Une méthode alternative et Validé Injection pour l'accès à l'espace sous-rétinien via Une approche transclérale Postérieur

Résumé

Les injections sous-rétiniennes sont la technique la plus courante pour administrer de grands agents thérapeutiques tels que des protéines et des vecteurs viraux aux photorécepteurs et à l’épithélium pigmentaire rétinien. Une méthode alternative chez la souris qui cible avec succès l’espace sous-rétinien avec des dommages collatéraux minimaux et des temps de récupération rapides est décrite ici.

Résumé

injections sous-rétiniens ont été utilisées avec succès chez les humains et les rongeurs pour fournir des interventions thérapeutiques des protéines, des agents viraux et les cellules du interphotorécepteur / compartiment sous-rétinien qui a une exposition directe à photorécepteurs et l'épithélium pigmentaire rétinien (EPR). injections sous-rétiniens de plasminogène ainsi que des essais précliniques et cliniques récentes ont démontré la sécurité et / ou l'efficacité de la prestation des vecteurs viraux et des cellules souches à des personnes ayant une maladie rétinienne avancé. Des modèles murins de maladie de la rétine, en particulier héréditaire de la rétine dystrophies, sont essentielles pour tester ces thérapies. La procédure d'injection la plus courante chez les rongeurs est d'utiliser petite transcornéenne ou incisions transclérale avec une approche antérieure à la rétine. Avec cette approche, l'aiguille d'injection pénètre dans la rétine neurosensorielle perturber le RPE sous-jacente et à l'insertion peut facilement nick la lentille, ce qui provoque l'opacification du cristallin et la dépréciation des imagi non invasiveng. Accès à l'espace sous-rétinien via un transclérale, approche postérieure évite ces problèmes: l'aiguille traverse la sclérotique environ 0,5 mm du nerf optique, sans pénétration de la rétine et évite de perturber le vitré. Les dommages collatéraux est limitée à celle associée à la sclérotomie focale et les effets d'un transitoire, décollement de la rétine séreux. La simplicité de la méthode minimise des lésions oculaires, assure réapplication de la rétine rapide et la récupération, et a un faible taux d'échec. Le minimum de dommages à la rétine et RPE permet une évaluation précise de l'efficacité et les effets directs des agents thérapeutiques eux-mêmes. Ce manuscrit décrit une nouvelle technique d'injection sous-rétinienne qui peut être utilisé pour cibler des vecteurs viraux, des agents pharmacologiques, les cellules souches ou de cellules souches pluripotentes induites (iPS) à l'espace sous-rétinien chez des souris avec une grande efficacité, un minimum de dommages, et une récupération rapide.

Introduction

Injections sous - rétiniens sont les principaux moyens de délivrer des agents cellulaires et viraux aux rétines de souris pour étudier leurs effets sur les photorécepteurs et l'EPR sous - jacente ^1,2. La plupart des protocoles d'injection sous - rétinienne chez les souris utilisent un transcornéen ou d' un site d'injection transclérale antérieure à l'équateur (figure 1). Cette approche peut entraîner des dommages collatéraux inhérents qui comprend entailler et opacification résultante de la lentille, la perturbation de l'intégrité du corps vitré, la pénétration de la rétine neurosensorielle et de l' iris, hémorr....

Protocole

Animaux: de type sauvage souris C57BL / 6J élevés à l'Université de Californie à Los Angeles (UCLA). Tous les animaux étaient âgés de 11 - de 17 semaines et inclus souris mâles et femelles. Toutes les souris étaient groupe logé, maintenu dans un cycle d' obscurité 12h12 lumière / avec de la nourriture et de l' eau ad libitum. Toutes les expériences ont été réalisées en conformité avec les directives institutionnelles de l'UCLA et de l'Association pour la recherche en vision et ophtalmologie Déclaration pour l'utilisation d'animaux dans ophtalmique et Vision Research.

NOTE: Tous les médicaments et les agents injectables sont United States Pharm....

Résultats

Des injections sous-rétiniennes Postérieur approche transclérale ont été effectuées sur 31 des yeux sains de 16 souris de type sauvage avec des injections de 0,3 pi (n = 18), 0,5 pi (n = 8) et 1,0 pi (n = 5), 0,01% de fluorescéine. Un œil a été exclu de l'injection en raison d'une opacification de la cornée préexistante qui empêchait une analyse structurelle et fonctionnelle. Chaque oeil injecté est inclus dans le présent rapport. Aucun décollement de la rétine non désirées, les crevaiso.......

Discussion

injections sous-rétiniens sont la méthode de choix pour la fourniture de vecteurs viraux et de la tige thérapie dérivée des cellules pour manipuler les photorécepteurs et l'EPR dans la recherche fondamentale et le traitement clinique. Chez les patients, des injections sous-rétiniennes sont typiquement réalisées avec une sclérotomie antérieure à la pars plana, une vitrectomie postérieure de base et de pénétration de la rétine par l'aiguille avec la visualisation directe. Comme avec la plupart des procédures de vi.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Hamilton Modèle 62 RN SYR	Hamilton	87942	Seringue x 1
Aiguille Hamilton 33 G, 1.0", 20 DEG, point 3 (acier inoxydable 304)	Hamilton	7803-05	Aiguilles x 6
Ciseaux courbes Vannas	Ted Pella, INC.	1347	Lame de 5 mm
Couteau de microchirurgie à 22,5 degrés	Wilson Ophthalmic Corp.	91204
Ketaject  ;	Phoenix	NDC 57319-609-02	Kétamine
Anased	Lloyd Laboratories	NDC 61311-482-10	Xylazine
Fluorescéine 10 % AK-Fluor	Akorn	NDC 17478-253-10	100 mg/ml
0,9 % Saline USP	Hospira	NDC 0409-4888-50	0,9 % NaCl
Pommade antibiotique	Akorn	NDC 17478-235-35	Eau ophtalmique
Pompe de circulation	Gaymar	TP-500 T/Pump  ;	Réf. 07999-000
sd-OCT	Bioptigen	R-Series	Commercial
Caméra de fond d’œil	Phoenix Research Laboratories	MICRON III
Pince à épiler Type 3	Ted Pella, INC.	5385-3SU
2,5 % phényléphrine	Paragon BioTeck	NDC 42702-102-15	Ophtalmic
IMARIS8	Bitplane		Version 8.1.2
ImageJ	NIH		V1.8.0_77
Hypromellose  ; 2.5 %	Goniovisc	AX0401
Gouttes ophtalmiques en méthylcellulose (rinçage)	Bausch &	Microscope à solution saline
	Zeiss	Stemi 2000	Microscope
lumineuse	Fostec	P/N 20520	Source lumineuse