Observation et Quantification de Mating Comportement dans le nématode, Bursaphelenchus xylophilus

Najie Zhu; Liqun Bai; Stefan Schütz; Baojun Liu; Zhenyu Liu; Xingyao Zhang; Hongshi Yu; Jiafu Hu

doi:10.3791/54842

Article de méthode

Observation et Quantification de Mating Comportement dans le nématode, Bursaphelenchus xylophilus

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DOI :

10.3791/54842

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25 décembre 2016

Najie Zhu^*¹ , Liqun Bai^*¹ , Stefan Schütz² , Baojun Liu³ , Zhenyu Liu³ , Xingyao Zhang⁴ , Hongshi Yu¹ , Jiafu Hu¹^,⁵

¹Department of Forest Protection, Zhejiang Agricultural & Forestry University, ²Institute of Forest Zoology and Forest Conservation, Georg-August University Göttingen, ³College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, ⁴Institute of Forest Protection, Chinese Academy of Forestry, ⁵Collaborative Innovation Center of Sustainable Forestry in Southern China, Nanjing Forestry University

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Un protocole pour étudier le comportement d’accouplement du nématode du pin, Bursaphelenchus xylophilus, est présenté. Les caractéristiques comportementales de B. xylophilus sont décrites dans le processus d’accouplement.

Résumé

Une méthode d'observation et de quantifier le comportement d'accouplement du nématode du pin, Bursaphelenchus xylophilus, a été créé sous un stéréomicroscope. Pour améliorer l'efficacité de l' accouplement de B. Xylophilus et d'augmenter les chances d'observation de l' accouplement, les adultes vierges ont été cultivées et utilisées pour l'enquête. Les œufs ont été obtenus en gardant les nématodes dans l'eau et en permettant aux femelles à pondre des oeufs pendant 10 min. Les juvéniles de deuxième stade (J2) ont été synchronisées par incubation des oeufs pendant 24 h à 25 ° C dans l'obscurité, et le début du J4 ont été obtenus en cultivant le J2 avec de la moisissure grise, Botrytis cinerea, pour un autre 52 h. A ce point du temps, la plupart des nématodes J4 pourraient être clairement distingué comme étant un homme ou une femme en utilisant leur morphologie génitale. Le mâle et la femelle J4 ont été recueillies et cultivées séparément dans deux plats différents de Pétri pendant 24 h pour obtenir nématodes adultes vierges. Un mâle et une femelle vierge vierge ont été jumelés dans une goutte de water dans le puits d'une lame concave. Le comportement d'accouplement a été filmé avec un enregistreur vidéo sous un stéréomicroscope. Toute la période du processus d'accouplement était de 82,8 ± 3,91 min (moyenne ± SE) et pourrait être divisé en 4 phases différentes: la recherche, contact, copuler et persistants. Les minutes moyennes de durée étaient de 21,8 ± 2,0, 28,0 ± 1,9, 25,8 ± 0,7 et 7,2 ± 0,5, respectivement. sous-comportements Onze ont été décrits: croisière, approche, rencontrer, toucher, frettage, la localisation, la fixation, éjaculer, séparer, quiescence, et l'itinérance. Fait intéressant, la concurrence intra-sexuelle évidente a été observée lorsque une femme a été regroupé avec 3 mâles ou d'un mâle avec 3 femelles. Ce protocole est utile et précieux, non seulement dans l' étude du comportement d'accouplement de B. xylophilus, mais aussi en agissant comme une référence pour les études éthologiques des autres nématodes.

Introduction

Le nématode du pin, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner et Buhrer) Nickle, est l’une des espèces envahissantes les plus destructrices, causant le flétrissement et finalement la mort des pins. On pense que ce nématode pathogène est originaire des États-Unis, mais il a été transporté dans plusieurs pays, dont la Chine, le Japon, la Corée du Sud et le Portugal. Récemment, il a également été signalé en Espagne, tuant des millions de pins avec d’énormes pertes économiques et menaçant la production forestière et la stabilité écologique.

Une fois qu’un pin hôte est infecté par des nématodes du pin, des milliers de millions de d....