Nous décrivons une méthode pour produire un modèle animal de fibrose hépatique chez le rat, et évaluons le degré de fibrose par examen histologique du foie. Le modèle peut être utilisé pour étudier le développement d’une maladie du foie ainsi que pour tester l’efficacité d’agents anti-fibrotiques potentiels.
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Article de méthode
Le diméthylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Modèle chez le rat
Dans cet article
Résumé
Résumé
Quatre à six semaines vieux rats mâles Wistar ont été utilisés pour produire des modèles animaux de fibrose du foie. Le processus nécessite quatre semaines d'administration de 10 mg / kg diméthylnitrosamine (DMN), étant donné intrapéritonéale pendant trois jours consécutifs par semaine. injections intra-péritonéales ont été effectuées dans la hotte comme DMN est un hépatotoxine et cancérigène connu. Ce modèle présente plusieurs avantages. Tout d'abord, les changements du foie peuvent être étudiés de manière séquentielle ou à des étapes particulières d'intérêt. Deuxièmement, le stade de la maladie du foie peut être contrôlée par la mesure de sérum alanine aminotransférase (ALT) et aspartate aminotransférase (AST) enzymes. En troisième lieu, la gravité des dommages au foie à différents stades peut être confirmé par le sacrifice des animaux à des moments désignés, suivie d'un examen histologique des tissus du foie Trichome tachés de Masson. Après quatre semaines de DMN dosage, le score typique de la fibrose est de 5 à 6 sur l'échelle Ishak. Le modèle peut être reproduit de manière cohérente et a étélargement utilisé pour évaluer l'efficacité d'agents anti-fibrotiques potentiels.
Introduction
DMN est une toxine spécifique du foie puissant. Son métabolisme, la distribution tissulaire, et la capacité de causer des blessures aux foies de rats a été signalée par Magee 1, et le mécanisme des dommages des hépatocytes et la mort cellulaire par apoptose a été décrit par Pritchard et Butler 2. L' administration intermittente de ce composé a été rapporté pour induire une fibrose du foie chez les chiens et les rats 3,4.
Les mécanismes et des changements morphologiques de la fibrose hépatique ont été largement étudiés en utilisant ce modèle. Dans les premières études utilisant le rat, le traitement de ....
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Protocole
Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvés par le comité de protection des animaux et l'utilisation de l'École des sciences appliquées, Temasek Polytechnic.
1. Préparation du DMN
- Pipette 200 pi de DMN (1 g / ml de solution mère) et ajouter 19,8 ml de PBS pour préparer une solution de DMN 10 mg / ml pour l'injection.
Remarque: DMN est cancérogène. Utilisez une hotte pour préparer le DMN et effectuer les injections animales.
2. Injection intrapéritonéale de DMN
- Utilisez des rats mâles Wistar d'un poids moyen de 150-200 g. Acclimate rats pour 4 - 7 jours avant le début ....
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Résultats
les rats traités de DMN perdre du poids et deviennent moins vigoureux avec poil hérissé. Il y a une perte significative de poids corporel moyen de DMN rats traités; première détectable après 2 semaines de traitement DMN et cette différence reste par semaine 3 et 4 , après traitement de DMN (figure 1a). Comme les rats reçoivent DMN au fil des semaines successives, des dommages au foie fait qu'il devient plus petit. L'indice du foie; qui est le pour cent du poids d.......
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Discussion
Nous avons décrit un procédé pour rendre un modèle animal de la fibrose hépatique et d'évaluer la gravité de la fibrose hépatique. Il est important de délivrer la dose correcte de DMN et respecter le calendrier des injections intraperitoneales hebdomadaires. Comme l'expérience progresse, il est essentiel de peser les rats et recalculer la dose au début de chaque semaine des injections de DMN. Gardez à l'esprit que DMN est toxique et doit être manipulé dans l'armoire de fumées. Nous effectuons les injecti.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun intérêt financier concurrents.
Remerciements
Les auteurs remercient le ministère de l’Éducation de Singapour pour son soutien financier, numéro de subvention MOE2010-IF-1-025.
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Diméthylnitrosamine | Wako | 147-03781 | |
| Formalin | Sinopharm chemicals | F63257009 | |
| Ethanol | Sigma | 64-17-5 | |
| Xylene | Fisher | 1330-20-7 | |
| Masson trichomes colorants Aniline | |||
| Blue | Electron Microscopy Sciences | #42755 | |
| Acide Fuschin | Microscopie électronique Sciences | RT42685 | |
| Microscopie | électronique rouge écarlate | #26905 | |
| Acide phosphotungstique hydraté | ALFA AESAR | ALFA40116.4 | |
| Acide phosphomolybdique hydraté | Sigma SG | 221856-25G | |
| Hématoxilyne de fer de Weigert | Merck | 1.15973.0002 | |
| DPX Support de montage | Merck | HX066873 | |
| Processeur de tissus | Leica | Leica TP 1020 | |
| Machine d’enrobage | Sakura | ; Sakura Tissue Tek TEC5 Système | |
| Microtome | Leica | Leica RM 2235 | |
| Analyseur de test vétérinaire | Idexx | Vet Test 8008 |
Références
- Magee, P. N. Toxic liver injury; the metabolism of dimethylnitrosamine. Biochem J. 64 (4), 676-682 (1956).
- Pritchard, D. J., Butler, W. H. Apoptosis-the mechanism of cell death in dimethylnitrosamine-induced hepatotoxicity. J Pathol. 158 (3), 253-260 (....
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Réimpressions et autorisations
