 ml