Article de méthode

Un modèle de souris de Retinal Ischémie-reperfusion Grâce à une élévation de la pression intraoculaire

DOI :

10.3791/54065

14 juillet 2016

Dans cet article

Résumé

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Cet article décrit un procédé d'induction de la rétine lésion d'ischémie-reperfusion par une pression intra-oculaire élevée chez les souris. Rétinal lésion d'ischémie-reperfusion par une pression intra-oculaire élevée permet de modéliser des pathologies humaines caractérisées par l'oxygène compromise et la fourniture des nutriments dans la rétine, ce qui permet aux chercheurs d'étudier les mécanismes cellulaires et des traitements potentiels pour des maladies humaines de l'unité neuro-vasculaire rétinien.

Résumé

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Retinal ischémie-reperfusion (I / R) est un processus physiopathologique contribuant à des dommages cellulaires dans plusieurs affections oculaires, y compris le glaucome, la rétinopathie diabétique et les occlusions vasculaires rétiniennes. modèles murins de I / R blessures fournissent des idées importantes dans les mécanismes et les stratégies de traitement pour I blessures / R humain, en particulier en ce qui concerne les dommages neurodégénérative dans l'unité neurovasculaire rétinienne. Présenté ici est un protocole pour induire rétinienne I / R blessures chez les souris par élévation de la pression intraoculaire (PIO). Dans ce protocole, la chambre antérieure oculaire est canulée avec une aiguille, à travers laquelle coule le goutte à goutte d'un réservoir de solution saline élevée. L'utilisation de cette goutte à goutte pour élever la PIO au-dessus de la pression artérielle systolique artérielle, un praticien arrête temporairement le flux sanguin rétinien interne (ischémie). Lorsque la circulation est rétablie (reperfusion), par le retrait de la canule, de graves dommages cellulaires ensuive, ce qui entraîne en fin de compte dans la neurodégénérescence de la rétine. stud récentes démontrent l'inflammation, la perméabilité vasculaire, et la dégénérescence des capillaires comme des éléments supplémentaires de ce modèle. Par rapport aux méthodes I / R rétiniennes alternatives, telles que la ligature artérielle rétinienne, rétinienne I / R blessures par PIO élevée offre des avantages dans sa spécificité anatomique, tractability expérimentale, et l'accessibilité technique, se présentant comme un outil précieux pour l'examen de la pathogenèse et le traitement neuronal dans l'unité neuro-vasculaire rétinien.

Introduction

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Rétinal ischémie-reperfusion (I / R) caractérise de nombreuses pathologies rétiniennes humaines, y compris le glaucome, la rétinopathie diabétique et les occlusions vasculaires rétiniennes 1. Dans rétinienne I / R, réduction du flux sanguin (ischémie) dans la vascularisation rétinienne crée un état ​​d'hypersensibilité rétinienne à l' oxygène et d' autres nutriments, précipitant oxydatif sévère et lésions inflammatoires lorsque la circulation est ensuite rétablie (reperfusion) 2. La rétine neurale apparaît particulièrement vulnérable à ces changements, avec la neurodégénérescence rétinienne étant peut-être le trait le plus saillant d....

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Protocole

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Déclaration éthique: Toutes les procédures ont été effectuées en conformité avec les lignes directrices énoncées par le Comité institutionnel de protection et de l'utilisation des animaux de l'Université Johns Hopkins.

Nota: Les souris utilisées pendant le tournage sont C57BL / 6 de Jackson, bien que d'autres souches ou espèces de rongeurs peuvent également être utilisés. Lors de l'utilisation d'autres souches ou espèces, il faut savoir que des doses d'anesthésie et de blessures timeline peuvent varier. Il est important d'adapter les conditions I / R pour accueillir la souche, des espèces et des variations expé....

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Résultats

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Les effets neurodégénératifs de la rétine I / R par PIO élevée sont généralement évalués en utilisant deux approches standard. NeuN immunomarquage des noyaux neuronaux a révélé une perte de cellules neuronales significative après I / R insulte (Figure 1). En bref, les yeux énucléés 7 jours après I / R ont été fixés dans le paraformaldehyde, étiqueté avec le marqueur des cellules neuronales NeuN, et toute-monté. Les images ont été capturées en utilisant la microscopie con.......

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Discussion

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Retinal I / R blessures par une PIO élevée a prouvé son utilité dans la modélisation des dommages cellulaires et le dysfonctionnement, en particulier la neurodégénérescence, dans l'unité neurovasculaire rétinienne rongeur. Cette procédure fournit un tissu de commande robuste et est facilement accessible en termes de sophistication technique. Il a été noté dans ce domaine et d' autres modèles de blessures I / R que l' augmentation de la pression et la durée de l' ischémie peut augmenter la gravité des ble.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs n’ont aucune divulgation.

Remerciements

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Ce travail a été soutenu par des subventions de recherche des National Institutes of Health (EY022383 et EY022683; EJD) et subvention de base (P30EY001765), imagerie et Microscopie Core Module.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Héparine sodique injectable, USPAbraxis Pharmaceutical Products1 000 USP/ml
BSS Solution d’irrigation stérileAlcon Laboratories, Inc.9007754-0212
Balance de poche numérique SC-2 kgAmerican Weigh Scales, Inc.SC-2 kg
Tropicamide Ophthalmic Solution USP 1 %Bausch + Lomb1 % (10 mg/ml)
Chlorhydrate de proparacaïne Solution ophtalmique USP, 0,5Bausch + Lomb0,5 % (5 mg/ml)
INTRAMEDIC Tube en polyéthylèneBecton Dickinson and Company427400Diamètre intérieur : 427400
30 G 1/2 Aiguilles PrecisionGlideBenton Dickinson and Company
BC Seringue TB de 1 ml, pointe mince avec aiguille biseautée intradermique, 26 g x 3/8Benton Dickinson and Company309625
BD Seringue Luer-Lok TipBenton Dickinson and Company309653
Microscope Zeiss OPMI Visu 200/S8Carl Zeiss AG000000-1179-101
Seringue stérileCorning Inc.CLS4312240,20 et micro ; m
Durasorb UnderpadsCovidien103823 x 24 pouces
AlcoolPrep Covidien68182 plis,
Medium Student Dumont #5 ForcepsFine Science Tools91150-20
Hartman HemostatsFine Science Tools13002-10
Primary Set, Macrobore, Prepierced Y-Site, 80 InchHospira12672-28
Saline tamponnée au phosphate pH 7,4 (1x)Invitrogen10010-049500 ml
Eau distilléeInvitrogen15230-204500 ml
C57BL/6JSouris The Jackson Laboratory664
AnaSed Injection : Solution stérile de xylazineLLOYD, Inc.20 mg/ml
Gelée lubrifiante, soluble dans l’eau bactériostatiqueMediChoiceSachet de 3 grammes
NAMIC Manchon de surveillance de la pression angiographiqueCollecteur Navilyst Medical, Inc.70039355Collecteur à 5 soupapes avec sept ports femelles
Goniosoft, hypromellose 2,5 % émollient ophtalmique Solution : hydroxypropylméthylcelluloseOCuSOFT, Inc.2,5 % (25 mg/ml)
Ketaset CIII : Chlorhydrate de kétaminePfizer, Inc.100 mg/ml
Trans-Pal I.V. Support  ;Pryor Products372Équipé d’une extension en acier inoxydable de 60 cm fabriquée à la maison
Acépromazine : Injection de maléate d’acépromazine, USPVet One10 mg/ml
de chirurgie V-Top/Hydraulique réglableVSSI100-4041-21
Raccord de tube Luer Mâle à Luer MâleWarner Instruments64-1579
de 500 ml  %305106 Table

Références

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  1. Osborne, N. N., et al. Retinal ischemia: mechanisms of damage and potential therapeutic strategies. Prog Retin Eye Res. 23 (1), 91-147 (2004).
  2. Bonne, C., Muller, A., Villain, M. Free radicals in retinal ischemia. Gen Pharmacol. 30 (3), 275-280 (1998).
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Mots-clés

l vation de la pression intraoculairecanulation de la chambre ant rieureperfusion d h parine sodiquemesure de la distension oculaireimmunomarquage NeuNvaluation par lectror tinographieimagerie par microscopie confocaleunit neurovasculaire r tiniennefixation de la canule chirurgicale

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