Article de méthode

Enregistrement de la plasticité synaptique dans des tranches d’hippocampe aiguës maintenues dans un petit volume recyclage - Perfusion- et système de chambre de Submersion-type

DOI :

10.3791/55936

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1 janvier 2018

 ,  ,  , 
1The Institutes of Brain Science, the State Key Laboratory of Medical Neurobiology, the Collaborative Innovation Center for Brain Science, Fudan University

Dans cet article

Résumé

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Ce protocole décrit la stabilisation du niveau d’oxygène dans un petit volume de tampon recyclé et aspects méthodologiques de la plasticité synaptique activité dépendante d’enregistrement dans des tranches d’hippocampe aiguës immergés.

Résumé

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Même si les expériences sur des tranches de cerveau ont été utilisés depuis 1951, problèmes subsistent qui réduisent la probabilité de réaliser une analyse stable et réussie de la modulation de la transmission synaptique lors d’enregistrements intracellulaires ou potentiel sur le terrain. Ce manuscrit décrit des aspects méthodologiques qui peuvent être utiles à l’amélioration des conditions expérimentales pour l’entretien des tranches de cerveau aiguë et d’enregistrement des potentiels postsynaptiques excitateurs de champ dans une chambre de disponible dans le commerce de l’immersion avec une unité de sortie-carbogenation. La sortie-carbogenation aide à stabiliser le niveau d’oxygène dans les expériences qui s’appuient sur le recyclage d’un réservoir tampon petit pour améliorer le rapport coût-efficacité des expériences de la drogue. En outre, le manuscrit présente des expériences représentatives qui examinent les effets de modes différents carbogenation et paradigmes de la stimulation sur l’activité dépendante de la plasticité synaptique de la transmission synaptique.

Introduction

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En 1951, les expériences de tranche cérébrale aiguë première signalés étaient menées1. En 1971, après avoir réussi in vitro des enregistrements de piriform cortex2,3 et la découverte que les neurones de l’hippocampe sont interconnectés transversalement le long de l’axe de septotemporal de l’hippocampe4, un de la premiers enregistrements in vitro de l’activité neuronale hippocampique a atteint5. La similitude des paramètres neurophysiologiques ou neurostructural de neurones dans des conditions in vivo et in vi....

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Protocole

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Les animaux ont été maintenus selon les normes établies de protection des animaux et les procédures des instituts des sciences cérébrales et état clé laboratoire de médecine neurobiologie de Fudan University, Shanghai, Chine.

1. préparation de la solution

Remarque : Consultez la Table des matières.

  1. Préparer le tranchage tampon (solution de mis à jour le Gey) : 92 mM NaCl, KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 30 mM NaHCO3, 2,5 mM glucose 25 mM, 20 mM HEPES, 3 mM Na+-pyruvate et 10 mM MgSO40,5 mM CaCl2.
  2. Ajuster le pH à 7,6 à l’aide de 1 NaOH M sans carbogenation.
    3. ....

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Résultats

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Dans la section protocole, nous décrit la préparation de tranches d’hippocampe aiguës de la partie ventrale et intermédiaire de la formation hippocampique (Figure 1) de souris C57BL/6 mâles et des rats Wistar mâles (5-8 semaines). La position des hémisphères sur la plate-forme de trancheuse contribue à garder stable et supprime la nécessité de stabilisation avec la gélose ou d’agarose. Le système de perfusion lui-même est basé sur une pompe péristaltique opér.......

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Discussion

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Bien que les chambres tranche interface pièce plus robuste réponses synaptiques25,26,27,28, chambres de submersion assurent un confort supplémentaire pour l’enregistrement patch-clamp et fluorescence d’imagerie. Ainsi, nous avons décrit plusieurs aspects d’enregistrements possibles sur le terrain dans des tranches d’hippocampe aiguës en utilisant une chambre de tranche de submersion commerciale.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs déclarent que la recherche a été effectuée en l’absence de toute relation commerciale ou financière qui pourrait être interprété comme un conflit d’intérêts potentiel.

Remerciements

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W.W. menée, analysé et les expériences et a écrit le manuscrit. D.X. et C.P. a aidé à la préparation de la figure et mené les expériences. Ce travail a été soutenu par la FSNC (31320103906) et 111 (B16013) à C.T.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Réactifs requis
NaClSinopharm Chemical Reagent, Chine10019318
KClSinopharm Chemical Reagent, Chine10016318
KH2PO4Sinopharm Chemical Reagent, Chine10017618
MgCl2 &point moyen ; Réactif chimique Sinopharm 6H2O, Chine10012818
CaCl2Réactif chimique Sinopharm, Chine10005861
NaHCO3Réactif chimique Sinopharm, Chine10018960
Réactifchimique Glucose Sinopharm, Chine
NaH2 PO4Réactif chimique Sinopharm, Chine20040718
HEPESSigmaH3375
Pyruvate de sodiumSigmaA4043
MgSO4Réactif chimique Sinopharm, Chine20025118
Réactif chimique NaOHSinopharm, Chine10019718
Outils et matériaux pour la dissection
DecapitatorsHarvard appareil55-0012pour la décapitation du rat
Ciseaux de bandageSCHREIBER12-4227pour la décapitation de la souris
lame à double tranchantFlying Eagle, Chine74-C
IRIS CiseauxRWD, ChineS12003-09
Bone RongeursRWD, ChineS22002-14
CuillèreHammacher  ;HSN 152-13
spatule à ciment dentaireHammacher  ;HSN 016-15
pelle dentaire à double extrémitéBlacksmith Surgical, USABS-415-017
Microtome vibrantLeica, AllemagneVT1200S
lame chirurgicale  ;RWD, ChineS31023-02
support chirurgicalRWD, ChineS32007-14<
strong>Équipement et matériaux d’électrophysiologie
Vertical Pipette PullerNarishige, JaponPC-10
Table d’isolation des vibrationsMeirits, JaponADZ-A0806
enregistrement de type submergé chambreWarner InstrumentsRC-26GLP
Micromanipulateur 4 axesSutter, États-UnisMP-285, MP-225
Platinum WireWorld Precision InstrumentsPTP406
AmplificateurMolecular Devices, États-UnisMulticlamp 700B
Système d’acquisition de donnéesMolecular Devices, États-UnisDigidata 1440A
Anaysis logicielMolecular Devices, États-UnisClampex 10.2
Nikon, JaponSource lumineuse LED FN1
Lumen Dynamics Group, CanadaMicropipettes X-cite 120LED
Appareil de HarvardGC150TFmicropipettes borosilicates d’enregistrement extracellulaire
Sutter, États-UnisBF150-86
électrode de tungstèneA-M Systems, USA575500
pompe péristaltiqueLonger, ChineBT00-300T
tubes pour pompe péristaltiqueISMATEC, Wertheim, AllemagneSC03091x entrée, ID : 1,02 mm
tubes pour pompe péristaltiqueISMATEC, Wertheim, AllemagneSC03192x tubes pour sortie, ID : 2,79 mm
caméra CCDPCO, Allemagnepco.edge sCMOS
Kodak
50 mL tube à centrifuger coniqueThermo scientific339652
PréchambreWarner InstrumentsBSC-PC
Chauffage en ligneWarner InstrumentsSF-28
Régulateur de températureWarner InstrumentsTC-324B
10010518 Microscope à fluorescence pince patch papier de nettoyage d’objectif

Références

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  1. McIlwain, H. Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain. Biochem J. 48 (4), (1951).
  2. McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. Responses in vitro from the piriform cortex of the rat....

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Mots-clés

Pr paration de coupes hippocampiquesEnregistrement des potentiels de champAnalyse de la plasticit synaptiqueSyst me de carbog nationChambre d immersionRecyclage du LCSFTechniques d lectrophysiologieProtocoles de stimulationEnregistrements long termeRecherche sur la neuroplasticit

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