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Article de méthode

Mesure de temps de survie dans

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DOI :

10.3791/54126

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22 juillet 2016

Dans cet article

Résumé

Les rotifères sont des zooplanctons microscopiques utilisés comme modèles dans les études écotoxicologiques et de vieillissement. Nous fournissons ici un protocole pour une mesure puissante et reproductible du temps de survie chez les rotifères Brachionus. La synchronisation des conditions de culture sur plusieurs générations est particulièrement importante car l’état maternel affecte le cycle vital de la progéniture.

Résumé

Rotifers sont des zooplanctons cosmopolites microscopiques utilisés comme modèles dans les études écotoxicologiques et sur le vieillissement en raison de leurs nombreux avantages tels que leur courte durée de vie, leur facilité de culture et leur parthénogenèse qui permet la culture clonale. Cependant, la prudence est de mise lors de la mesure de leur temps de survie, car il est affecté par l’âge maternel et les conditions d’alimentation maternelles. Nous fournissons ici un protocole pour une mesure puissante et reproductible du temps de survie chez les rotifères Brachionus suite à une synchronisation minutieuse des conditions de culture sur plusieurs générations. Empiriquement, une mauvaise synchronisation entraîne une mortalité précoce et une diminution progressive du taux de survie, ce qui entraîne une faible puissance statistique. En effet, dans de telles conditions, la restriction calorique (RC) n’a pas réussi à prolonger de manière significative la durée de vie de B. plicatilis, bien que la longévité induite par la RC ait été démontrée avec des échantillons de rotifères bien synchronisés dans des études passées et présentes. Ce protocole est probablement utile pour d’autres modèles d’invertébrés, y compris la mouche des fruits Drosophila melanogaster et le nématode Caenorhabditis elegans, car des effets sur l’âge maternel ont également été rapportés chez ces espèces.

Introduction

Les rotifères sont microscopiques zooplancton cosmopolite (<1 mm) qui constituent le phylum rotifères 1. Ils ont un plan de corps simple composé d'environ 1000 cellules somatiques, ainsi qu'un appareil de ciliaire de roue comme caractéristique appelée la couronne, qui est utilisé pour la locomotion et l'alimentation. La plupart des rotifères appartiennent à des classes Monogononta ou Bdelloidea, qui contiennent environ 1.600 et 500 espèces, respectivement 2. Rotifères Monogonont ont généralement deux phases de la reproduction sexuée et asexuée (parthénogenèse cyclique), tandis que les rotifères bdelloides reproduisent par parthénogen....

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Protocole

1. Préparation des milieux

Remarque: Utilisez la moitié diluée Brujewicz eau de mer artificielle de la salinité de 16,5 ppt (PSU). Autres seawaters artificiels sont aussi fréquemment utilisés pour la culture Brachionus rotifères 25,26.

  1. Ajouter du NaCl 454 mM, 26 mM de MgCl2, 27 mM MgSO4, 10 mM de KCl et 10 mM de CaCl2 à 4,5 litres d' eau distillée (volume final sera de 5 L). Vous pouvez également utiliser l'eau de dilution désionisée au lieu de l'eau distillée. Ajouter CaCl 2 après dissolution de tous les autres sels.
  2. Préparer le M NaHCO3....

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Résultats


La figure 1 montre les courbes de survie représentatives des populations mal synchronisées (sur deux répétitions). Dans cette expérience, les rotifères étaient soit tous les jours nourris [groupe ad libitum (AL)] ou tous les autres jours (IF groupe). La médiane de survie était de 13 et de 18 jours dans l'AL et si des groupes, respectivement. Bien qu'il soit bien connu que IF prolonge la durée de vie du rotifères, cette expérience n'a pas réussi.......

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Discussion

Le protocole actuel décrit un procédé pour mesurer le temps de survie chez les rotifères Brachionus. L'étape critique est la synchronisation des conditions de rotifères sur plusieurs générations. Lorsque rotifères expérimentaux sont bien synchronisés, une courbe I de survie de type typique est observé avec très peu de mortalité précoce comme rapporté dans plusieurs études antérieures 18,24,37,38. Les écarts-types de leur temps de survie deviennent donc plus petit par rapport à rotifères synchroni.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Nous sommes reconnaissants à George Jarvis, Martha Bock, et Bette Hecox-Lea, Laboratoire de biologie marine, pour leur aide dans le tournage.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Chlorure de sodiumWako190-13921
Chlorure de magnésiumWako136-03995
Sulfate de magnésiumWako131-00427
Chlorure de potassiumWako168-22111
Chlorure de calciumWako035-00455
Bicarbonate de sodiumWako199-05985
Bromure de sodiumWako190-01515
Filtre à membrane (0,45 & micro ; PlaqueMilliporeHAWP04700
6 puits, non traitéeThomas Scientific6902D01à fond plat
, 48 puits, non traitéeThomas Scientific6902D07Tetraselmis à fond plat
, LivingCarolina Biological Supply Company152610
PRISM 6GraphPad SoftwareVersion 6.0d
de culture , Plaque de culture

Références

  1. Wallace, R. L., Snell, T. W., Ricci, C., Nogrady, T. Rotifera Vol.1: Biology, ecology and systematics. , 2nd edn, SPB Academic Publishing. (2006).
  2. Segers, H. Annotated checklist of the rotifers (Phylum Rotifera), with notes on nomenclature, taxonomy and distribution. , Magnoli....

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Réimpressions et autorisations

Étiquettes

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