High Throughput Assay pour examiner les préférences de ponte de l&#39;individu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Résumé

Ce protocole décrit un test à haut débit pour tester les préférences de ponte de Drosophila melanogaster à une résolution d’un seul animal. Ce test fournit une plate-forme simple, efficace et évolutive pour identifier les gènes et les composants de circuit qui contrôlent un processus de prise de décision simple.

Résumé

Récemment, la préférence de la drosophile ponte a émergé comme un modèle génétiquement traitable pour étudier les bases neurales des processus de prise de décisions simples. Lors de la sélection des sites pour déposer leurs œufs, les mouches femelles sont capables de classer l'attractivité relative de leurs options et en choisissant les "plus de deux produits." Cependant, la plupart des essais de préférence ponte ne sont pas pratiques si l'on veut adopter une approche de dépistage génétique systématique à la recherche de la base de circuits qui sous-tend ce processus de prise de décision simple, comme ils sont et laborieux à mettre en place basée sur la population. Pour augmenter le débit de l'étude des préférences de ponte des femelles simples, nous avons développé personnalisés chambres que chacun peut les préférences de ponte simultanément dosage allant jusqu'à trente individu vole ainsi qu'un protocole qui assure chaque femelle a un taux de ponte élevé (de sorte que leur préférence est facilement discernable et plus convaincante). Notre approche est simple à exécuteret produit des résultats très cohérents. En outre, ces chambres peuvent être équipées de différents accessoires pour permettre l'enregistrement vidéo des animaux de ponte et de fournir de la lumière pour les études de optogénétique. Cet article fournit les plans pour la fabrication de ces chambres et la procédure pour la préparation des mouches à doser dans ces chambres.

Introduction

Drosophila melanogaster est un organisme modèle génétique puissant pour étudier la base neurale des comportements. Le développement rapide d’outils génétiques permettant de manipuler les neurones de manière ciblée et l’émergence d’outils d’analyse comportementale sophistiqués ont considérablement amélioré notre capacité à disséquer les mécanismes de circuit qui sous-tendent les processus de transformation sensori-motrice de plusieurs comportements innés et appris^1-3.

La ponte de drosophile est un modèle approprié pour étudier la base neurale de processus simples de prise de décision. En particulier, il a été d....

Protocole

1. Préparation de mouches à doser

1. Culture vole sur la mélasse standards / media à la semoule de maïs incubateur réglé à 25 ° C et 65% d'humidité. Prenez soin de ne pas surcharger les flacons. Par exemple, mettre 8 femmes et 6 hommes dans un flacon alimentaire étroite.
   Note: "flacon alimentaire étroite» utilisée ici a un diamètre intérieur de 2,3 cm. Nous généralement distribué environ 10 ml de nourriture à la mouche dans chaque flacon. La recette de la nourriture à la mouche, nous avons utilisé est décrit ici: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.html.
2. 2 - 3 jours après les femelles eclosion, préparer de....

Résultats

Les chambres de ponte sont composés de plusieurs pièces: un morceau substrat ( en bas), un diviseur (milieu) pièce, une charge ( en haut) pièce, et 2 portes coulissantes (Figure 1A - D). Ces pièces sont utilisées pour indépendamment les mouches de configuration et des substrats avant des expériences de ponte. Figure 1F montre comment les flacons devraient regarder quand mouches femelles sont prêtes pour la ponte. Quand les mouches ont le choix entre un s.......

Discussion

Les chambres et les protocoles décrits ici ont plusieurs améliorations par rapport à des essais de ponte précédents. Tout d'abord, ils augmentent le débit de dosage préférences des animaux isolés de manière significative. Chaque chambre peut doser 30 femmes célibataires et il faut moins d'une heure à mettre en place. D'autre part, ils augmentent la cohérence des préférences de ponte par rapport aux méthodes antérieures. La normalisation des dimensions de l'arène, la taille des substrats de ponte, et la d.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Agarose ultrapure  ;	Invitrogen	16500-500
Sucrose	Sigma	S0389
Bain-marie  ;	Fisher	15-462-6Q
LifeCam Cinema webcam	Microsoft	H5D-00013
LED rouges	Cree	C503B-RAN-CA0B0AA1
Chambres de ponte Supports	sur
Supports de LED	sur mesure
(étroits)	Genesee	32-116 av. J.-C

de caméra mesure Supports de LED sur mesure Flacons de mouches sur mesure .