Method Article

Une méthode simple pour l'extraction des échantillons d'eau automatisée en phase solide pour immunologique analyse des petits polluants

DOI:

10.3791/53438

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January 1st, 2016

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1Centre Suisse d'Electronique et de Microtechnique, 2Department of Chemistry and Applied Biosciences, ETH Zurich, 3Department of Information Technology and Electrical Engineering, ETH Zurich

In This Article

Summary

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Un protocole d’extraction et de pré-concentration d’œstradiol à partir d’échantillons d’eau à l’aide d’un système automatisé et miniaturisé est présenté.

Abstract

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Une nouvelle méthode pour l'extraction en phase solide (SPE) des échantillons d'eau de l'environnement est proposé. Le prototype développé est rentable et conviviale, et permet d'effectuer des SPE rapide, automatisée et simple. La solution de pré-concentré est compatible avec l'analyse par immuno-essai, avec une faible teneur en solvant organique. Un procédé est décrit pour l'extraction et la pré-concentration de l'hormone naturelle 17β-oestradiol dans les échantillons d'eau de 100. SPE en phase inverse est effectuée avec sorbant octadécyl-silice et l'élution est effectuée avec 200 ul de methanol à 50% v / v. Eluant est dilué par addition de di-eau pour réduire la quantité de methanol. Après avoir préparé manuellement la colonne SPE, la procédure globale est effectuée automatiquement dans 1 h. A la fin du procédé, la concentration en estradiol est mesurée en utilisant un dosage immuno-sorbant lié à une enzyme du commerce (ELISA). Pré-concentration 100 fois et on obtient la teneur en méthanol dans seulement 10% v / v. Recouvrements complets de la moléculesont atteints avec 1 ng / L échantillons enrichis déminéralisée et synthétiques eau de mer.

Introduction

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La préparation des échantillons est une étape importante dans tout processus analytique. En particulier, l'élimination des effets de matrice, la diminution des interférences, et l'enrichissement de l'analyte sont nécessaires pour obtenir des résultats précis et d'atteindre de faibles limites de détection. Perturbateurs endocriniens (PE) sont particulièrement préoccupantes en raison de leur action sur les organismes vivants, même si les niveaux actuels à de très faibles dans l'environnement. L'hormone naturelle 17β-estradiol est présent sur la pollution de l'eau de l'UE Watch List et sujettes à être ajouté à la liste des substances prio....

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Protocol

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Remarque: Le protocole suivant décrit la SPE effectué sur 100 ml d'eau échantillon avec C18 sorbant et l'élution avec 50% v / v de methanol. L'échantillon enrichi est dilué pour atteindre 10% v / v de méthanol avant l'analyse avec un immuno-enzymatique (ELISA) kit.

1. Préparation des réactifs

  1. Préparer les échantillons d'eau
    1. Avant toute autre étape, filtrer chaque échantillon de 100 ml d'eau avec des filtres de taille de 0,2 um des pores.
    2. Addition de l'échantillon avec une concentration souhaitée par dilution volume approprié de solution de référence dans un volume d'eau. Par ex....

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Results

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La reproductibilité de la garniture de matière de sorption a été évaluée par séchage et pondérer le sorbant pipeté dans des flacons en verre et le résultat est montré sur la figure 1. La reproductibilité du moment de l'injection a été testé pour 100 ml d'échantillons, comme représenté sur la Figure 2. Concentration initiale et pré- concentré échantillons enrichis ont été déterminées en utilisant un kit ELISA commercial pour 17β-estradiol.......

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Discussion

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Un nouveau procédé pour la préparation d'échantillons d'eau suivie d'une analyse immunologique utilisant a été proposé. L'instrument permet d'effectuer extraction en phase solide de manière automatisée et conviviale.

La filtration de l'échantillon d'eau avant son injection dans le système est critique. Toutes les particules encore présentes dans la solution seraient potentiellement provoquer l'obstruction du réseau fluidique et obstruer la colonne SPE. Une aut.......

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Disclosures

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Acknowledgements

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Ce travail a été financé par le septième programme-cadre FP7/2007-2013 de l’Union européenne dans le cadre de la convention de subvention n° 265721. Les auteurs remercient le RIKILT Institute for Food Safety (NL) pour son soutien dans ce projet.

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Membrane filtrante 0.2 &mu ; m taille des poresMerck MilliporeGNWP04700Pour la filtration des échantillons
Membrane en nylon 11 &mu ; m taille des poresMerck MilliporeNY1104700Pour colonne SPE
Poinçon de biopsie jetable 5 mmBudget médical39302439
Nucleodur C18 ec  ;Macherey Nagel713550.0150 &mu ; m diamètre des particules
Eau de mer synthétiqueSigma AldrichSSWS500-500ML
MéthanolVWR
17bêta-estradiol étalonEnzo Life Science300 ng/ml
17bêta-estradiol ELISA kitEnzo Life ScienceADI-900-00896 puits, plage 30 - 3 000 ng/L

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water. J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).
  2. Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E.

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Solid Phase ExtractionAutomated SPEWater Sample AnalysisImmunoassay CompatibilityEstradiol DetectionOctadecyl Silica SorbentMethanol ElutionELISA AnalysisEnvironmental MonitoringPollutant Pre concentration

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