Administration intra-trachéale de<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; Dans les modèles de souris pour étudier Airway Inflammation

Résumé

Nous démontrons la procédure d’inoculation intra-trachéale d’Haemophilus influenzae dans les voies respiratoires inférieures de souris. Il s’agit d’un outil très utile pour étudier les voies de signalisation qui régulent l’inflammation des voies respiratoires dans des modèles murins.

Résumé

Ici, nous décrivons une procédure détaillée pour efficacement et livrons directement Haemophilus influenzae dans les voies respiratoires inférieures des souris. Nous démontrons la procédure de préparation H. influenzae inoculum, instillation intra-trachéale de H. influenzae dans le poumon, la collecte du liquide de lavage broncho-alvéolaire (BALF), l' analyse des cellules immunitaires dans le BALF et l' isolement de l' ARN pour l' analyse différentielle de l' expression génique. Cette procédure peut être utilisée pour étudier la réponse inflammatoire pulmonaire à une bactérie, un virus ou des champignons. endotrachéale directe instillation est le plus souvent préféré aux procédures d'inhalation par voie nasale ou d'un aérosol, car il fournit plus efficacement l'inoculum bactérien dans les voies respiratoires inférieures avec moins d'ambiguïté.

Introduction

L'inflammation est un mécanisme immunitaire fondamental de la défense contre les agents infectieux. Il favorise l'élimination des agents pathogènes et la réparation des tissus endommagés. Il facilite également la récupération à un état ​​de santé normal ^1. Cependant, l' inflammation dérégulée conduit souvent à des maladies inflammatoires chroniques ^2. Inflammation des voies respiratoires est un facteur déclenchant diverses maladies pulmonaires telles que la maladie pulmonaire obstructive chronique (COPD), l' asthme et la fibrose pulmonaire ^3.

La non typable (non encapsulé) , Haemophilus....

Protocole

Toutes les expériences ont été réalisées en conformité avec les directives du Comité institutionnel des animaux soin et l'utilisation (IACUC) de l'Institut de recherche Baylor.

1. La culture non-typable Haemophilus influenzae (NTHi) et préparation de l'inoculum

1. Plaque de NTHi sur une plaque de gélose chocolat et maintenir la plaque à l' envers dans un incubateur à _CO2 humidifiée pendant une nuit à 37 ° C et 5% de CO _2. Le jour, après culture des bactéries dans un bouillon d'infusion cerveau-coeur. Ensuite, ajoutez 1 ml de bouillon dans un tube de 1,5 ml stérile.
2. Centr....

Résultats

Instillation intra-trachéale a donné lieu à un nombre nettement accru de leucocytes dans le LLBA (figure 1A, panneau de gauche) que l' installation avec une solution saline. L'analyse de comptage différentiel des leucocytes a clairement montré une infiltration accrue de neutrophiles (Figure 1, panneau de droite). L'analyse FACS des cellules dans le BALF a en outre confirmé l'augmentation du nombre de neutrophiles (figure 1B).

Discussion

Ici, nous décrivons un procédé unique et peu invasive pour inoculer les poumons de souris par un pathogène bactérien du poumon. Nous démontrons que cette procédure peut être utilisée pour étudier la fonction des différents gènes en utilisant des souris qui sont déficientes en gènes des voies de signalisation inflammatoires. Cette procédure peut également être utilisée pour étudier les réponses inflammatoires à des infections virales et fongiques pulmonaires. Les avantages de cette procédure par rapport aux autres méthod.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Plaque de gélose au chocolat	Fisher Scientific	CAS50-99-7
Dextrose Anhydre	Themo Scientific	R01300
Héparine	Hospira,Inc	RL-3010
Solution rapide habile	Sigma	GS500-500ML
Aiguille de seringue 20/26G  ;	BD(	REF305115/175)
Seringue Iml	BD	REF 309602
Cathéter 20GA	BD	REF
Ciseaux de dissection, droits, 10 cm de long	kentscientific	INS600393
Iris Pince à iris dentelée, dentelée, 10cm de long	kentscientific	INS650915
Pince à épiler #5 Acier inoxydable, 11cm de long	kentscientific
10 % Formol	Fisher Scientific	CAS 67-56-1
Agarose	peqlab	35-1020
5ml polystyrène tubes à fond rond	BD	REF 352058
1,5 ml Tubes à centrifuger	Light Labs	A-7001-R
Reasy Mini  ; kit  ;	Qiagen	74104
Moteur de pestile à granulés (Homoginiseur de tissus)	Sigma	Z359971-1EA
Plaques de microtitration à 96 puits Fond en V	Thermo	2605
1X PBS	Gibco	10010-023
OneComp eBeads	eBioscience	01-1111-42
CD45.2-APC	eBioscience	17-0454-81	Dilution de travail 1:100
Ly-6G-eFlor 450	eBioscience	48-5931-82	Dilution de travail 1:100
BSA	HyClone	SH30574.03
Tampon de lyse RBC (10X)	Biolegend	420301
de coloration aqua fixable en direct/mort	Invitrogen	L-34957
EDTA (0.5M)	lifetechnologies	15575-020
CD16/ CD32 FcBlock	BD	553142
Facs tubes polystyrène tube à fond rond	BD	352052
Formaldéhyde	Polyscience	4018

381433 INS600095 Kit