Cellules souches dérivées d’adipeux (ASCs) sont facilement isolées et récoltées dans la graisse des rats normaux. Feuilles de NCP peuvent être créés à l’aide de la cellule-fiche technique et peuvent être transplantés dans Zucker rats gras diabétiques présentant pleine épaisseur défauts avec OS exposé de l’épiderme et ensuite recouvert d’une double couche de peau artificielle.
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Article de méthode
Création et la Transplantation d’une feuille adipeux dérivées de cellules souches (ASC) dans un modèle de cicatrisation diabétique
Dans cet article
Résumé
Résumé
La peau artificielle a obtenu des résultats thérapeutiques considérables dans la pratique clinique. Toutefois, les traitements de peau artificielle pour plaies chez les diabétiques avec débit sanguin entravé ou grandes plaies pourraient être prolongées. Thérapies cellulaires sont apparus comme une nouvelle technique pour le traitement des ulcères diabétiques, et ingénierie cellulaire-feuille a amélioré l’efficacité de la transplantation de cellules. Plusieurs rapports ont suggéré que les cellules souches dérivées d’adipeux (ASCs), un type de cellules stromales mésenchymateuses (CSM), présentent un potentiel thérapeutique en raison de leur abondance relative dans les tissus adipeux et leur accessibilité pour la collection par rapport à MSCs provenant d’autres tissus. ASCs semblent donc être une bonne source de cellules souches pour un usage thérapeutique. Dans cette étude, les feuilles de l’ASC de la graisse adipeuse dans l’épididyme de rats normaux de Lewis ont été avec succès créés à l’aide de température Pétri et normal milieu de culture contenant de l’acide ascorbique. Les feuilles de l’ASC ont été transplantés à des rats diabétiques gras (ZDF), Zucker, un modèle de rat de diabète de type 2 et d’obésité, qui présentent une diminution la cicatrisation. Une blessure apparue sur la surface crânienne postérieure, feuilles de l’ASC ont été transplantées dans la plaie et une peau artificielle bicouche a servi à couvrir les feuilles. Rats ZDF qui a reçu les feuilles de l’ASC avaient mieux la guérison des plaies que les rats ZDF sans la transplantation des feuilles de l’ASC. Cette approche a été limitée car les feuilles de l’ASC sont sensibles aux conditions sèches, nécessitant le maintien d’un environnement humide. Par conséquent, la peau artificielle a servi à couvrir la feuille de l’ASC pour éviter le dessèchement. La greffe allogénique de feuilles de l’ASC en combinaison avec la peau artificielle pourrait également s’applique aux autres ulcères insolubles ou des brûlures, tels que ceux observés avec les maladies artérielles périphériques et maladie du collagène et peut être administrée aux patients qui souffrent de malnutrition ou utilisent des stéroïdes. Ainsi, ce traitement pourrait être la première étape visant à améliorer les options thérapeutiques pour diabétique wound healing.
Introduction
La population de patients diabétiques est en augmentation partout dans le monde et a atteint 400 millions en 2015,1; environ 15 à 25 % des patients atteints de diabète sont menacées par la progression d’un ulcère diabétique de bas-extrémité2. Les ulcères diabétiques de bas-extrémité sont insolubles et peuvent nécessiter une période thérapeutique prolongée avec formation de réadaptation après une récupération complète. Une période longue thérapie souvent se traduit par une réduction significative de la qualité de vie des patients. Ainsi, les nouvelles thérapies qui diminuent ou empêchent aggravation doivent être développé....
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Protocole
Tous les protocoles expérimentaux présentés ci-dessous ont été approuvés par le Comité du bien-être animal de la faculté de médecine de l'Université de médecine féminine de Tokyo et ont respecté toutes les exigences des Directives pour la bonne conduite des expériences sur les animaux.
1. Préparation des animaux, des instruments, des milieux de culture et des plats
- Préparez le milieu de culture complet en utilisant le minimum de milieu essentiel alpha contenant 20 % de sérum de veau fœtal (FBS) et 1 % de pénicilline/streptomycine. Conservez-le pendant plusieurs mois à 4 °C jusqu’à utilisation.
- Utilisez des rats ZDF mâl....
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Résultats
Ce protocole a tenté d’établir une nouvelle thérapie cellulaire pour plaies diabétiques insolubles. Brièvement (comme illustré à la Figure 1), SRAC allogéniques feuilles furent créés à partir des rats normaux, à l’aide de cellules feuilles ingénierie et ont été transplantées ensuite à l’aide d’une double couche de peau artificielle sur un défaut de pleine épaisseur de peau sur un rat diabétique. Images de microscopie photonique d’un bon exemple d’une feuille de la SRAC (<.......
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Discussion
Les étapes plus critiques pour cultiver avec succès une feuille SRAC sont comme suit : 1) la température doit être maintenue à environ 37 ° C au cours de la mise en culture sur les plats de la température de la culture. Lors de la création d’une feuille de la SRAC, chaque procédure a été effectuée sur un thermo-plaque de 37 ° C, et chaque réactif a été chauffé à 37 ° C pour empêcher les cellules de détacher spontanément le plat31. 2) les rats ZDF bénéficiaires doivent être surveillés pour empêcher.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs suivants divulguer des relations financières pertinentes à cette publication : Teruo Okano est fondateur et directeur du Conseil d’administration de cellule Seed Inc., dont les licences de technologie et brevets de l’Université médicale des femmes de Tokyo, et Teruo Okano et Masayuki Yamato sont parties prenantes dans l’Université de médecine de cellule Seed Inc. Tokyo féminines reçoit des fonds de recherche de cellule Seed Inc. Les autres auteurs déclarent qu’ils n’ont pas de relations financières pertinentes à cette publication.
Remerciements
Les auteurs remercient Dr Yukiko Koga du Department of Plastic and Reconstructive Surgery, Juntendo University School of Medicine, de donner des conseils pratiques. Nous remercions également M. Hidekazu Murata du centre de Tokyo les femmes diabétiques de Medical University School of Medicine excellent soutien technique. Cette étude a été financée par la création de centres d’Innovation pour l’avancée de programme de zones de recherche interdisciplinaire du projet pour les systèmes d’Innovation en développement « cellule feuille Tissue Engineering Center (CCCES) » du ministère de l’éducation, Culture, Sports, Science et technologie (MEXT) du Japon.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| &alpha ;-MEM glutamax | Invitrogen | 32571-036 | Carlsbad, CA |
| Sérum fœtal bovin (FBS) | Japan Bioserum Co Ltd. | S1650-500 | |
| Pénicilline/streptomycine | Life Technologies | 15140-122 | |
| Collagénase A | Roche Diagnostics | 10 103 578 001 | Mannheim, Allemagne |
| 60 cm2 Antenne de culture tissulaire Primaria | BD Biosciences | 353803 | Franklin Lakes, NJ |
| Dulbecco’s Phosphate Buffer Saline (PBS) | Life Technologies | 1490-144 | |
| 0,25 % Trypsine-éthylènediamine acide tétraacétique (EDTA) | Life Technologies | 25200-056 | |
| Acide L-ascorbique phosphate sel de magnésium n-hydraté | Wako | 013-19641 | |
| Boîte de culture sensible à la température de 35 mm (UpcellTM) | CellSeed | NUNC-174904 | Tokyo, Japon |
| Plaque microchaude (MP-1000) | Kitazato Science Co., Ltd. | 1111 | |
| Ventilateur mécanique pour rongeurs | Stoelting | #50206 | Wood Dale, IL |
| 4 % isoflurane | Pfizer Japon | 114-13340-3 | Tokyo, Japon |
| Peau artificielle (Pelnac® ; ) | Smith & Neveu | PN-R40060 | ; Tokyo, Japon |
| Pansement non adhésif (Hydrosite plus® ; ) | Smith & Neveu | 66800679 | Connu sous le nom d’Allevyn non-adhessing® ; aux États-Unis |
| 5-0 suture en nylon | Alfresa | EP1105NB45-KF2 | |
| 20 CELLSTAR TUBES | greiner bio-one | 227 261 | |
| 15 mL Tube à centrifuger | Corning Incorporated | 430791 | |
| 14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL | Hu-Friedy | P14 | Chicago, IL |
Références
- International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 7 ed.. , International Diabetes Federation. Brussels, Belgium. Available from: http://www.diabetesatlas.org/ (2015).
- Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).
- Zannettino, A. C., et al.
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Réimpressions et autorisations
