Les protocoles présentés décrivent comment effectuer un test d’inhibition hémagglutination afin de quantifier les titres d’anticorps spécifiques à la grippe d’échantillons de sérum des destinataires de vaccin contre la grippe. Le premier dosage détermine la concentration optimale d’antigène viral par hémagglutination. Le deuxième essai quantifie les titres d’anticorps spécifiques à la grippe par l’inhibition de l’hémagglutination.
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Article de méthode
Un test d’Inhibition (HI) hémagglutination optimisé pour quantifier les titres d’anticorps spécifiques à la grippe
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Dans cet article
Résumé
Résumé
Les titres d’anticorps sont couramment utilisés comme marqueurs de substitution pour protection sérologique contre la grippe et d’autres agents pathogènes. Une connaissance approfondie de la production d’anticorps avant et après la vaccination est nécessaire pour comprendre l’immunité induite par le vaccin. Cet article décrit un protocole fiable de point par point afin de déterminer les titres d’anticorps spécifiques à la grippe. Le premier protocole décrit une méthode pour spécifier les montants d’antigène nécessaires d’hémagglutination, qui standardise les concentrations pour une utilisation ultérieure dans le second protocole (test d’hémagglutination, HA test). Le deuxième protocole décrit la quantification des titres d’anticorps spécifiques à la grippe contre différentes souches virales en utilisant une dilution en série de humaine sérique ou cellule surnageants de culture (hemagglutination inhibition test, test HI).
Ainsi appliquée, nous montrons la réponse en anticorps d’une cohorte en bonne santé, qui a reçu un vaccin antigrippal inactivé trivalent. En outre, la réactivité croisée entre les différents virus apparaît et méthodes pour minimiser les réactions croisées à l’aide de différents types d’animaux des globules rouges (hématies) sont expliquées. Le débat met en évidence les avantages et les inconvénients des essais présentés et comment la détermination des titres d’anticorps spécifiques à la grippe peut améliorer la compréhension de l’immunité liée au vaccin.
Introduction
Infection par le virus de la grippe est associée à une morbidité considérable, la mortalité et des coûts de santé élevés1,2,3,4. En particulier, personnes âgées, nouveaux-nés, femmes enceintes et les patients atteints de maladie chronique courent le risque de complications cliniques plus sévères. Vaccination contre les souches du virus grippal en circulation est donc la principale mesure d’alléger le fardeau de la maladie chez ces populations à risque élevé. L’augmentation de la réponse immunitaire individuelle après la vaccination, par ....
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Protocole
Les protocoles d’étude ont été approuvées par la Commission d’examen éthique local (www.EKNZ.ch) et le consentement éclairé a été obtenu de tous les participants.
1. sérum Collection
- Prélever des échantillons de sérum d’êtres humains à des points d’intérêt. Pour cette étude, nous avons recueilli des sérums à 0 (moment de la vaccination contre la grippe), + 7, + 30, + 60 et + 180 jours après la vaccination.
- Pour obtenir le sérum, centrifuger les tubes à échantillon à 1 200 g pendant 10 min à température ambiante (20-25 ° C).
NOTE : Échantillons de sang Non centrifugés doivent être stockés à 4 ° C et pour pas plus de 24....
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Résultats
Réponse en anticorps induits avant et après la vaccination contre la grippe A H3N2
La réponse immunitaire induite par le vaccin a été évaluée chez des volontaires sains 26 ayant reçu un vaccin sous-unitaire trivalent inactivé contenant de la grippe A/H1N1/California/2009 A/H3N2/Texas/2012 et B/Massachusetts/02/2012 avant le 2014 / saison grippale de 2015. La figure 6 montre un exemple représentatif de 2 vaccinées. Fait intéressant, durant .......
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Discussion
Quantification des titres d’anticorps spécifiques de pré- et post-vaccinatoires grippe virus est un outil important et nécessaire pour les études de vaccin. Basé sur les mesures de substitution de protection contre l’infection par le virus, comme la séroprotection (> 01:40) ou séroconversion (titre 4 fois augmentation), vaccination stratégies peuvent être optimisés9. En utilisant les protocoles fournis peut déterminer : (i) le potentiel d’hémagglutination d’un virus particulier et (ii) les titres .......
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Déclarations de divulgation
A.E. a été appuyée par une recherche des subventions du programme « FNS Ambizione Score » (PZ00P3_154709), « Forschungsfond, Förderung strategischer Projekte » Université de Bâle, Bâle Stiftungsinfektionskrankheiten et Bangeter Rhyner Stiftung. L.K. a été financée par une subvention de l’Université de Graz, en Autriche technique. J.L. reconnaît la prise en charge par une bourse iPhD de l’initiative de SystemsX.ch au programme de biologie des systèmes (9ème appel).
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Réservoirs de pipettes multicanaux jetables de 25 ml | Integra | 4312 | |
| Tubes PCR à 8 puits | Marque GMBH | 781332 | Pour les aliquotes sériques Plaque |
| microtitration à 96 puits, | TPP | 92097 | Pour le dosage HI lors de l’utilisation de globules rouges de mammifères |
| Plaque de microtitration à 96 puits, en forme de V | Corning Costar | 3897 | Pour le dosage HI lors de l’utilisation de globules |
| rouges aviairesAqua ad iniect. Steril | Bichsel AG | 1000004 | Pour la préparation de solutions d’antigène grippal et de filtrat de choléra |
| Poulet RBC (10 %) | Cedarlane | CLC8800 | suspension à 10 % de globules rouges de poulet dans la solution d’Alsever Filtrat de |
| choléra | Sigma-Aldrich | C8772 | Utilisé comme enzyme destructrice de récepteur (RDE) |
| Sigma-Aldrich | D8537 | de DulbeccoPour diluer les échantillons de sérum, les globules rouges et les antigènes | |
| Pipette multicanaux Eppendorf, 12 canaux, 10-100 & micro ; l | Pipette multicanaux Sigma-Aldrich | Z683949 | |
| Eppendorf, 8 canaux, 10-100 & micro ; l | Sigma-Aldrich | Z683930 | |
| Cobaye RBC (10 %) | Cedarlane | CLC1800 | suspension à 10 % de globules rouges de cobaye dans la solution d’Alsever |
| Influenza Anti-A/California/7/09 HA serum ; | NIBSC | 14/134 ; | Utilisé comme témoin positif au test IH |
| Sérum anti-A/Suisse/9715293/2013-like HA | NIBSC | 14/272 | Utilisé comme témoin positif lors du test IH |
| Sérum anti-A/Texas/50/2012-Like HA Serum ; | NIBSC | 13/178 | Utilisé comme témoin positif au test IH |
| Influenza Anti-B/Brisbane/60/2008-HA serum ; | NIBSC | 13/254 ; | Utilisé comme témoin positif au test IH |
| Sérum anti-grippe anti-B/Massachusetts/02/2012 HA ; | NIBSC | 13/182 | Utilisé comme témoin positif lors du test IH |
| Antigène de la grippe A/California/7/09 (H1N1)(NYMC-X181) ; | NIBSC | 12/168 | Virus A/California/7/09 (H1N1) (NYMC-X181) (env. 46µ ; gHA/ml) |
| Antigène grippal A/Switzerland/9715293/2013 (NIB88) | NIBSC | 14/254 | Virus A/Switzerland/9715293/2013 inactivé et partiellement purifié (NIB88) (env. 55µ ; gHA/ml) |
| Antigène de la grippe A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) | NIBSC | 13/112 | Inactivé, partiellement purifié Virus A/Texas/50/2012 (H3N2)(NYMCX-223) (env. 74µ ; gHA/ml) |
| Antigène de la grippe B/Brisbane/60/2008 | NIBSC | 13/234 | Virus B/Brisbane/60/2008 inactivé et partiellement purifié (env. 42µ ; gHA/ml) |
| Antigène de la grippe B/Massachusetts/02/2012 | NIBSC | 13/134 | Virus B/Massachusetts/02/2012 inactivé et partiellement purifié (env. 35µ ; gHA/ml) |
| Serum-Tubes | S-Monovette, Sardstedt | 01.1601.100 | Pour l’extraction de sérum avec activateur de coagulation |
| Donneur unique RBC humain, Type 0 | Recherche innovante | IPLA-WB3 ; | Suspension de globules rouges humains de donneur unique dans la solution d’Alsever (environ 26 %) |
| RBC de dinde (10 %) | Cedarlane | CLC1180 | suspension à 10 % de globules rouges de dinde dans la solution d’Alsever |
| Saline tamponnée au phosphate (PBS) | Gibco |
Références
- Prevention and control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62, Centers for Disease, C. & Prevention. RR-07 1-43 (2013).
- Dominguez-Cherit, G., et al. Critically Ill patients with 2009 influenza A(H1N1) in Mexico. JAMA. 302 (17), 1880-1887 (2009).
- Fox, B. D., et al.
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Réimpressions et autorisations
