Isolement et enrichissement du foie progénitrices sous-ensembles identifiés par une combinaison de marqueurs de surface Novel

Henrike Julich-Haertel; Marina Tiwari; Christina Mehrfeld; Elmar Krause; Miroslaw Kornek; Veronika Lukacs-Kornek

doi:10.3791/55284

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Article de méthode

Isolement et enrichissement du foie progénitrices sous-ensembles identifiés par une combinaison de marqueurs de surface Novel

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DOI :

10.3791/55284

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18 février 2017

Henrike Julich-Haertel¹ , Marina Tiwari¹ , Christina Mehrfeld¹ , Elmar Krause² , Miroslaw Kornek¹ , Veronika Lukacs-Kornek¹

¹Department of Medicine II, Saarland University Medical Center, ²Department of Physiology, Center for Integrative Physiology and Molecular Medicine (CIPMM), University of Saarland

Dans cet article

Résumé

lésions hépatiques sont accompagnés par l'expansion des cellules progénitrices qui représente une population hétérogène de cellules. classification Novel de ce compartiment cellulaire permet la distinction de plusieurs sous-ensembles. La méthode décrite ici illustre l'analyse par cytométrie de flux et d'isolement de haute pureté de divers sous-ensembles qui peuvent être utilisés pour d'autres analyses.

Résumé

Pendant les blessures chroniques du foie, les cellules progénitrices se développer dans un processus appelé réaction canalaire, ce qui implique également l'apparition de infiltrat cellulaire inflammatoire et l'activation des cellules épithéliales. La population de cellules souches au cours de telles réactions inflammatoires a surtout été étudié en utilisant des marqueurs de surface uniques, soit par une analyse histologique ou par des techniques à base de cytométrie en flux. Cependant, de nouveaux marqueurs de surface identifiés divers sous-ensembles fonctionnellement distinctes au sein de l'ancêtre du foie / tige compartiment cellulaire. La méthode présentée ici décrit l'isolement et organigramme détaillé cytométrie analyse des sous-ensembles progénitrices en utilisant des combinaisons de marqueurs roman de surface. En outre, il montre comment les différents sous-ensembles de cellules progénitrices peuvent être isolés par des méthodes de tri de haute pureté en utilisant automatisé magnétique et FACS. Surtout, nouveau et simplifié dissociation enzymatique du foie permet l'isolement de ces populations de cellules rares avec une viabilité élevéequi est supérieure en comparaison avec d'autres méthodes existantes. Ceci est particulièrement pertinent pour étudier davantage les cellules progénitrices in vitro ou pour l' isolement de l' ARN de haute qualité pour analyser le profil d'expression génique.

Introduction

La régénération hépatique est principalement associée à la capacité d'auto-renouvellement des hépatocytes. Néanmoins, les lésions chroniques du foie se produisent avec l' activation des cellules progénitrices et l' expansion, qui ont été associés à leur capacité à se différencier en hépatocytes et cholangiocytes ^{^1,} ^{^2,} ^{^3,} ^4. Ceci est particulièrement pertinent parce que, au cours des blessures chroniques, la prolifération des hépatocytes est pas efficace. En dépit de nombreuses études de traçage génétique ciblant les cellules sou....