Nous présentons une méthode détaillée pour étudier la physiologie du placenta humain in vivo à terme. La méthode combine l'échantillonnage du sang des vaisseaux entrants et sortants sur les côtés maternel et fœtal du placenta avec des mesures ultrasonores du flux sanguin volumique et de l'échantillonnage du tissu placentaire.
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Article de méthode
L'approche d'échantillonnage à 4 navires pour les études intégratives de la physiologie du plaidoyer humain
Dans cet article
Résumé
Résumé
Le placenta humain est très inaccessible à la recherche alors qu'il est encore in utero . La compréhension actuelle de la physiologie du placenta humain in vivo repose en grande partie sur des études sur les animaux, malgré la grande diversité des espèces en anatomie placentaire, l'hémodynamique et la durée de la grossesse. La grande majorité des études sur le placenta humain sont des études de perfusion ex vivo ou des études de trophoblastes in vitro . Bien que les études in vitro et les modèles animaux soient essentiels, l'extrapolation des résultats de ces études au placenta humain in vivo est incertaine. Nous avons visé à étudier la physiologie du placenta humain in vivo à terme et à présenter un protocole détaillé de la méthode. En exploitant l'accès intra-abdominal à la veine utérine juste avant l'incision utérine pendant la césarienne prévue, nous recueillons des échantillons de sang des vaisseaux entrants et sortants sur les côtés maternel et fœtal du placenta. En combinant conDes mesures de centration à partir d'échantillons de sang avec des mesures du débit sanguin, nous sommes en mesure de quantifier l'absorption du placenta et du fœtus et la libération de tout composé. En outre, les échantillons de tissus placentaires provenant des mêmes paires mère-foetus peuvent fournir des mesures de la densité et de l'activité des transporteurs et d'autres aspects des fonctions placentaires in vivo . Grâce à cette utilisation intégrative de la méthode d'échantillonnage à 4 navires, nous sommes en mesure de tester certains des concepts actuels de transfert de nutriments placentaires et de métabolisme in vivo , à la fois chez les grossesses normales et pathologiques. En outre, cette méthode permet d'identifier les substances sécrétées par le placenta à la circulation maternelle, ce qui pourrait être une contribution importante à la recherche de biomarqueurs de dysfonctionnement du placenta.
Introduction
Selon le National Institutes of Health, aux États-Unis, le placenta est l'organe le moins compris dans le corps humain 1 , 2 , 3 . Il est difficile d'accéder et d'étudier le placenta humain in vivo sans imposer de contraintes éthiques sur la grossesse en cours. Les études de la fonction placentaire chez l'humain reposent en grande partie sur des modèles in vitro et ex vivo . La majorité des études antérieures in vivo sur le transport du placenta et le métabolisme ont été réalisées chez les animaux
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Protocole
L'étude a été approuvée par les responsables de la protection des données à l'Hôpital universitaire d'Oslo et le Comité régional pour l'éthique de la recherche médicale et de la santé, Southern Norway 2419/2011. Tous les participants ont signé un consentement éclairé par écrit à l'inclusion.
1. Préparations
REMARQUE: une chronologie pour les procédures est décrite dans la figure 1 .
Figure 1
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Résultats
La méthode d'échantillonnage à 4 navires s'applique à la pratique clinique et nous avons réussi à obtenir des prélèvements sanguins provenant de 209 couples mère / nourrissons. Dans 128 d'entre eux, nous avons également réalisé pour mesurer le débit sanguin du volume. L'échantillonnage complet de 4 navires et les mesures de débit de qualité des vaisseaux maternels et fœtaux ont été obtenus dans 70 paires mère-foetus ( figure 3 ). De plus, nou.......
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Discussion
La méthode d'échantillonnage du placenta à 4 navires est pertinente pour trois objectifs principaux. Tout d'abord, il peut être utilisé pour étudier comment des substances spécifiques sont absorbées par le placenta du côté maternel et éventuellement transférées à la circulation ombilicale et au foetus, comme en témoignent nos études sur le glucose et les acides aminés. Deuxièmement, la méthode est très pertinente pour étudier les substances produites par le placenta et libérées dans les circulations matern.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à dévoiler.
Remerciements
D'abord et avant tout, nous remercions sincèrement les mères qui ont participé à ce projet. Ensuite, nous reconnaissons tout le personnel qui a aidé et facilité la procédure d'échantillonnage, l'anesthésiste, l'infirmière anesthésiste et les infirmières chirurgicales. Le projet n'aurait pas été possible sans le financement de l'Autorité régionale de la santé du Sud-Est de la Norvège et de l'Unité consultative norvégienne sur la santé des femmes, de l'Université d'Oslo et du financement local fourni par l'Hôpital universitaire d'Oslo.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Composition corporelle maternelle | |||
| Échelle d’impédance | Tanita | ou similaire | |
| Mesures par ultrasons ; Échographe | |||
| Sequoia 512 | Acuson | équipé d’un transducteur incurvé avec Doppler à ondes de couleur et de pouls (bande passante de fréquence 2 - 6 MHz) | |
| Échantillons de sang | |||
| Canule aérielle | BD Medical | 682245 | ou similaire |
| Seringue Luer Tip excentrique de 20 cc sans aiguille | Termo | SS-20ES | ou similaire. 3 nécessaires. |
| Seringue Luer excentrique de 10 cc sans aiguille | Termo | SS-10ES | ou similaire. 9 nécessaires. |
| Seringue Luer 5 cc 6 % sans aiguille | Termo | SS-05S1 | ou similaire. 2 nécessaires. |
| Seringue de gaz du sang artériel ; | Radiomètre médical | ou similaire. 4 nécessaires. | |
| Aiguille ailée stérile reliée à un tube flexible, calibre 21 | Greiner Bio-One | 450081 | (à usage unique).3 nécessaire. |
| Tube Vacutainer 6 mL EDTA ; | Greiner Bio-One | 456043 | ou similaire. Étiquette avec site d’échantillonnage. 10 nécessaires. |
| Tube Vacutainer 5 mL LH Séparateur d’héparine | au lithium Greiner Bio-One | 456305 | ou similaire. Étiquette avec site d’échantillonnage. 5 nécessaires. |
| Vacutainer tube 6 mL Activateur de caillots sériques ; | Greiner Bio-One | 456089 | ou similaire. Étiquette avec site d’échantillonnage. 5 nécessaires. |
| Vacutainer tube 3 mL ; 9NC Citrate de sodium de coagulation 3,2 % | Greiner Bio-One | 454334 | ou similaire. Étiquette avec site d’échantillonnage. 5 nécessaires. |
| Flacons cryogéniques de 2,0 ml | de 430488 | Corning | ou similaires. Étiquette avec le site d’échantillonnage, le sérum/type de plasma et ID. 90 nécessaire. |
| Plateaux marqués pour le transport des seringues | pour le transport des échantillons de sang dans la salle d’opération | ||
| Rocker | pour un mélange en douceur des échantillons | ||
| Glace | dans une boîte en polystyrène | ||
| Azote | dans le récipient approprié | ||
| <échantillons de placenta strong>Échantillons de placenta | |||
| Metal Plateau | |||
| Glace | dans une boîte en polystyrène | ||
| calibrée | |||
| Règle | |||
| 1 M Saline tamponnée | au phosphate Sigma | D1408 | ou similaire. Diluer 10 M à 1 M avant utilisation |
| Solution de stabilisation d’ARN | Sigma | R0901-500ML ; | ou similaire |
| Composé à température de coupe optimale (O.C.T.) VWR | 361603E | ou | |
| flacons cryogéniques similaires, 2,0 mL | 430488 | Corning | ou similaires. Étiquette avec site d’échantillonnage. contenu et ID. 10 nécessaires. |
| Tubes à centrifuger, fond conique 50 mL | Greiner Bio-One | 227,285 | ou similaire. Étiqueter avec « ARN plus tard », site d’échantillonnage et ID. 2 nécessaires. |
| Azote | dans un récipient approprié | ||
| composition corporelle fœtale | |||
| calibrée | |||
| Ruban |
Références
- Jansson, T., Powell, T. L. Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches. Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).
- Hanson, M. A., Gluckman, P. D. Early dev....
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Réimpressions et autorisations
