Dans cette étude, la méthodologie est présentée sur la façon d'effectuer des enregistrements électrophysiologiques in vivo multi-sites à partir de la voie hyperdirect sous anesthésie uréthane.
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Dans cette étude, la méthodologie est présentée sur la façon d'effectuer des enregistrements électrophysiologiques in vivo multi-sites à partir de la voie hyperdirect sous anesthésie uréthane.
La convergence de la preuve montre que de nombreuses maladies neuropsychiatriques doivent être comprises comme des troubles des réseaux neuronaux à grande échelle. Pour mieux comprendre la base pathophysiologique de ces maladies, il est nécessaire de caractériser précisément de quelle manière le traitement de l'information est perturbé entre les différentes parties neuronales du circuit. En utilisant des enregistrements électrophysiologiques extracellulaires in vivo , il est possible de délimiter avec précision l'activité neuronale dans un réseau neuronal. L'application de cette méthode présente plusieurs avantages par rapport aux techniques alternatives, par exemple , l'imagerie par résonance magnétique fonctionnelle et l'imagerie au calcium, car elle permet une résolution spatiale et spatiale unique et ne repose pas sur des organismes génétiquement modifiés. Cependant, l'utilisation d'enregistrements extracellulaires in vivo est limitée car il s'agit d'une technique invasive qui ne peut être appliquée universellement. Dans cet article, une méthode simple et facile à utiliser est présentée wAvec lequel il est possible d'enregistrer simultanément des potentiels extracellulaires tels que des potentiels de terrain locaux et une activité multi-unités sur plusieurs sites d'un réseau. Il est détaillé comment un ciblage précis des noyaux sous-corticaux peut être réalisé en utilisant une combinaison de chirurgie stéréotaxique et d'analyse en ligne d'enregistrements multi-unités. Ainsi, il est démontré, comment un réseau complet tel que la boucle ganglionale cortico-basale hyperdirect peut être étudié chez les animaux anesthésiés in vivo .
Les preuves cumulatives récentes sur différents troubles neuropsychiatriques tels que la maladie de Parkinson (PD) et la schizophrénie suggèrent fortement que leur pathophysiologie est basée sur un dysfonctionnement critique de circuits neuronaux étendus qui impliquent souvent des structures corticales et sous-corticales 1 , 2 , 3 . Selon cette théorie, les manifestations cliniques des maladies résultent d'une capacité de traitement de l'information réduite d'un réseau de cellules au lieu de cellules individuelles ou d'éléments neuronaux spécifiques 1 , 2 , 3 . Afin d'améliorer la compréhension de ce groupe complexe de maladies neuropsychiatriques et de trouver de nouvelles options de traitement, il est obligatoire de caractériser la dynamique neuronale de ces réseaux désordonnés chez les patients humains et dans les modèles animaux en détail. Un excellentLa méthode pour étudier les réseaux à grande échelle chez les sujets vivants est l'enregistrement électrophysiologique multi-sites de potentiels extracellulaires 4 . En utilisant cette méthode, il est possible d'évaluer simultanément les potentiels de terrain locaux (LFP), qui représentent principalement la sommation temporelle des courants postsynaptiques excitateurs et inhibiteurs et de l'activité multi-unité (MUA), générée par des potentiels présynaptiques 5 . L'enregistrement des potentiels extracellulaires présente plusieurs avantages par rapport aux méthodes alternatives pour étudier les réseaux, par exemple , l'imagerie par résonance magnétique fonctionnelle et l'imagerie au calcium, car elle fournit une résolution spatiale et spatiale plus élevée et parce qu'elle ne dépend pas des organismes génétiquement modifiés 5 . Cependant, l'utilisation d'enregistrements extracellulaires in vivo est limitée car il s'agit d'une technique invasive qui ne peut être appliquée universellement.
Recette électrophysiologique in vivoLes ordonnances peuvent être effectuées chez les animaux éveillés aussi bien que chez les animaux anesthésiés 6 . Les deux méthodes sont accompagnées d'avantages et d'avantages spécifiques. Des études menées dans des animaux éveillés permettent d'enregistrer des signaux cérébraux lors de l'exécution de tâches comportementales définies, mais sont sujettes à des éléments liés au mouvement et à d'autres artefacts 7 , 8 . Les enregistrements chez les animaux anesthésiés, d'autre part, offrent l'opportunité d'évaluer les LFP et MUA avec un minimum d'artefacts dans des états de synchronisation cortical hautement définis, mais les résultats diffèrent aussi dans une certaine mesure de ce qui se trouve dans les sujets éveillés 9 , 10 , 11 .
Ces dernières années, il a été démontré que l'échantillonnage des LFP est particulièrement utile pour délimiter les changements pathologiques de l'activité du réseau. Un exemple important de cela est la recherche sur la pathophysiologie de la PD chez le patient humainS et les modèles animaux de la maladie, où il pourrait être démontré que les oscillations bêta améliorées dans la boucle des ganglions cortico-basaux sont liées aux symptômes moteurs parkinsoniens 12 , 13 . En conséquence de cette ligne de recherche, on étudie actuellement si les oscillations bêta pourraient être utilisées comme biomarqueur de rétroaction en ligne pour la stimulation cérébrale profonde en boucle fermée 14 , 15 .
Dans la présente étude, une description détaillée des enregistrements électrophysiologiques multi-sites aigus de LFP et MUA chez les rats anesthésiés avec de l'uréthane est fournie. Il est démontré comment un réseau complet, tel que la voie des ganglions cortico-basaux hyperdirect, peut être caractérisé électrophysiologiquement à l'aide d'électrodes standard et personnalisées et de la façon dont ces électrodes peuvent être construites. Il est particulièrement souligné comment un ciblage précis des noyaux des ganglions de base peut être réalisé par coMbining chirurgie stéréotaxique avec l'enregistrement en ligne des MUA.
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Les procédures expérimentales ont été menées conformément à la loi allemande sur le bien-être animal (dernière révisée en 2014) et aux règlements européens (2010/63 / UE). Les expériences ont été approuvées par l'autorité locale de protection des animaux (LaGeSo, Berlin) et sont conformes au département local et aux lignes directrices internationales.
NOTE: Dans la méthode présentée, deux modèles d'électrodes sont utilisés pour enregistrer à partir de la voie des ganglions cortico-basal hyperdirect qui relie le cortex motrice primaire (M1) au noyau subthalamique (STN) et à la substantia nigra pars reticulate (SNr). Pour les enregistrements d'électrocorticogramme épidurale (ECoG) à partir des électrodes Ag / AgCl à faible impédance M1, elles sont utilisées. Les enregistrements de STN et SNr sont réalisés avec des électrodes de tungstène haute impédance disponibles dans le commerce.
1. Construction d'électrodes épidurales Epidural Ag / AgCl
2. Fixation des électrodes à un support stéréotaxique
REMARQUE: Pour enregistrer MUA et LFP en même temps, utilisez des électrodes à micro-ondes de tungstène avec une impédance de 1,5 MΩ. Si l'accent est mis sur les enregistrements de haute qualité d'unités individuelles, choisissez des électrodes à micro-ondes avec une impédance plus élevée (> 5 MΩ). Si le but de l'étude est uniquement dirigé vers les LFP, les électrodes à impédances inférieures peuvent être acceptées. Pour les petites structures, pour lesquelles des ajustements stéréotaxiques dorsoventral sont souvent nécessaires, utilisez des paires d'électrodes avec une séparation appropriée du boutsoventral (250 μm). En outre, cela fournit l'avantage d'une électrode de référence plus locale, si nécessaire. Les coordonnées stéréotaxiques sont toujours mesurées à partir de l'électrode la plus basse et uneRe calculé en référence au bregma.
3. Chirurgie
4. Cartographie électrophysiologique et enregistrements
REMARQUE: pour cette étape, une cage Faraday et un système d'enregistrement électrophysiologique multicanal avec un logiciel d'enregistrement capable de filtrer en ligne et de tri en ligne est nécessaire. Utilisez de préférence un système qui fonctionne avec un préamplificateur placé près de la tête des animaux afin de garder le bruit électrique et les artefacts au minimum. Outre les électrodes à micro-ondes de tungstène, au moins une électrode péridurale et une électrode de référence sont nécessaires pour effectuer des enregistrements de la voie hyperdirect. Il est recommandé d'insérer la péridurale et la référenceE les électrodes par paire sans qu'elles se touchent, cela aide en cas de dysfonctionnement et permet différents types de référencement dans l'analyse des données.
5. Fin de l'expérience
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Avec les électrodes d'enregistrement utilisées ici, il est possible d'échantillonner les LFP du cortex moteur primaire, du noyau subthalamique et de la substantia nigra pars reticulata et MUA de STN et SNr. Initialement, les LFP et les activités multi-unités sont enregistrées ensemble dans un signal à large bande. Par la suite, les LFP et les MUA sont séparés par des filtres passe-bande (0,05-250 Hz pour les LFP et 300-4 000 Hz pour MUA).
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Dans la présente étude, la méthode montre comment enregistrer simultanément les signaux électrophysiologiques extracellulaires à partir de sites multiples d'un réseau donné en utilisant l'exemple de la voie des ganglions cortico-basal hyperdirect qui relie le M1 avec le STN et SNr chez les rongeurs.
Une étape critique dans l'enregistrement de petites structures sous-corticales telles que le STN est l'insertion guidée avec précision des électrodes d'enregistrement dans la ...
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Les auteurs n'ont rien à dévoiler.
Nous remercions la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG), KFO 247, de financer notre étude.
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| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Électrodes épidurales personnalisées Ag/AgCl | Goodfellow GmbH D-61213 Bad Nauheim, Allemagne info@goodfellow.com | fil d’argent à 99,99 % | permettra une meilleure qualité de signal, mais ne peut être utilisée que dans des expériences aiguës. Remplacement possible : Électrodes en acier inoxydable |
| Support stéréotaxique avec bloc acrylique | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA | Référence du produit Modèle 1770 Porte-électrode standard | Assurez-vous que le bloc acrylique a des évidements qui conviennent à la configuration de l’électrode pour la cible souhaitée. Les blocs acryliques peuvent facilement être modifiés à l’aide d’un fichier pour obtenir la configuration souhaitée. Remplacement possible : Porte-électrodes auto-construits |
| Électrodes à microfil de tungstène 1,5 M&Omega ; impédance | Microprobes.com 18247-D Flower Hill Way ; Gaithersburg, Maryland, 20879 États-Unis | Product-ID WE3ST31.5A5-250um | Le 1.5 M&Omega ; est nécessaire pour enregistrer MUA et LFP en même temps. Remplacement possible : Des microélectrodes de différents matériaux peuvent être utilisées. Les électrodes doivent être droites, robustes et aussi fines que possible. |
| Outil d’alignement des rats | David Kopf Instruments, 7324 Elmo Street, Tujunga, CA 91042, USA | ID du produit Modèle 944 L’outil d’alignement | des rats permet l’orientation exacte du cerveau pour correspondre aux atlas stéréotaxiques. Remplacement possible : Support stéréotaxique avec canule |
| Acrylique dentaire à deux composants | Associated Dental Products Ltd. Kemdent Works, Purton, Swindon Wiltshire, SN5 4HT, Royaume-Uni | Simplex Rapid Powder Clear 225g, Code du produit : ACR803 ; Simplex Rapid Liquid 150ml, Code produit : ACR920 | Selon les électrodes utilisées, la superglue peut être une alternative facile, si les électrodes sont petites et légères. Remplacement possible : Superglue (à base de cyanacrylate) |
| Cage de Faraday | Auto-construction | Une cage de Faraday appropriée sera la meilleure protection contre les artefacts électromagnétiques, mais tout ce qui peut être façonné en forme de boîte ou appliqué à un cadre et qui est fait d’un matériau conducteur peut aider. Remplacement possible : Feuille d’aluminium ou maille de cuivre | |
| Configuration électrophysiologique avec logiciel d’enregistrement et capacités de tri des pointes en ligne | OmniPlex® ; Neural Data Acquisition System Plexon Inc 6500 Greenville Avenue, Suite 700 Dallas, Texas 75206 États-Unis | Les logiciels de tri hors ligne sont une alternative potentielle, plusieurs scripts et logiciels peuvent être trouvés gratuitement dans la communauté open source. |
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