Fluorescent modèle de souris orthotopique de cancer du pancréas

Résumé

Une procédure visant à implanter orthotopiquement des cellules cancéreuses du pancréas exprimant des protéines fluorescentes vertes (PANC-1 GFP) dans le pancréas de souris Balb-c Ola Hsd-Fox1nu afin d’évaluer la progression tumorale et les métastases est présentée ici.

Résumé

Le cancer du pancréas reste l'un des cancers pour lesquels la survie n'a pas sensiblement améliorées au cours des dernières décennies. Seulement 7% des patients diagnostiqués va survivre plus de cinq ans. Afin de comprendre et imiter le microenvironnement des tumeurs pancréatiques, nous avons utilisé un modèle murin orthotopique du cancer du pancréas qui permet l'imagerie non-invasive de la progression tumorale en temps réel. Les cellules cancéreuses pancréatiques exprimant la protéine fluorescente verte (GFP PANC-1) ont été suspendues en sous - sol matrice de la membrane, une concentration élevée, (par exemple, Matrigel HC) avec des milieux sans sérum, puis injectées dans la queue du pancréas par laparotomie. La suspension de cellules dans la matrice de membrane basale à haute concentration devient une substance analogue à un gel une fois qu'il atteint la température ambiante; Par conséquent, il se gélifie quand il entre en contact avec le pancréas, ce qui crée un joint d'étanchéité au niveau du site d'injection et d'empêcher toute fuite de la cellule. La croissance des tumeurs et des métastases dans d'autres organes sont surveillés en temps réelles animaux en utilisant la fluorescence. Il est essentiel d'utiliser les filtres appropriés pour l'excitation et l'émission de la GFP. Les étapes de l'implantation orthotopique sont détaillées dans cet article afin que les chercheurs peuvent facilement répliquer la procédure chez la souris nude. Les principales étapes de ce protocole sont la préparation de la suspension cellulaire, l' implantation chirurgicale, et toute fluorescente du corps dans l' imagerie in vivo. Ce modèle orthotopique est conçu pour évaluer l'efficacité de nouveaux traitements sur les tumeurs primaires et métastatiques.

Introduction

Le cancer du pancréas est diagnostiqué avec une fréquence accrue par rapport à d' autres cancers et est le 4 ^e principale cause de décès liés au cancer aux Etats-Unis. A partir du moment du diagnostic, plus de 90% des patients meurent dans les cinq ans ^1,2. Actuellement, l' ablation chirurgicale de la tumeur est le seul remède pour le cancer du pancréas, mais moins de 20% des patients sont admissibles à subir une intervention chirurgicale principalement parce que , au moment du diagnostic de la maladie est à un stade avancé et a métastasé ^3,4. L'absence de symptômes spécifiques rend le cancer du pancréas une maladie silenc....

Protocole

Le protocole décrit ci-dessous est exécuté sous la direction et l'approbation du Comité des soins et de l'utilisation des animaux de l'Université Western. Toutes les expériences sont réalisées en conformité avec toutes les directives pertinentes, la réglementation et les organismes de réglementation.

1. Culture cellulaire

1. Préparation de Milieu Complet
   1. L'utilisation d'une enceinte de sécurité biologique de classe II, préparer un milieu complet en ajoutant aseptiquement sérum fœtal bovin (FBS) et de la pénicilline streptomycine (P / S) à une bouteille de milieu RPMI 500 ml. Mélanger d....

Résultats

Cette méthode décrit une implantation chirurgicale orthotopique de cellules fluorescentes cancéreuses pancréatiques humaines, en mettant l' accent sur ​​la préparation de la suspension cellulaire pour l' injection, l' anesthésie appropriée pour les rongeurs, la livraison de la suspension cellulaire par laparotomie, et l'utilisation de fluorescence in vivo l' imagerie du petit animal. La détection d'un signal vert de fluorescence (signal GFP) entre deux et.......

Discussion

Nous décrivons un modèle murin orthotopique de cancer du pancréas qui exprime la GFP, permettant ainsi une surveillance non invasive de la croissance tumorale en utilisant corps in vivo , l' imagerie de fluorescence (figure 1). Cette technique nous permet de suivre l'évolution de la tumeur en temps réel (Figure 3); il peut être un outil important pour les chercheurs d'étudier l'efficacité thérapeutique des nouveaux agents contre le cancer du pancréas. Un autre a.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
RPMI media 1640	Caisson Labs	RPL03-500ML
Sérum de veau fœtal  ;	Gibco	10437-077
Pénicilline Streptomycine  ;   ;	Thermo Ficher Sci	15140-122
Matrigel HC membrane basale, haute concentration	Corning	354248
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	39010
Alcare ou Foamed Antiseptic	Handrub Steris	639680
DPBS (solution saline tamponnée au phosphate de Dubelcco)  ;	Thermo Ficher Sci	21300025
TB Seringue 27 G 1/2	Becton Dickinson	305620
Isoflurane	Blutler Schein	50562
Ketoprofen	Fort Dodge
, 5,5" mayo droite  ;	Henry Schein	22-1600
PANC-1 Lignée cellulaire GFP  ;	Système d’imagerie pour petits animaux Anticancer, Inc
: iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, Californie.		Système d’imagerie des petits animaux pour observer la tumeur fluorescente chez les animaux vivants

Ciseaux chirurgicaux pour la santé animale