Un multi-trous Cryovial Elimine congélation lorsque les artefacts sont les tissus musculaires directement Immergé dans l'azote liquide

Résumé

Ce protocole décrit un procédé pour congeler les tissus musculaires en les plongeant directement dans l'azote liquide. Ce protocole met également en évidence une nouvelle cryovial qui permet d'éviter « l'effet de couverture » de l'azote gazeux lorsque les contacts de l'azote liquide de la surface tissulaire d'un échantillon.

Résumé

Les études sur la physiologie des muscles squelettiques doivent relever le défi technique du traitement de façon appropriée les échantillons pour obtenir des sections avec des compartiments cytoplasmiques clairement visibles. Un autre obstacle est serré de l'apposition myofibres aux tissus environnants. Du fait que le processus de fixation de tissu et inclusion dans la paraffine conduit à la contraction des fibres musculaires, la congélation est un moyen optimal de durcissement des tissus musculaires pour le sectionnement. Cependant, un problème fréquemment rencontré, la formation de cristaux de glace, se produit lors de la préparation des coupes congelées en raison de la forte teneur en eau du muscle. Le protocole présenté ici d'abord décrit une méthode simple et efficace pour la congélation correctement les tissus musculaires en les plongeant dans de l'azote liquide. Le problème avec l'utilisation de l'azote liquide seul est qu'il provoque la formation d'une barrière de gaz d'azote à côté du tissu, qui agit comme un isolant et empêche le refroidissement des tissus. Pour éviter cet effet « couverture vapeur », un new cryovial a été conçu pour augmenter la vitesse d'écoulement du liquide autour de la surface du tissu. Ceci a été réalisé en découpant un total de 14 trous d'entrée dans la paroi du flacon. Selon la dynamique des bulles, un taux plus élevé de résultats d'écoulement de liquide en bulles plus petites et moins de chances de former une barrière contre les gaz. Lorsque l'azote liquide circule dans le tube cryogénique à travers les trous d'entrée, la vitesse d'écoulement à travers le tissu est suffisamment rapide pour éliminer la barrière de gaz. Par rapport à la méthode de congélation des tissus musculaires en utilisant isopentane prérefroidi, ce protocole est plus simple et plus efficace et peut être utilisé pour geler les muscles de façon débit. De plus, cette méthode est optimale pour les institutions qui n'ont pas accès à isopentane, qui est extrêmement inflammable à la température ambiante.

Introduction

Le muscle squelettique est le composant le plus précieux d'un animal producteur de viande du point de vue nutritionnel et de traitement. Dans l'industrie de la viande, il y a deux aspects particulièrement critiques: l'efficacité de la croissance musculaire et la qualité de la viande résultant. En tant que composant principal du muscle, les fibres musculaires sont directement liées à la performance de la croissance et la qualité de la viande fraîche chez les animaux ^1. Par exemple, le nombre total de fibres (TNF) et la zone transversale des fibres (CSAF) déterminent principalement la masse musculaire et la qualité de la viande; En o....

Protocole

La méthode actuelle a été établi et validé pour récolter et stocker plus de 1000 échantillons de muscles pour la coloration histologique dans notre laboratoire. Toutes les procédures impliquant les soins des animaux et l'utilisation ont suivi les lignes directrices établies par le ministère de l'Agriculture de la Chine.

1. L'équipement pour le prélèvement d'échantillons

1. L'identité de l'étiquette échantillon sur chaque flacon cryogénique.
   Remarque: Le flacon cryogénique est spécialement conçu pour congeler des échantillons de tissus frais pour la procédure de cryosection (Figure 1A). Les flacons sont f....

Résultats

L'illustration cryovial et l'équipement de laboratoire commun pour la congélation des muscles lors de la préparation des coupes congelées sont présentés à la figure 1. Les cryotubes sont en polypropylène dans une fabrique de moule. Chaque flacon a un total de 14 trous d'entrée: celui-ci est sur le capuchon; un autre est en bas; et les 12 forment quatre lignes parallèles restantes, chacune avec quatre trous à 90 ° l'un de l'autre. Ces trous d'entré.......

Discussion

Nous décrivons ici une nouvelle cryovial plusieurs trous pour la congélation et le stockage de tissus musculaires pour effectuer des évaluations histologiques de la fonction musculaire. L'étape critique dans la modification de ce protocole est que l'échantillon dans le tube cryogénique à trous multiples est immergé directement dans de l'azote liquide. À notre connaissance, c'est la façon la plus simple et rapidest pour obtenir d'excellents échantillons congelés pour cryosectioning musculaire parmi le.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microtome cryostat	;	Leica Leica CM1950
	Nikon,	Nikon DS-U3
; Flacon cryogénique   ; Film			Conçu par nous-mêmes
Azote
			Commomly
Pince de 10 cm Pince			utilisée par Commomly
Verre
		de sécurité
		de congélation utilisés par Commomly	Utilisé en commun

Microscope numérique plastique liquide Scalpel utilisé par de 25 cm Gants