Induction of Experimental encéphalomyélite allergique chez la souris et l&#39;évaluation de la distribution des maladies dépendant des cellules immunitaires dans divers tissus

Julia Barthelmes; Nadja Tafferner; Jennifer Kurz; Natasja de Bruin; Michael J. Parnham; Gerd Geisslinger; Susanne Schiffmann

doi:10.3791/53933

Article de méthode

Induction of Experimental encéphalomyélite allergique chez la souris et l'évaluation de la distribution des maladies dépendant des cellules immunitaires dans divers tissus

DOI :

10.3791/53933

⸱

8 mai 2016

Julia Barthelmes^*¹ , Nadja Tafferner^*² , Jennifer Kurz² , Natasja de Bruin² , Michael J. Parnham² , Gerd Geisslinger¹ , Susanne Schiffmann²

¹Institute of Clinical Pharmacology, Goethe University Hospital Frankfurt, ²Project Group for Translational Medicine & Pharmacology, Fraunhofer IME

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

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Ce manuscrit décrit les méthodes d’induction et de notation du modèle expérimental d’encéphalomyélite auto-immune (EAE), ainsi que l’évaluation de la distribution des cellules immunitaires et des niveaux de cytokines à ARNm dans les ganglions lymphatiques, la rate, le sang et la moelle épinière à l’aide de la cytométrie en flux et de la PCR quantitative, respectivement, à diverses phases de la maladie.

Résumé

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La sclérose en plaques est présumée être une maladie inflammatoire auto-immune qui se caractérise par la formation de lésions dans le système nerveux central (SNC), résultant en une déficience cognitive et motrice. encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE) est un modèle animal utile de la sclérose en plaques, car elle est aussi caractérisée par la formation de lésions dans le système nerveux central, un trouble moteur et est également entraîné par des réactions auto-immunes et inflammatoires. L' un des modèles EAE est induite par un peptide dérivé de la protéine de myéline oligodendrocyte (MOG) _35-55 chez la souris. Les souris EAE développent un cours de maladie progressive. Ce cours est divisé en trois phases: la phase préclinique (jour 0-9), l'apparition de la maladie (jour 10 - 11) et la phase aiguë (jour 12-14). Sclérose en plaques et l'EAE sont induites par les lymphocytes T autoréactifs qui infiltrent le système nerveux central. Ces cellules T sécrètent des chimiokines et des cytokines qui conduit au recrutement d'autres cellules immunitaires. Par conséquent, la distribution des cellules immunitaires dans la moelle épinière dendant les trois phases de la maladie a été étudiée. Pour mettre en évidence le point de la maladie à laquelle l'activation / prolifération / accumulation de cellules T, les cellules B et les monocytes commence le temps, la distribution des cellules immunitaires dans les ganglions lymphatiques, la rate et le sang a également été évaluée. En outre, les niveaux de plusieurs cytokines (IL-1, IL-6, IL-23, TNFa, IFNy) dans les trois phases de la maladie ont été déterminées, afin de mieux comprendre les processus inflammatoires de la maladie. En conclusion, les données fournissent un aperçu du profil fonctionnel des cellules immunitaires au cours EAE pathologie.

Introduction

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la sclérose en plaques (MS) et son modèle d'animal correspondant, encéphalomyélite auto-immune expérimentale (EAE), présentent des changements de la neuroinflammation auto-immunes du système nerveux central (SNC). Les lésions précoces de sclérose en plaques et EAE actives sont caractérisées par la présence de cellules immunitaires infiltrés. L'étiologie de la SEP demeure inconnue, mais est largement considérée comme impliquant la destruction de la myéline médiée par les cellules T autoréactives. Ces cellules T autoréactives sécrètent des cytokines pro-inflammatoires et des chimiokines qui attirent d'autres cellules immunitaires telles que les cellules B, ....

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Protocole

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ÉTHIQUE DÉCLARATION: Nos procédures expérimentales sont approuvées par le Comité d'éthique du Regierungspräsidium Darmstadt (Allemagne) et confirment les réglementations nationales et européennes. Tous les efforts ont été faits pour minimiser les souffrances des animaux et de réduire le nombre d'animaux utilisés.

1. EAE Modèle

Induction du modèle EAE
1. Utilisez 10 à 13 semaines d'âge 129S4 femme / SvJae × C57BL / 6 pour l'induction de l'EAE.
2. Donner à la souris une injection sous - cutanée, dans la partie supérieure et le bas du dos, de la MOG ₃₅ encéphalitogénique _{- 55} ....

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Résultats

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La figure 1 donne un aperçu schématique des différentes méthodes décrites dans cet article. 1) Les souris reçoivent une injection de MOG antigène _35-55 et développent des symptômes cliniques initiales après 10,7 ± 0,3 jours ^28. Une évolution de la maladie représentant des souris EAE est représenté sur la figure 1. 2) Divers tissus (rate, ganglions lymphatiques, de la moelle épinière lombaire) et le .......

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Discussion

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Le modèle EAE décrit ici a reçu le plus d' attention comme un modèle de sclérose en plaques et est couramment utilisé pour tester des stratégies thérapeutiques pour MS ^32. La maladie de la souris présente de nombreuses caractéristiques cliniques et histologiques de la sclérose en plaques et est provoquée par l'induction d'une auto-immunité à des antigènes neuronaux. La sensibilisation aux antigènes de la myéline est associée à un dysfonctionnement du cerveau du sang barrière et, par conséquent, l&.......

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Déclarations de divulgation

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MJP est consultant chez Xellia et chez Leo Pharmaceuticals.

Remerciements

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Ce travail a été soutenu par le Groupe de formation à la recherche de la Fondation Else Kröner-Fresenius (EKFS) Translational Research Innovation - Pharma (TRIP) et par le « Landesoffensive zur Entwicklung wissenschaftlich-ökonomischer Exzellenz (LOEWE), Schwerpunkt : Anwendungsorientierte Arzneimittelforschung » du Land de Hesse.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Système de détection de séquence ABI Prism 7500 ;	Applied Biosystems, Austin, États-Unis		système de PCR quantitative
Accutase	Sigma Aldrich Munich, Allemagne	A6964	solution de détachement cellulaire
CD3-PE-CF594	BD, Heidelberg, Allemagne	562286
CD4-V500	BD, Heidelberg, Allemagne	560782
CD8-eFluor650	eBioscience, Francfort, Allemagne	95-0081-42
CD11b-eFluor605	eBioscience, Francfort, Allemagne	93-0112-42
CD11c-AlexaFluor700	BD, Heidelberg, Allemagne	560583
CD19-APC-H7 ;	BD, Heidelberg, Allemagne	560143
CD45-Vioblue ;	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	130-092-910
CompBeads	BD, Heidelberg, Allemagne	552843	billes de compensation
Collagenase A	Sigma Aldrich Munich, Allemagne	C0130
Étalon de comptage absolu cytométrique ;	Polyscience, Eppelheim, Allemagne	BLI-580-10
Configuration du cytomètre et billes de suivi ;	BD, Heidelberg, Allemagne	642412
DNase I	Sigma Aldrich Munich, Allemagne	D5025
EAE Kit	Hooke Laboratories, Lawrence, États-Unis	EK2110
F4/80-PE-Cy7 ;	BioLegend, Fell, Allemagne	123114
First Strand ;	Thermo Scientific, Schwerte, Allemagne	K1612
Fc receptor-1 bloquant le tampon ;	Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Allemagne	130-092-575
Cytométrie en flux standard de comptage absolu	Polyscience, Eppelheim, Allemagne	580
Logiciel FlowJo v10 ;	Treestar, Ashland, États-Unis		Logiciel de cytométrie en flux
LSRII/Fortessa ;	BD, Heidelberg, Allemagne		Cytomètre en flux
Ly6G-APC-Cy7 ;	BD, Heidelberg, Allemagne	560600
Solution de lysinge ;	BD, Heidelberg, Allemagne	349202
Maxima SYBR Green ;	Thermo Scientific, Schwerte, Allemagne	K0221	colorant fluorescent de liaison à l’ADN.
Mini kit RNeasy ;	Qiagen, Hilden, Allemagne	74104	Kit d’extraction d’ARN

Kit de synthèse d’ADNc

Références

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McFarland, H. F., Martin, R. Multiple sclerosis: a complicated picture of autoimmunity. Nat Immunol. 8, 913-919 (2007).
Proudfoot, A. E. Chemokine receptors: multifaceted therapeutic targets. Nat Rev Immunol. 2, 106-115 (2002).
Mihara, M., Hashizume, M., Yoshida....

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Mots-clés

Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Multiple Sclerosis Model Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein Complete Freunds Adjuvant Pertussis Toxin Injection Lymph Node Isolation Spinal Cord Dissection Spleen Immune Cells Flow Cytometry Analysis Cytokine Expression Analysis

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