Une méthode non-invasive et technique non-intensif pour Induction et phénotypage of Experimental pneumonie bactérienne chez les souris

Summary

Plusieurs procédés ont été décrits dans la littérature pour la modélisation de la pneumonie bactérienne chez les souris. Nous décrivons ici un peu coûteux, un procédé rapide et non invasif destiné à induire une pneumonie par aspiration ( par exemple, inhalation) , d'un inoculum bactérien pipeté dans l'oropharynx. méthodes en aval pour l'évaluation de la réponse immunitaire innée pulmonaire sont également détaillées.

Abstract

Bien que la pneumonie communautaire reste un problème majeur de santé publique, des modèles murins de la pneumonie bactérienne ont récemment facilité les avancées précliniques importantes dans notre compréhension de la pathogenèse cellulaire et moléculaire sous - jacent. Modèles in vivo de souris capturent la physiologie intégrée et de la résilience de la réponse de défense de l' hôte en d' une manière non révélée par, ex vivo approches simplifiées alternatives. Plusieurs procédés ont été décrits dans la littérature pour l'inoculation des bactéries intra-pulmonaire chez la souris, y compris la pulvérisation en aérosol, l'administration intranasale, par voie buccale endotrachéale canulation dans des conditions «aveugle» et visualisé et transcutanée endotrachéale canulation. Toutes les méthodes ont leurs mérites et les limites relatives. Ici, nous décrivons en détail un procédé non invasif sur le plan technique non intensif, peu coûteuse et rapide pour la délivrance intratracheale de bactéries qui implique l' aspiration ( par exemple, inhalation) , par la sourisd'un inoculum infectieux pipeté dans l'oropharynx sous anesthésie générale. Cette méthode peut être utilisée pour l'administration pulmonaire d'une grande variété d'agents biologiques et chimiques non-caustique, et il est relativement facile à apprendre, même pour les laboratoires ayant une expérience minimale préalable avec les procédures pulmonaires. En plus de décrire la méthode de pneumonie par aspiration, nous fournissons également des procédures étape par étape pour le dosage de l'subséquente in vivo la réponse immunitaire innée pulmonaire de la souris, en particulier, des méthodes pour quantifier la clairance bactérienne et la réponse immunitaire cellulaire des voies respiratoires infectées. Cette approche intégrée et simple d'évaluation de la pneumonie permet une évaluation rapide et robuste de l'effet des manipulations génétiques et environnementaux sur l'immunité innée pulmonaire.

Introduction

Pneumonie communautaire demeure la principale cause de décès par infection aux Etats - Unis, avec peu de changements dans les taux de mortalité au cours des 40 dernières années , en dépit des améliorations en matière de vaccination et des stratégies antibiotiques ^1,2. Malgré l'absence de progrès sensibles au niveau de la santé publique, au cours des dernières années, des progrès considérables ont été réalisés dans notre compréhension de la pathogenèse moléculaire et cellulaire de la pneumonie, avec un grand nombre de ces avancées rendues possibles par l'utilisation de modèles de souris de l'infection pulmonaire. La traçabilité génétique de la s....

Protocol

Toutes les expériences ont été effectuées en conformité avec la Loi sur la protection des animaux et de la politique US Public Health Service sur Humane soin et l'utilisation des animaux de laboratoire après examen par le soin des animaux et l'utilisation du Comité des NIEHS.

1. Préparation de K. pneumoniae Culture

Attention: Effectuer toutes les étapes d'un niveau de biosécurité 2 (NSB2) hotte ou autre zone désignée de NSB2 et jeter les déchets conformément aux directives de BSL2 institut.

1. Pour la croissance de la suspension de K. pneumoniae, décongeler un stock de gly....

Results

C57BL / 6 ont été infectées avec 2000 UFC de K. 43816 pneumoniae (sérotype 2) par aspiration de l' oropharynx dans les poumons. A cette dose, les souris commencent généralement à montrer des symptômes cliniques post-infection 12-24 h , y compris la léthargie, fourrure ébouriffée, et la perte de poids de 5 à 10% (figure 2A). Dans 48-72 h post-infection, la plupart des souris montrent des symptômes de la maladie et de la morbidité qui est généralement pré.......

Discussion

Les modèles murins de la pneumonie bactérienne, en partenariat avec le ciblage de gènes et dans les interventions biologiques et pharmacologiques in vivo, ont fourni des informations critiques dans la réponse de la défense de l' hôte pulmonaire. De grands progrès ont été accomplis en particulier dans notre compréhension des chimiokines et des molécules d'adhésion qui régissent le recrutement des neutrophiles à l'espace aérien infecté ^10,11. Modèles in vivo de la pneumoni.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Klebsiella pneumoniae, sérotype 2	ATCC	43816
Bouillon de soja tryptique	Becton Dickenson	211825
Excel Cathéters Safelet IV, 18 G x 1 1/4"	Claflin Medical Equipment	MEDC-031122
Hema 3 Solution 1	Fisher	23-122-937
Hema 3 Solution 2	Fisher	23-122-952
Hema 3 Fixative	Fisher	23-122-929
Seringues à tuberculine de calibre 27½	Fisher	14-826-87
Collecteurs de plasma d’héparine de lithium	Fisher	2675187
Épandeurs jetables en forme de L	Lab Scientific	DSC
1x PBS, pH 7,4	préparé sur place	n/a	Eau distillée (5 L), NaCl (40 g), KCl (1 g), Na2HPO4 (5,75 g), KH2PO4 (1 g)  ;   ;   ;
Tampon de lyse ACK	préparé en interne	n/a	NH4Cl (4,145 g), KHCO3 (0,5 g), EDTA (18,6 mg), porter jusqu’à 500 ml avec de l’eau distillée et un pH à 7,4