Analyse optimisée des<em&gt; In Vivo</em&gt; et<em&gt; In vitro</em&gt; Stéatose hépatique

Résumé

Ici, des méthodes optimisées pour générer des modèles in vivo et in vitro de stéatose hépatique et pour analyser les phénotypes stéatotiques et les paramètres physiologiques associés sont décrites.

Résumé

L’établissement d’un système de procédures pour caractériser qualitativement et quantitativement la stéatose hépatique in vivo et in vitro est important pour l’étude métabolique dans le foie. Ici, de nombreux tests sont décrits pour mesurer de manière exhaustive le phénotype et les paramètres de la stéatose hépatique dans des modèles murins et hépatocytaires.

Combinant les méthodes physiologiques, histologiques et biochimiques, ce système peut être utilisé pour évaluer la progression de la stéatose hépatique. In vivo, les mesures du poids corporel et de la résonance magnétique nucléaire (RMN) permettent une compréhension générale des souris de manière non invasive. La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine (H&E) et au rouge d’huile O détermine la morphologie histologique et le dépôt lipidique du tissu hépatique dans des conditions de surcharge en nutriments, telles que l’alimentation riche en graisses. Ensuite, le contenu total en lipides est isolé par extraction au chloroforme/méthanol, qui est suivie d’une analyse biochimique des triglycérides et du cholestérol. De plus, les hépatocytes primaires de souris sont traités avec un taux élevé de glucose et d’insuline pour stimuler l’accumulation de lipides, un modèle in vitro efficace pour imiter l’hyperglycémie induite par l’alimentation et l’hyperinsulinémie in vivo. Ensuite, le dépôt lipidique est mesuré par coloration au rouge d’huile O et extraction au chloroforme/méthanol. La coloration Oil Red O détermine les phénotypes stéatotiques hépatiques intuitifs, tandis que l’analyse d’extraction des lipides détermine les paramètres qui peuvent être analysés statistiquement. Les protocoles actuels intéressent les scientifiques dans les domaines de la stéatose hépatique, de la résistance à l’insuline et du diabète de type 2.

Introduction

L'obésité est un problème de santé en plein essor dans les pays développés et en développement. Il a été rapporté comme étant l' une des conditions coexistant fréquemment associés à la stéatose non alcoolique du foie (stéatose hépatique non alcoolique), avec une prévalence variant entre 30 et 100 pour cent chez les patients NAFLD ^1. En raison de la forte corrélation entre le foie gras et l' obésité, (DIO) modèles induits par l' alimentation de souris obèses sont largement utilisés pour étudier les mécanismes moléculaires complexes associés au développement de NAFLD ^{2, 3,....}

Protocole

Tous les animaux protocoles expérimentaux ont été approuvés par le soin des animaux et l'utilisation comité institutionnel à l'Institut des sciences de la nutrition, les instituts de Shanghai des sciences biologiques, Académie chinoise des sciences (Shanghai, Chine).

1. DIO Modèle de souris

1. HFHS alimentation
   1. Nourrir les huit semaines vieux mâle C57BL / 6 avec un HFHS qui contient 40 kcal% de matières grasses et 40 kcal% de saccharose. Maison eux dans 12 h conditions de cycle sombre lumière.
   2. Garder la souris en HFHS état alimentation-alimentation pour quatre à seize semaines. Vérifiez ....

Résultats

Comme le montre la figure 1A, le poids du corps de la souris a été porté à 45 ± 1,2 g après 16 semaines de HFHS alimentation, qui est d' environ 1,5 fois plus élevée que dans le groupe régime alimentaire chow. La composition corporelle analyses RMN montrant la masse grasse et la masse maigre de souris sont indiqués (figure 1B). La distribution de graisse du corps tout entier et du foie ont été déterminées par IRM, et représentatives d' images en .......

Discussion

NAFLD est une série de maladies hépatiques progressives qui est associée au syndrome métabolique, l' obésité, la résistance à l'insuline, ou diabète de type 2 (DT2) ^11. La caractéristique de NAFLD est stéatose, l'accumulation de lipides dans les hépatocytes. Ici, un éventail de méthodes est présentée pour caractériser les phénotypes et les paramètres de la stéatose hépatique utilisant des souris DIO et les hépatocytes primaires de souris. Cette procédure pourrait être utile pour éluci.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
O.C.T COMPOUND	SAKURA	4583
Oil Red O	Sigma	O0625-25G
Infinity Triglycérides	kit Fisher  ; Scientific	TR22421
Infinity Cholesterol kit	Fisher  ; Scientific	TR13421
Collagène de type I, queue de rat	Millipore	08-115
DMEM (faible teneur en glucose)	Invitrogen	11885-092
Pénicilline / Streptomycine	Invitrogen	15140-122
FBS	Invitrogen	10099141
PBS	cellgro	R21-040-CVR
HBSS	cellgro	20-021-CV
Insuline	TOCRIS Bioscience	3435	dissoudre dans PBS, 1 mM pour stock
Glucose	Sigma	G8270-100G
Microscope	Olympus	BX53
Pompe péristaltique	Longerpump	BT100-2J
10 cm Plat de culture cellulaire	Corning	420167
6-well-plate	Corning	3516
BCA assay	Beyotime	P0010
Résonance magnétique nucléaire	Technologie Niumag	MiniQMR23-060H-I
Régime riche en graisses et en matières grasses (HFHS)	Régimes de recherche	D12327