Réponse immunitaire efficace dépend de mobilisation rapide des leucocytes du sang vers le site de l'infection ou de blessure. Enquêter la migration des leucocytes in vivo est cruciale pour la compréhension de la base moléculaire de la migration des leucocytes transendotheliale et l'interaction avec l'endothélium vasculaire. Une approche puissante implique microscopie intravitale sur des souris transgéniques exprimant des protéines fluorescentes dans les cellules d'intérêt.
Ici, nous présentons un protocole pour les monocytes et les neutrophiles d'imagerie dans la gfp CR1 / poids iv de la souris injectée avec CX 3 oranges neutrophiles marqués par un colorant avec un microscope confocal inversé. Films time-lapse recueillies auprès de 30 minutes à plusieurs heures d'imagerie permettre à l'analyse du comportement des leucocytes dans les veines mésentériques sous les deux conditions stables et inflammatoires. Nous décrivons également les étapes pour induire localement inflammation des vaisseaux sanguins avec TLR2 / TLR1 agoniste Pam3SK4 et surveiller la subsequent recrutement des neutrophiles et des monocytes.
La technique présentée peut également être utilisé pour contrôler d'autres populations de leucocytes et étudier molécules impliquées dans le recrutement des leucocytes ou la traite à l'aide d'autres stimuli ou des souris transgéniques.