Le diméthylnitrosamine Induced Liver Fibrosis Modèle chez le rat

Summary

Nous décrivons une méthode pour produire un modèle animal de fibrose hépatique chez le rat, et évaluons le degré de fibrose par examen histologique du foie. Le modèle peut être utilisé pour étudier le développement d’une maladie du foie ainsi que pour tester l’efficacité d’agents anti-fibrotiques potentiels.

Abstract

Quatre à six semaines vieux rats mâles Wistar ont été utilisés pour produire des modèles animaux de fibrose du foie. Le processus nécessite quatre semaines d'administration de 10 mg / kg diméthylnitrosamine (DMN), étant donné intrapéritonéale pendant trois jours consécutifs par semaine. injections intra-péritonéales ont été effectuées dans la hotte comme DMN est un hépatotoxine et cancérigène connu. Ce modèle présente plusieurs avantages. Tout d'abord, les changements du foie peuvent être étudiés de manière séquentielle ou à des étapes particulières d'intérêt. Deuxièmement, le stade de la maladie du foie peut être contrôlée par la mesure de sérum alanine aminotransférase (ALT) et aspartate aminotransférase (AST) enzymes. En troisième lieu, la gravité des dommages au foie à différents stades peut être confirmé par le sacrifice des animaux à des moments désignés, suivie d'un examen histologique des tissus du foie Trichome tachés de Masson. Après quatre semaines de DMN dosage, le score typique de la fibrose est de 5 à 6 sur l'échelle Ishak. Le modèle peut être reproduit de manière cohérente et a étélargement utilisé pour évaluer l'efficacité d'agents anti-fibrotiques potentiels.

Introduction

DMN est une toxine spécifique du foie puissant. Son métabolisme, la distribution tissulaire, et la capacité de causer des blessures aux foies de rats a été signalée par Magee ^1, et le mécanisme des dommages des hépatocytes et la mort cellulaire par apoptose a été décrit par Pritchard et Butler ^2. L' administration intermittente de ce composé a été rapporté pour induire une fibrose du foie chez les chiens et les rats ^3,4.

Les mécanismes et des changements morphologiques de la fibrose hépatique ont été largement étudiés en utilisant ce modèle. Dans les premières études utilisant le rat, le traitement de ....

Protocol

Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvés par le comité de protection des animaux et l'utilisation de l'École des sciences appliquées, Temasek Polytechnic.

1. Préparation du DMN

1. Pipette 200 pi de DMN (1 g / ml de solution mère) et ajouter 19,8 ml de PBS pour préparer une solution de DMN 10 mg / ml pour l'injection.
   Remarque: DMN est cancérogène. Utilisez une hotte pour préparer le DMN et effectuer les injections animales.

2. Injection intrapéritonéale de DMN

1. Utilisez des rats mâles Wistar d'un poids moyen de 150-200 g. Acclimate rats pour 4 - 7 jours avant le début ....

Results

les rats traités de DMN perdre du poids et deviennent moins vigoureux avec poil hérissé. Il y a une perte significative de poids corporel moyen de DMN rats traités; première détectable après 2 semaines de traitement DMN et cette différence reste par semaine 3 et 4 , après traitement de DMN (figure 1a). Comme les rats reçoivent DMN au fil des semaines successives, des dommages au foie fait qu'il devient plus petit. L'indice du foie; qui est le pour cent du poids du foie a.......

Discussion

Nous avons décrit un procédé pour rendre un modèle animal de la fibrose hépatique et d'évaluer la gravité de la fibrose hépatique. Il est important de délivrer la dose correcte de DMN et respecter le calendrier des injections intraperitoneales hebdomadaires. Comme l'expérience progresse, il est essentiel de peser les rats et recalculer la dose au début de chaque semaine des injections de DMN. Gardez à l'esprit que DMN est toxique et doit être manipulé dans l'armoire de fumées. Nous effectuons les injecti.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Diméthylnitrosamine	Wako	147-03781
Formalin	Sinopharm chemicals	F63257009
Ethanol	Sigma	64-17-5
Xylene	Fisher	1330-20-7
Masson trichomes colorants Aniline
Blue	Electron Microscopy Sciences	#42755
Acide Fuschin	Microscopie électronique Sciences	RT42685
Microscopie	électronique rouge écarlate	#26905
Acide phosphotungstique hydraté	ALFA AESAR	ALFA40116.4
Acide phosphomolybdique hydraté	Sigma SG	221856-25G
Hématoxilyne de fer de Weigert	Merck	1.15973.0002
DPX Support de montage	Merck	HX066873
Processeur de tissus	Leica	Leica TP 1020
Machine d’enrobage	Sakura	; Sakura Tissue Tek TEC5 Système
Microtome	Leica	Leica RM 2235
Analyseur de test vétérinaire	Idexx	Vet Test 8008