Article de méthode

Une approche efficace et Facile pour la production de micelles réversible Disulfure réticulés

8.4K vues

⸱

DOI :

10.3791/54722

⸱

23 décembre 2016

 ,  , 
1Department of Biochemistry & Molecular Medicine, University of California, Davis, 2UC Davis Comprehensive Cancer Center, University of California, Davis, 3Department of Internal Medicine, Division of Hematology and Oncology, University of California, Davis

Dans cet article

Résumé

Pour administrer des médicaments anticancéreux aux sites tumoraux avec une spécificité élevée et des effets secondaires réduits, de nouvelles méthodes basées sur les nanoparticules sont nécessaires. Ici, nous décrivons des micelles réticulées de disulfure qui peuvent être facilement préparées par oxydation médiée par le peroxyde d’hydrogène et sont capables de se dissocier efficacement dans un environnement tumoral réducteur pour libérer des charges utiles.

Résumé

Nanomédecine est une nouvelle forme de thérapie qui exploite les propriétés uniques des particules qui sont nanomètres échelle pour application biomédicale. Améliorer l'administration de médicaments pour maximiser les résultats thérapeutiques et de réduire les effets secondaires associés au médicament sont quelques-unes des pierres angulaires de la nanomédecine actuelle. Nanoparticules en particulier, ont trouvé une large application dans le traitement du cancer. Nanoparticules qui offrent un haut degré de flexibilité dans la conception, l'application et la production sur la base du microenvironnement de la tumeur devraient être plus efficaces avec la traduction rapide dans la pratique clinique. Le micellaire nano-support polymère est un choix populaire pour les applications de distribution de médicaments.

Dans cet article, nous décrivons un protocole simple et efficace pour la synthèse, des micelles réticulées disulfure drogue chargé basé sur l'auto-assemblage d'un copolymère bien défini amphiphile linéaire-dendritique (telodendrimer, TD). TD est constituée de polyéthylène glycol (PEG) comme segment hydrophile et un groupe d'acide cholique thiolé comme la fraction hydrophobe attachée par étapes de formation de noyau à un PEG de terminaison amine en utilisant la chimie des peptides à base de solutions. Les médicaments chimiothérapeutiques, tels que le paclitaxel (PTX), peuvent être chargés à l'aide d'un procédé d'évaporation de solvant standard. Le O 2 oxydation médiée a déjà été utilisé pour former disulfures liaisons transversales intra-micellaires de groupes thiol libres sur le TDs. Cependant, la réaction a été lente et pas réalisable pour la production à grande échelle. Récemment, une méthode d'oxydation de l' H 2 O 2 médiée a été explorée comme une approche plus réaliste et efficace, et il était 96 fois plus rapide que la méthode précédemment. En utilisant cette approche, 50 g de PTX-chargés, les nanoparticules réticulées disulfure ont été produits avec succès avec la distribution granulométrique étroite et une efficacité élevée de chargement de drogue. La stabilité de la solution micellaire obtenue est analysée en utilisant des conditions perturbatrices telles que la co-incubation avecvec un détergent dodécylsulfate de sodium, avec ou sans agent réducteur. Les micelles, réticulés disulfure chargés en médicament ont démontré une activité hémolytique inférieure par rapport à leurs homologues non réticulées.

Introduction

La nanotechnologie est un domaine en pleine émergence qui a bénéficié d' un certain nombre de domaines biomédicaux 1. Nanoparticules offrent des possibilités pour la conception et le réglage des propriétés qui ne sont pas réalisables avec d'autres types de traitements conventionnels. Nano-transporteurs améliorent la stabilité des médicaments contre la biodégradation, prolonger le temps de circulation de la drogue, à surmonter les problèmes de solubilité médicaments, et peuvent être ajustés pour la livraison ciblée de médicaments et pour les agents de co-distribution imagerie 1,2. systèmes de distribution à base de nanoparticules sont prometteurs dans l'imagerie et le traitement du cancer. Vasculatures tumorales sont leaky aux macromolécules et peuvent conduire à une accumulation préférentielle de circulation des nanoparticules sur les sites tumoraux par la perméabilité accrue et la rétention (EPR) Effet 3. Parmi les différents nano-supports (par exemple, des liposomes, des hydrogels, des polymères et des micelles) qui sont activement poursuivies comme supports pour des médicaments anticancéreux, des micelles polymères ont acquis une grande popularité au cours ee dernière décennie 4,5.

Les micelles polymériques sont un système thermodynamique qui, lors de l'administration par voie intraveineuse, peut éventuellement être diluée au-dessous de la concentration micellaire critique (CMC), conduisant à leur dissociation en unimères. stratégies de réticulation ont été utilisées pour réduire au minimum la dissociation micellaire en unimères. Cependant, les micelles excessivement stabilisées peuvent empêcher de libérer le médicament aux sites cibles, réduisant ainsi l'efficacité thérapeutique globale. Plusieurs approches chimiques ont été explorées pour rendre la réticulation dégradable en réponse à redox ou à des stimuli externes, tels que des liaisons disulfures réductibles 6,7 et pH-clivable 8 ou ester hydrolysable obligations 9,10.

Nous avons précédemment rapporté la conception et la synthèse de nanoparticules micellaires , comprenant de l' acide cholique dendritique (CA) et des séquences linéaires de polyéthylène glycol (PEG) , les copolymères appelés telodendrimers (TD) 15/11 . Ces TDs sont représentés comme PEG nK -Cay (où n = poids moléculaire en kilodaltons (K), y = nombre d'acide cholique (CA) unités). Ils sont caractérisés par leur petite taille, longue durée de conservation, et une grande efficacité dans les médicaments encapsulant tels que le paclitaxel (PTX) et doxorubicine (DOX) dans le noyau hydrophobe. Les éléments constitutifs de la TD, tels que le PEG, la lysine, et CA, sont biocompatibles, et la présence d'une couronne de PEG peut conférer un caractère nanoparticulaire "furtif", ce qui empêche l'absorption non spécifique des nanoparticules micellaires par le système réticulo-endothélial.

polymères linéaires-dendritique thiolées peuvent facilement être générés par l'introduction de cysteines dans le squelette du oligo-lysine dendritique de notre TDs standard. Cet article présente un protocole facile pour la production d'un système de délivrance de médicament micellaire réversiblement réticulé par introduction reticulations disulfure dans le noyau hydrophobe de Tou (figure 1).

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

déclaration éthique: Femme souris nude athymiques (souche Nu / Nu), 6-8 semaines, ont été achetés et conservés dans des conditions exemptes d'agents pathogènes selon les directives AAALAC et ont été autorisés à s'acclimater pendant au moins 4 jours avant toute expérience. Toutes les expériences sur les animaux ont été effectuées en conformité avec les directives institutionnelles et conformément au protocole n ° 07-13119 et n ° 09-15584, approuvé par l'utilisation des animaux et le Comité consultatif d'administration de soins à l'Université de Californie, Davis.

1. Synthèse de TD PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8

  1. Dans un ballon à fond rond, dissoudre MeO-PEG 5K NH2 (2 g, 0,4 mmol) dans 10-20 ml de diméthylformamide anhydre (DMF) et de froid sur la glace.
  2. Dans un récipient en verre, dissoudre 3 équiv. de 1-hydroxy-6-chloro-benzotriazole (HOBt), 3 équiv. de N, N '-diisopropylcarbodiimide (DIC) et 3 équiv. de (Fmoc) 2 Lys-OH anhydre DMF (10-15 ml). Agiter pendant 15-20 min sur une plaque d'agitation magnétique.
  3. Ajouter le mélange dans le ballon de réaction contenant le MeO-PEG 5K -NH 2. Retirer le bain de glace et on agite le mélange réactionnel pendant une nuit à température ambiante.
  4. Confirmer l'achèvement de la réaction par chromatographie sur couche mince (CCM) 16 et le test de Kaiser 17 (une couleur jaune indique l'absence de NH2 libre). Précipiter le produit polymère 1 (MeO-PEG 5 K Lys (Fmoc NH-2)) par addition d' environ 200 ml d'éther refroidi à la glace dans le ballon de réaction. Séparer le polymère précipité par centrifugation (6 min à 6000 x g et 4 ° C).
    1. Pour effectuer TLC, repérer les échantillons sur des plaques de CCM de gel de silice revêtues. En utilisant du dichlorométhane / méthanol (9: 1) comme phase mobile. Observer les taches sous une lampe UV après avoir développé les plaques de CCM. On peut également utiliser ninhydrine réactif de coloration pour visualiser les taches amine sur une plaque chauffante.
    2. Pour KaiLe test de ser, placez un peu de l'échantillon dans le tube de verre contenant le réactif de Kaiser. Faire chauffer à 100 ° C pendant 5 minutes et recherchez le changement de couleur (si la couleur de la solution reste jaune, puis la réaction est terminée).
  5. Re-dissoudre le produit dans du DMF anhydre (10-20 ml) et répéter la précipitation et centrifugation (voir étape 1.4).
  6. Répétez l'étape 1.5, puis laver le précipité de polymère à trois reprises avec de l'éther glacé.
  7. Transférer le précipité de polymère 1 à un ballon de réaction propre et raccorder le ballon à une source de vide élevé pour éliminer l'éther résiduel.
  8. Préparer et ajouter environ 20-30 ml de 20% (v / v) 4-méthylpipéridine dans le DMF en polymère intermédiaire 1. Remuer jusqu'à dissolution complète. Exécutez la réaction pendant 3 heures.
  9. Effectuer TLC 16 et le test de Kaiser (une couleur bleue confirme la présence de NH 2 libre) 17 (voir étape 1.4) pour confirmer la achèvementsn de la réaction. Si la réaction est terminée, passez à la précipitation de l' éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étapes 1,4-1,6).
  10. Sécher le produit polymère 2 (MeO-PEG 5K - Lys (NH 2) 2) sous vide.
  11. Effectuer un tour de plus de (Fmoc) 2 Lys-OH-accouplement sur l' intermédiaire 2 (étapes 1,1-1,7) pour générer des produits 3 (MeO-PEG 5K Lys (Lys (NH-Fmoc) 2) 2). De-protéger (étapes 01.08 à 01.10) les groupes Fmoc (4, Meo-PEG 5K Lys (Lys (NH 2) 2) 2) et deux (étapes 1,1-1,7) le (Fmoc) Lys (Boc) -OH à générer une polylysine dendritique de troisième génération (5, MeO-PEG-Lys - Lys 5k 2 - ((Fmoc) Lys (Boc)) 4) terminé par quatre groupes Boc et Fmoc sur une extrémité de la chaîne de PEG.
  12. Transférer le polymère intermédiaire obtenu 5 dans un ballon de réaction. dans la mesureballon de réaction eparate, préparer 1: 1 (v / v) d'acide trifluoroacétique (TFA) dans du dichlorométhane (DCM). Ajouter 15-20 ml d'un mélange 1: 1 TFA / DCM (volume / volume) du polymère intermédiaire 5. On agite le mélange jusqu'à ce que le polymère soit complètement dissous. Agiter pendant une 3 heures supplémentaires.
  13. Effectuer TLC 16 et le test de Kaiser (une couleur bleue confirme la présence de NH 2 libre) 17 (voir l' étape 1.4) pour confirmer l'achèvement de la réaction. Si la réaction est terminée, on évapore le mélange de polymère-dans-TFA / DCM avec de l'air jusqu'à l'obtention d'une solution visqueuse. Procéder à la précipitation de l' éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étapes 1,4-1,6). Sécher le produit polymère 6 (MeO-PEG 5k Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys (NH 2)) 4) sous vide.
  14. Polymère intermédiaire 6 dans un ballon de réaction de transfert. Utilisez environ 40 ml de DMF anhydre contenant 8 équiv. de N, N -diisopropylethylamine (DIEA) pour dissoudre le polymère intermédiaire 6. Dans un récipient en verre, dissoudre 12 équiv. de HOBt, 12 équiv. de DIC, et 12 équiv. de (Fmoc), Cys (Trt) -OH dans 20 à 25 ml de DMF anhydre. Agiter pendant 10-15 min, puis ajouter le mélange réactionnel dans le ballon de réaction contenant 6. Exécutez la réaction pendant la nuit.
  15. Confirmer l'achèvement de la réaction avec TLC 16 et le test de Kaiser (voir l' étape 1.4; une couleur jaune indique l'absence de NH2 libre) 17. Si la réaction est terminée, passez à la précipitation de l' éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étape 1,4-1,6), pour isoler le produit 7 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 - ((Fmoc) Lys - ((Fmoc) Cys (Trt))) 4.
  16. Effectuer Fmoc de protection sur 7, comme indiqué à l' étape 1.8, pour obtenir un produit 8 (PEG 5K Lys-Lys 2 - (Lys (NH 2) - (Cys (NH 2) (Trt))) 4). Couple (Fmoc) -PEG 2 -Suc-OH (linker "Ebes", 24 équiv.) Sur un couplage polymère intermédiaire en utilisant la procédure décrite ci - dessus pour HOBt / DIC médiation pour obtenir l' intermédiaire 9 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt) ) 4 (Ebes (NH-Fmoc)) 8).
  17. Effectuer un tour de plus de Fmoc de protection (étapes 1,6-1,8) pour obtenir l' intermédiaire 10 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 (Ebes (NH 2)) 8).
  18. Transférer le polymère intermédiaire 10 dans un ballon de réaction et ajouter du DMF anhydre (environ 30 à 40 ml) pour le dissoudre. Dans un autre ballon de réaction, dissoudre 24 équiv. de CAOSu (préparé selon le mode opératoire publié antérieurement) dans du DMF anhydre (20-30 ml) 18. Ajouter 48 équiv. de N, N - diisopropyléthylamine et laisser agiter pendant 10-15 min. Transférer le contenu dans le flacon de réaction contenant 10 et laisser la réaction run overnight.
  19. Confirmez l'achèvement de la réaction avec TLC 16 et le test de Kaiser (voir l' étape 1.4; une couleur jaune indique l'absence de NH2 libre) 17. Si la réaction est terminée, passez à la précipitation de l' éther, tel que mentionné pour le produit 1 (étapes 1,4-1,6) pour isoler le produit 11 (MEO-PEG 5K Lys-Lys 2 Lys 4 - (Cys (Trt)) 4 -Ebes 8 -CA 8). Dialyser dans de l'eau désionisée et on lyophilise l'échantillon pour donner une poudre blanche.
  20. Placer le polymère intermédiaire 11 dans un ballon de réaction. Préparer et ajouter 20 ml de TFA / 1,2-éthanedithiol (EDT) / triéthylsilane (SIT) / H 2 O (94 / 2,5 / 1 / 2,5, v / v) dans la solution de polymère. Incorporer le mélange jusqu'à dissolution complète. Exécutez la réaction pendant 4 heures. Confirmer l'achèvement de la réaction par CCM 16.
  21. Sous la hotte, souffler de l' air dans le polymère-TFA / EDT / TIS / H 2mélange O jusqu'à ce que la solution devient visqueuse. Procéder à la précipitation de l' éther, comme indiqué pour le produit 1 (étapes 1.4 à 1.6), pour isoler le produit final, 12 (PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8). Dissoudre dans de l'acétonitrile et lyophilisé pour donner une poudre blanche.

2. Préparation de micelles PTX-chargés

  1. Préparer un PTX-chargé PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 micelles en utilisant la méthode d'évaporation standard.
    1. Dissoudre 20 mg de DT avec une quantité différente de PTX (1-9 mg) dans 1 ml de chloroforme (CHCI3). Éliminer le solvant en utilisant un évaporateur rotatif pour obtenir un film de polymère homogène et sec. Reconstituer le film avec 1 ml de tampon phosphate salin (PBS) par vortex, puis par traitement aux ultrasons pendant 30 min à 40 kHz, le cas échéant, pour permettre la formation de micelles chargées de médicament.
    2. Ajouter 6 ul de 3% (p / p) H 2 O 2 (1 équiv. De free les groupes thiol) pour oxyder les groupes thiol sur le TD. Utilisez la solution micellaire pour une caractérisation plus poussée une fois que le niveau des groupes thiol libres reste à des valeurs constantes faibles, comme indiqué par le test de Ellman 19.
    3. On filtre la solution avec un filtre de 0,22 pm pour stériliser l'échantillon. Analyser la quantité de médicament chargée dans les micelles d'un 20 système HPLC après la libération des médicaments à partir des micelles en y ajoutant 9 fois l' acétonitrile et en effectuant 10 minutes de sonication. Utiliser une colonne HPLC C18 avec un mélange acétonitrile / eau comme phase mobile.
    4. Calculer la charge de médicament en fonction de la courbe d'étalonnage entre les valeurs de surface par HPLC et les concentrations du médicament standard 11.
      NOTE: L'efficacité de chargement est défini comme le rapport du médicament chargé dans les micelles de la teneur initiale en médicament.

3. Caractérisations de micelles

  1. Mesurer la répartition de la taille et de taille micelles avec une diffusion de lumière dynamique (DLS) instrument 29. Effectuer les mesures à la température ambiante et de maintenir la concentration de micelles à 1 mg / ml.
    REMARQUE: Pour effectuer l'analyse granulométrique, utilisez PBS comme vide, puis enregistrer la taille des particules pour les échantillons réels. Prenez les lectures en triple pour les échantillons, puis la moyenne des lectures.
  2. Utilisez les spectres de fluorescence pour mesurer la concentration micellaire critique (CMC) de PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 avant et après réticulation avec pyrène comme sonde fluorescente hydrophobe, comme décrit précédemment 13,21.
    NOTE: En règle générale, la concentration micellaire est comprise entre 5 × 10 -7 à 5 × 10 -4 M.

4. Stabilité des micelles en SDS avec ou sans agents réducteurs

  1. Préparer des solutions mères de dodécylsulfate de sodium (SDS) à une solution (7,5 mg / ml) et de disulfure de micelles réticulées (1,5 mg / ml) dans du PBS. Ensuite, uchanter les solutions mères, faire un mélange de solution dans laquelle la concentration finale SDS est à 2,5 mg / ml et la concentration de micelles est à 1,0 mg / ml.
  2. Mesurer la distribution de taille et la taille (comme indiqué à l'étape 3.1), des solutions micellaires, à des intervalles de temps prédéterminés, avec ou sans la présence de glutathion 10 mM (GSH).

5. hémolyse Assay

  1. Évaluer le potentiel hémolytique de micelles PTX-chargé, non-réticulés (PTX-MR) préparé selon une procédure publiée précédemment 11 et micelles réticulées PTX-chargés (PTX-RDR) en utilisant du sang frais citraté de souris nues recueillies à partir de la queue voile.
    1. Collecter des globules rouges par centrifugation des échantillons de sang (1,0 ml) à 1000 g pendant 10 min, les laver trois fois avec du PBS, puis remettre en suspension les culots cellulaires avec du PBS jusqu'à une concentration finale de 2%.
  2. Mélanger 200 pi de suspension d'érythrocytes avec des concentrations différentes (0,2 et 1,0mg / ml) de PTX-MR et PTX-DCMs, respectivement, et incuber pendant 4 heures à 37 ° C dans un agitateur incubateur.
  3. Centrifuger les mélanges micelles-érythrocytaires à 3000 xg pendant 5 min. Transférer 100 pl de surnageant de tous les échantillons dans une plaque à 96 puits. Mesurer l'absorbance de l'hémoglobine libre dans le surnageant à 540 nm en utilisant un lecteur de micro-plaque.
    NOTE: Les globules rouges incubées avec le Triton-100 (2%) et du PBS doivent être utilisées en tant que témoins positifs et négatifs, respectivement. Le pour cent de l'hémolyse des globules rouges est calculée avec la formule suivante: RBC hémolyse = (OD échantillon - OD contrôle négatif) / (contrôle positif OD - témoin négatif OD) x 100%.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Préparation et caractérisation des drogues chargé, micelles Disulfure réticulés

Amphiphiles polymères PEG 5K Cys 4 -Ebes 8 -CA 8 est un dendrimère susceptible de former un système micellaire disulfure réticulé pour la délivrance de médicaments anticancéreux. Structurellement, il est défini comme un oligomère dendritique d'acide cholique (domaine hydrophobe) reliés à une extrémité de la molécule liné...

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

Plusieurs nanoparticules ont été étudiés pour leur utilisation potentielle dans l'administration de médicaments. doxorubicine liposomale et le paclitaxel (PTX) chargé en sérumalbumine nano-agrégats humains sont parmi les nanotherapeutics approuvés par la FDA pour le traitement du cancer. Cependant, bien que cliniquement efficace, ces deux nanotherapeutics sont relativement "grande" taille, et ils ont tendance à s'accumuler dans le foie et les poumons. micelles polymériques avec des tailles de particule...

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

Y. Li et K.S.L. sont les inventeurs d’un brevet en instance sur des systèmes micellaires réticulés de manière réversible (demande de brevet américain 61/485,774). K.S.L. est le scientifique fondateur de LamnoTherapeutics Inc., qui prévoit de développer les nanothérapies décrites dans le manuscrit. Les autres auteurs ne déclarent aucun intérêt financier concurrent.

Remerciements

Les auteurs remercient Mme Alisha Knudson pour l’aide rédactionnelle. Ils tiennent également à souligner le soutien financier du NIH/NCI (3R01CA115483, à K.S.L.), du DoD PRMRP Award (W81XWH-13-1-0490, à K.S.L.), du NIH/NCI (1R01CA199668, à Y.L.) et du NIH/NICHD (1R01HD086195, à Y.L.).

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
MeO-PEG5K-NH2Rapp Polymere125000-2
Fmoc-Lys(Fmoc)-OHAaptecAFK107
Fmoc-Lys(Boc)-OHAnaspecAS-20132
Fmoc-Cys(Trt)-OHAapptecAAC105
DiméthylformamideFisher ScientificBP1160-4
Éther éthyliqueFisher ScientificE134-20
N,N-DiisopropylethylamineSigma AldrichD125806
Acide trifluoroacétiqueSigma AldrichT6508Corrosif, manipuler avec précaution
4-méthyl pipéridineAlfa-AesarL-02709
Ebes linkerAnaspecAS-61924
Acide choliqueSigma AldrichC1129
1,2-EthanedithiolSigma Aldrich02390Poignée à l’intérieur de la hotte. Gants d’eau de Javel après utilisation.
TriisopropylsilaneSigma Aldrich233781
Chloroforme (anhydre)Sigma Aldrich288306
Solution de peroxyde d’hydrogène 30 %Aaron IndustriesNA
HoBt-ClAaptecCXZ096
DICSigma AldrichD125407
Souris nues athymiques femelles (souche Nu/Nu), 6&ndash ; 8 semainesHarlan (Livermore, CA)

Références

  1. Zhang, L., et al. Nanoparticles in medicine: therapeutic applications and developments. Clin. Pharmacol. Ther. 83, 761-769 (2008).
  2. Wang, A. Z., Langer, R., Farokhzad, O. C. Nanoparticle Delivery of Cancer Drugs. Annu. Rev. Med. 63, 185-198 (2012).
  3. Iyer, A. K., Khaled, G., Fang, J., Maeda, H. Exploiting the enhanced permeability and retention effect for tumor targeting. Drug Disc. Today Targets. 11, 812-818 (2006).
  4. Morachis, J. M., Mahmoud, E. A., Almutairi, A. Physical and chemical strategies for therapeutic delivery by using polymeric nanoparticles. Pharmacol. Rev. 64, 505-519 (2012).
  5. Kamaly, N., Xiao, Z., Valencia, P. M., Radovic-Moreno, A. F., Farokhzad, O. C. Targeted polymeric therapeutic nanoparticles: design, development and clinical translation. Chem. Soc. Rev. 41, 2971-3010 (2012).
  6. Li, Y. L., et al. Reversibly stabilized multifunctional dextran nanoparticles efficiently deliver doxorubicin into the nuclei of cancer cells. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 48, 9914-9918 (2009).
  7. Miyata, K., et al. Block catiomer polyplexes with regulated densities of charge and disulfide cross-linking directed to enhance gene expression. J. Am. Chem. Soc. 126, 2355-2361 (2004).
  8. Chan, Y., Wong, T., Byrne, F., Kavallaris, M., Bulmus, V. Acid-labile core cross-linked micelles for pH-triggered release of antitumor drugs. Biomacromolecules. 9, 1826-1836 (2008).
  9. Rijcken, C. J., Snel, C. J., Schiffelers, R. M., van Nostrum, C. F., Hennink, W. E. Hydrolysable core-crosslinked thermosensitive polymeric micelles: synthesis, characterisation and in vivo studies. Biomaterials. 28, 5581-5593 (2007).
  10. Talelli, M., et al. Core-crosslinked polymeric micelles with controlled release of covalently entrapped doxorubicin. Biomaterials. 31, 7797-7804 (2010).
  11. Xiao, K., et al. A self-assembling nanoparticle for paclitaxel delivery in ovarian cancer. Biomaterials. 30, 6006-6016 (2009).
  12. Li, Y., et al. A novel size-tunable nanocarrier system for targeted anticancer drug delivery. J. Control. Release. 144, 314-323 (2010).
  13. Li, Y., et al. Well-defined, reversible disulfide cross-linked micelles for on-demand paclitaxel delivery. Biomaterials. 32, 6633-6645 (2011).
  14. Li, Y., et al. Well-defined, reversible boronate crosslinked nanocarriers for targeted drug delivery in response to acidic pH values and cis-diols. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 51, 2864-2869 (2012).
  15. Li, Y., et al. A smart and versatile theranostic nanomedicine platform based on nanoporphyrin. Nat. Commun. 5, (2014).
  16. Belenki, B. G., Gankina, E. S. Thin-Layer chromatography of polymers. J. Chromatogr. A. 141, 13-90 (1977).
  17. Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D., Cook, P. I. Color test for detection of free terminal amino groups in the solid-phase synthesis of peptides. Anal. Biochem. 34, 595-598 (1970).
  18. Pandey, P. S., Rai, R., Singh, R. B. Synthesis of cholic acid-based molecular receptors: head-to-head cholaphanes. J. Chem. Soc., Perkin Trans 1. , 918-923 (2002).
  19. Riddles, P. W., Blakeley, R. L., Zerner, B. Reassessment of Ellman's reagent. Methods Enzymol. 91, 49-60 (1983).
  20. Ahuja, S., Rasmussen, H. Overview of HPLC method development for pharmaceuticals. HPLC Method Development for Pharmaceuticals. , Separation Science and Technology; 8. Elsevier Academic Press Inc. 1-11 (2007).
  21. Li, Y., Pan, S., Zhang, W., Du, Z. Novel thermo-sensitive core-shell nanoparticles for targeted paclitaxel delivery. Nanotechnology. 20 (6), 065104(2009).
  22. Kato, J., et al. Disulfide cross-linked micelles for the targeted delivery of vincristine to B-cell lymphoma. Mol. Pharm. 9, 1727-1735 (2012).
  23. Lu, S. C. Regulation of glutathione synthesis. Mol. Aspects Med. 30, 42-59 (2009).
  24. Xiao, K., et al. "OA02" peptide facilitates the precise targeting of paclitaxel-loaded micellar nanoparticles to ovarian cancer in vivo. Cancer Res. 72, 2100-2110 (2012).
  25. Koo, A. N., et al. Disulfide-cross-linked PEG-poly(amino acid)s copolymer micelles for glutathione-mediated intracellular drug delivery. Chem. Commun. 28, 6570-6572 (2008).
  26. McLellan, L. I., Wolf, C. R. Glutathione and glutathione-dependent enzymes in cancer drug resistance. Drug. Resist. Update. 2, 153-164 (1999).
  27. Karala, A. R., Lappi, A. K., Saaranen, M. J., Ruddock, L. W. Efficient peroxide-mediated oxidative refolding of a protein at physiological pH and implications for oxidative folding in the endoplasmic reticulum. Antioxid. Redox Signal. 11, 963-970 (2009).
  28. Gabizon, A., et al. Cancer nanomedicines: closing the translational gap. Lancet. 384, 2175-2176 (2014).
  29. Nanotrac Nanotechnology Particle Size Measurement Solutions. , Available from: http://www.vahitech.com/Assets/Nano(US)Web.pdf (2006).

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Demander l’autorisation de réutiliser le texte ou les figures de cet article JoVE

Demander une autorisation

Mots-clés

Synth se de telodendrim resOxydation au peroxyde d hydrog neChargement de paclitaxelDiffusion dynamique de la lumi reEssai d activit h molytiquePr cipitation polym revaporation du solvantProduction de nanoparticulesStabilit des micelles

Articles connexes