Amélioration Technique Swiss-laminage pour la préparation Intestinal des tissus pour immunohistochimique et immunofluorescence Analyses

Agnieszka B. Bialkowska; Amr M. Ghaleb; Mandayam O. Nandan; Vincent W. Yang

doi:10.3791/54161

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Article de méthode

Amélioration Technique Swiss-laminage pour la préparation Intestinal des tissus pour immunohistochimique et immunofluorescence Analyses

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DOI :

10.3791/54161

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13 juillet 2016

Agnieszka B. Bialkowska^*¹ , Amr M. Ghaleb^*¹ , Mandayam O. Nandan¹ , Vincent W. Yang¹^,²

¹Department of Medicine, Stony Brook University School of Medicine, ²Department of Physiology & Biophysics, Stony Brook University School of Medicine

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

l'identification et la localisation des cellules épithéliales le long de la paroi de la muqueuse intestinale précis sont essentiels pour définir différentes lignées cellulaires. l'imagerie correcte des tissus intestinaux est cruciale pour l'identification des motifs d'expression de protéine avec une résolution maximale. Cette étude vise à définir les méthodes et les conditions optimales pour les tissus intestinaux de traitement de la souris.

Résumé

Il est important de comprendre le rôle des facteurs qui régulent l’homéostasie épithéliale intestinale et la réponse aux lésions et à la régénération. La littérature actuelle décrit plusieurs approches méthodologiques différentes pour obtenir des images de tissus intestinaux pour la validation des données. Dans cet article, nous décrivons un protocole commun relatif à la dérivation et au traitement des tissus intestinaux de souris. La bonne fixation des tissus intestinaux et les techniques de Swiss-roll qui améliorent la morphologie épithéliale intestinale sont abordées. Le traitement post-résection et la réorientation des tissus intestinaux intégrés sont essentiels pour obtenir des blocs inclus dans la paraffine qui présentent des caractéristiques structurelles intestinales intactes après la section. La technique du Swiss-rolling aide à l’évaluation histologique des coupes intestinales ou coliques complètes examinées. La capacité de différencier les caractéristiques structurelles intestinales peut être essentielle dans les mesures quantitatives de l’inflammation intestinale et de la tumorigenèse sur toute la longueur. Enfin, les coupes enrobées de paraffine sont idéales pour un traitement robuste utilisant des méthodes de détection immunohistochimiques et immunofluorescentes. Les coupes immunohistochimiques non fluorescentes fournissent une image vibrante du tissu détaillant différentes caractéristiques structurelles cellulaires, mais n’offrent pas de flexibilité pour les expériences de colocalisation intracellulaire. Plusieurs canaux fluorescents peuvent être utilisés de manière appropriée avec la détection immunofluorescente pour des expériences de co-localisation, ce qui soutient les études mécanistes.

Introduction

L'épithélium intestinal de mammifère comprend une seule couche de cellules prismatiques. Dans l'intestin grêle, les cellules proliférantes sont confinés dans les cryptes tandis que les cellules différenciées occupent la région de villosités. Cependant, parce qu'il n'y a pas de villosités dans le gros intestin, les cellules proliférantes sont localisées au fond des cryptes et des cellules différenciées occupent la partie supérieure des cryptes. L'épithélium intestinal subit une reconstitution rapide (environ 3-5 jours) qui est entraîné en continu par division des cellules prolifératives dans les cryptes. Les cellules prolifératives des cryptes ne s....