La recherche translationnelle sur le cancer dépend de l’extraction de tissus humains. Beaucoup de travail a été consacré à l’optimisation des méthodes d’extraction pour l’analyse ex vivo. Nous décrivons ici des méthodes de traitement des tissus permettant une production maximale de données à partir d’échantillons limités.
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Article de méthode
Travailler avec les tissus humains pour la recherche translationnelle sur le cancer
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Dans cet article
Résumé
Résumé
La recherche médicale pour le bien humain est grandement entravée par la nécessité de tissus et de sujets humains. Cependant, lors de l’obtention du consentement pour les échantillons humains, les précieux échantillons doivent être manipulés avec le plus grand soin afin d’assurer l’intégrité des organes, des tissus et des cellules au plus haut degré. Malheureusement, le traitement des tissus nécessite par définition l’extraction de tissus de l’hôte, un changement qui peut provoquer un stress cellulaire important et avoir des répercussions majeures sur les analyses ultérieures. Ces contraintes pourraient faire en sorte que le spécimen ne soit plus représentatif du site d’où il a été prélevé. Par conséquent, un protocole strict doit être respecté lors du traitement de ces échantillons afin d’assurer la représentativité. Le ou les tests souhaités doivent également être pris en compte afin de garantir l’utilisation d’une technique optimale pour le traitement des échantillons. Voici un protocole pour l’extraction, le traitement et diverses analyses de tissus qui peuvent être effectués sur des tissus traités afin de maximiser la production en aval à partir d’échantillons de tissus limités.
Introduction
La recherche médicale a énormément bénéficié de l'étude de deux lignées de cellules humaines et des modèles animaux. Les lignées cellulaires permettent un meilleur contrôle des composants dans un système, ainsi que l'utilisation de cellules de l'organisme approprié. Travailler avec des cellules humaines, tandis que plus représentatif, présente un aperçu simplifié radicalement les mécanismes qui peuvent être responsables de la santé et de la maladie, parce que les lignées cellulaires peuvent ne pas récapituler l'impact d'autres cellules stromales, composants et organes qui peuvent influer sur les réponses 1. D'autre part, les modèles....
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Protocole
Déclaration éthique: Ce protocole est approuvé par l'Université du Texas MD Anderson Cancer Center.
1. Echantillon achats
- Prélever des échantillons de tissus de recherche du surplus tumeur et les tissus normaux connexes 10-12. Stocker les spécimens sur la glace humide pour éviter autolyse.
- Envoyer tous les tissus, les dispositifs médicaux et les corps étrangers enlevés au cours d'une intervention chirurgicale pour le Département de pathologie pour examen nécessaire afin de faciliter un diagnostic pathologique.
- Poignée tissu alloué à la recherche, conformément à la recherche et aux politiques applicables de la ....
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Résultats
Les résultats affichés ci-dessous illustrent l'écoulement stratégie cytométrie de déclenchement d'une large phénotypage immunitaire sur une tumeur de mélanome traités. Le jour de la coloration, l'échantillon de tissu a été digéré avec de la collagénase et on les homogénéise et DNase I I incubation pendant 60 min, à 37 ° C sous 225 RPM rotation. Après la digestion, la suspension cellulaire a été filtrée à travers un tamis cellulaire de 70 um pour éliminer les débris et les cellules ont été colorées avec.......
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Discussion
En fin de compte, les méthodes de traitement doivent être dictées par l'hypothèse souhaité et prévu des essais techniques à effectuer (Figure 1). La section suivante sert un aperçu de décrire dosages potentiels qui peuvent être effectuées sur ces coupes de tissus. Il est en aucun cas un aperçu exhaustif, mais est destiné à aider à guidage méthodes de traitement des échantillons et choix des essais en aval en décrivant les techniques et la liste de leurs forces et faiblesses.
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par les contributions philanthropiques de la John G. et Marie Stella Memorial Foundation Kenedy (Grant N ° 0727033) et l'Alliance Melanoma Research. Les auteurs tiennent à remercier l'Université de tissus Cancer Center Texas MD Anderson institutionnelle de la Banque (ITB) de coordonner la distribution des tissus et de la collecte et de faciliter la recherche translationnelle, ainsi que le Dr Ignacio Wistuba, le Dr Victor Prieto, le ministère MD Anderson Cancer Center de Pathologie et le Programme de tir mélanome Lune. Enfin, les auteurs tiennent à remercier tous les patients et les familles touchées par le mélanome.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Aiguilles | BD | 305167 | |
| Scalpels jetables en acier inoxydable | Miltex | 4-410 | |
| Plat de culture tissulaire | Corning | 353003 | |
| Cassettes de biopsie | Thermo Fisher | 58931 | |
| Solution stabilisatrice d’ARN | Ambion | AM7021 | |
| 1,5 ml Tubes Eppendorf | Phenix | MAX-815 | |
| Tubes de 50 ml | Corning | 430290 | |
| 10 % Neutral Buffered Formalin | StatLab Medical Products | 28600-5 | |
| Conteneurs de formol | Fisher Scientific | 23-032-059 | |
| Solution de température de coupe optimale (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura Finetek | 4557 | |
| Dnase I | Roche | 10104159001 | |
| Collagenase I | Roche | 11088793001 | |
| 70&mu ; Filtres à cellules m | BD Bioscience | 352350 | |
| Plaques à fond rond à 96 puits | Corning | 3799 | |
| Solution de coloration vivante/morte | Life Technologies | L34957 |
Références
- Lorsch, J. R., Collins, F. S., Lippincott-Schwartz, J. Cell Biology. Fixing problems with cell lines. Science. 346, 1452-1453 (2014).
- van der Worp, H. B., et al. Can animal models of disease reliably inform human studies. , PLoS Med. 7, e1000245 (2010).
- McCabe, P. M., et al.
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