Lingettes nasal pour la grippe détection d'un virus et l'isolement des porcs

Résumé

Les auteurs présentent un protocole de collecte de lingettes nasales pour porcs afin de détecter et d’isoler les virus de la grippe A.

Résumé

Surveillance des virus de l'influenza A chez le porc est essentielle à la santé humaine et animale en raison de la grippe A virus évolue rapidement dans les populations de porcs et de nouvelles souches sont continuellement en train d'émerger. Porcine sont en mesure d'être infecté par diverses lignées de virus influenza A qui les rend hôtes importants pour l'émergence et le maintien de la nouvelle grippe A souches de virus. L'échantillonnage des porcs dans divers contextes tels que les fermes commerciales porcs, les foires agricoles et les marchés d'animaux vivants est important de fournir une vue complète des souches actuellement en circulation IAV. L'ante-mortem technique d'échantillonnage de l'étalon-or actuel (collecte des écouvillons nasaux) est un travail intensif car il nécessite la contention physique des porcs. Lingettes nasales impliquent frotter un morceau de tissu à travers le groin du porc avec peu ou pas de retenue de l'animal. Le nasale essuyer procédure est simple à réaliser et ne nécessite pas de personnel avec vétérinaire ou de formation professionnelle de la manipulation des animaux. Wien que légèrement moins sensibles que les écouvillons nasaux, les taux de détection de virus et d'isolement sont suffisants pour faire nasale essuie une alternative viable pour l'échantillonnage de porcs individuels lorsque les méthodes d'échantillonnage faible de stress sont nécessaires. Le protocole de procédure décrit les étapes nécessaires pour recueillir une nasale viable essuyer d'un porc individuel.

Introduction

Les virus grippaux A (IAV) provoquent des maladies respiratoires chez de nombreuses espèces, y compris les oiseaux domestiques, les porcs et les humains. En raison de réassortiment du génome IAV segmenté évolution virale rapide peut se produire et de nouvelles souches IAV sortir fréquemment. Les porcs sont une espèce qui peut servir comme une cuve de mélange pour réassortiment des IAV d'espèces hôtes multiples. ¹ Il existe actuellement trois principaux sous-types de l'IAV couramment circulant chez les porcs en Amérique du Nord (H1N1, H1N2, H3N2), mais de multiples introductions de VIA de l'homme ont a conduit à une vaste diversité IAV au ....

Protocole

Tous les porcs utilisés pour la collecte des données suivantes ont été protégés en vertu de la Commission institutionnelle soin et l'utilisation des animaux Ohio State University (utilisation animale numéro de protocole 2009A0134-R1).

1. Préparation de transport viral moyen de prélèvement des échantillons et flacons

1. Ajouter 37 g de Brain Heart Infusion à 900 ml d'eau purifiée et bien mélanger avec une barre d'agitation et d'agitateur magnétique tout en chauffant à 70 ° C pour dissoudre complètement la poudre.
2. Autoclaver le bouillon à 121 ° C pendant 15 min. Laisser refroidir sur la paillasse jusqu'....

Résultats

L'utilisation réussie de cette méthode donne des résultats RRT-PCR qui, accompagnée de l'utilisation d'un contrôle interne lors de l'extraction de l'ARN et RT-PCR, montrent des échantillons ne contiennent des inhibiteurs de PCR de tout débris de l'environnement ramassé lors de l'échantillonnage. Après inoculation échantillon, puits d'isolement du virus devraient être libres de débris de l'environnement visible de l'échantillon. Il ya un accord raisonnable entre les résultats RRT-P.......

Discussion

Prélèvement d'échantillons provenant de porcs en utilisant des écouvillons nasaux polyester pointe est avéré utile dans la conduite de la surveillance IAV; Cependant, l'utilisation de la procédure de l'écouvillon nasal entrave les efforts de surveillance en raison de l'utilisation obligatoire de un piège à la retenue. Lingettes nasales représentent un raffinement des techniques porcine actuelles d'échantillonnage pour minimiser le stress sur les personnes et les porcs lors de la collecte de l'éch.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
BBL Brain Heart Infusion	Becton, Dickinson and Company	211059
Pénicilline G Sel de sodium	MP Biomedicals, LLC	021194537	1500 u/mg
Sulfate de streptomycine	AMRESCO LLC	0382
Gentamicin Solution	Mediatech, Inc.	30-005-CR	50 mg/ml
Amphotéricine B Solution	Fisher	S 24 25	250 μg/ml
Sulfate de kanamycine	Teknova	K2105	5000 μg/ml
TPP Système Rapid Filtermax TPP	Techno Plastic Products AG  ;	99150
Nalgen Flacons de diagnostic	Thermo Scientific	342002-9025	PEHD avec fermeture en PP blanc
Éponge de gaze Dermacea, 8 plis	Covidien	441211	5,08 cm & fois 5,08 cm (2 in. & times ; 2 in)  ;
Gants d’examen en nitrile	Saftey Choice	19-170-010 (A-D)