Un protocole pour l'établissement d'un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal par une infection segmentaire adeno-cre et sa surveillance par coloscopie à haute résolution est présentée.
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Article de méthode
Un modèle de souris génétiquement modifiée de cancer colorectal sporadique
Dans cet article
Résumé
Résumé
Malgré les avantages d'une applicabilité et d'une rentabilité faciles, les modèles de souris cancéreuses basées sur l'injection de cellules tumorales ont des limites sévères et ne simulent pas exactement la biologie tumorale et la diffusion de cellules tumorales. Des modèles de souris génétiquement modifiés ont été introduits pour surmonter ces limitations; Cependant, ces modèles sont techniquement exigeants, en particulier dans les grands organes tels que le côlon dans lequel une seule tumeur est souhaitée.
En conséquence, un modèle immunocompétent, souris génétiquement modifiée de cancer colorectal a été développé qui développe des tumeurs hautement uniformes et peut être utilisé pour des études de biologie tumorale ainsi que des essais thérapeutiques. Le développement de la tumeur est déclenché par une infection chirurgicale et segmentaire du côlon distal avec le virus adeno-cre chez les souris mutantes conditionnelles composées. Les tumeurs peuvent être facilement détectées et surveillées par coloscopie. Nous décrivons ici la technique chirurgicale de l'infection adénoculaire segmentaire deLe colon, la surveillance de la tumeur par coloscopie à haute résolution et présente les tumeurs colorectales résultantes.
Introduction
Le cancer colorectal (CRC) continue d'être l'une des principales causes de mortalité liée au cancer dans les pays occidentaux. 1 Alors que le pronostic des patients atteints d'une maladie de stade précoce est bon, de nombreuses tumeurs sont diagnostiquées à des stades ultérieurs où, malgré de nombreuses options de traitement, le pronostic est limité. 2 , 3 , 4 , 5
La majorité des modèles actuels de souris de CRC sont basés sur l'implantation de cellules tumorales dérivées ....
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Protocole
Les expériences animales présentées ici ont été revues et approuvées de manière indépendante par un comité institutionnel et gouvernemental de soins et d'utilisation des animaux et ont été menés conformément aux directives de la Fédération des associations de scientifiques de laboratoire (FELASA). Toutes les mesures possibles ont été prises pour minimiser les souffrances, y compris l'anesthésie et l'analgésie ou, si nécessaire, une euthanasie prématurée.
1. Induction locale de tumeur par infection chirurgicale auto-créative
- Préparation des animaux à la chirurgie
REMARQUE: Pratiquemen....
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Résultats
Si elle est correctement réalisée,> 85% des animaux développent des tumeurs. La mortalité de la chirurgie ici présentée est <5%, la mortalité de la coloscopie est pratiquement inexistante. Chez la majorité des souris, une seule lésion est détectée; Dans environ 30% 2 - 3 petits adénomes peuvent être détectés qui se fondent généralement sur une seule tumeur dans les 2 à 3 semaines suivant l'induction de la tumeur.
Le .......
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Discussion
Bien qu'ils soient généralement faciles à générer et à maintenir, les modèles de souris CRC classiques basés sur l'injection de ligne cellulaire sont artificiels et ne sont pas en mesure de récapituler complètement la maladie humaine. En conséquence, les GEMM ont été développés. Le premier CRC GEMM était la souris Apc Min , qui abrite une mutation hétérozygote null dans le gène Apc, imitant ainsi la polypose adénomateuse familiale (FAP) de la maladie héréditaire humaine. 21 Cep.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à dévoiler.
Remerciements
Ce travail est consacré à la mémoire du professeur Moritz Koch.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| réactifs / consommables | |||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| Trypsine-EDTA (0.25 %, Phenol-Red) | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| Saline normale 0.9 % (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| Aqua ad injectabilia | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre (adénovirus, c = 2E+11 PFU/mL) | Vecteur de transfert de gènes Core Université de l’Iowa | ||
| 15 mL, 50 mL tubes à centrifuger | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Tubes Eppendorf 1,5 mL/ 2 mL | Sarstedt AG & Co. | 72 695 400 | |
| Boîte de Pétri PS 100/15 mm (stérile, Nuclon) | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| Seringue de 1 mL (sans volume mort) - Injekt-F SOLO Braun | /neoLab | 194291661 | |
| Aiguille d’injection 30G | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Comments |
| Analgesia / anesthesia | |||
| Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie) | AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Oxygène | ||
| médical | Air Liquide Medical | ||
| (Temgesic) | Indivior Eu Ltd. | - | |
| Bepanthen - pommade ophtalmique | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| Table Top Research Anesthesia Machine x/O2 Flush w/ Sevoflurane Vaporizer | Parkland Scientific | V3000PS/PK | |
| strong>Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Surgical Equipment | |||
| Écouvillons en cellulose | Lohmann & Rauscher Deutschland | 13356 | |
| Seringue à insuline EMG 1 mL (avec canule 30G) | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| Tube à alésage fin (alésage : 0,28 mm / diamètre : 0,61 mm) | Smiths Medical Deutschland | 800/100/100 | |
| Pince Micro-Adson Fine | Science Tools | 11018-12 | |
| Ciseaux à iris - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Olsen-Hegar Porte-aiguille | Outils pour les sciences fines | 12002-12 | |
| Kit AutoClip | Outils pour les sciences fines | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1 (suture chirurgicale) | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| Curved Micro Serrefine Vascular Clamp | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| Fogarty Spring Clips | Edwards | CDSAFE 6 | |
| Hot Plate 062 | Labotect | 13854 | |
| Isis - Rasoir à cheveux | Aesculap - Braun | - | |
| Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Coloscopy | |||
| Cold Light Fountain XENON 175 SCB | Karl Storz | 20132101-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Fiber Optic Light Cable | Karl Storz | 69495NL | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM Tête de caméra à trois puces | Karl Storz | 20221030 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| TRICAM SLII Unité de commande de caméra | Karl Storz | 20223011-1 | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Moniteur à écran plat 15" EndoVue | Karl Storz Karl Storz | 9415NN | Karl Storz Coloview System Mainz |
| Télescope HOPKINS Straight Forward diamètre 1,9 mm ; longueur 10 cm autoclavable transmission de la lumière par fibre optique incorporée | Karl Storz | 64301AA | |
| Gaine de protection et d’examen | Karl Storz | 61029C |
Références
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2016. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Weitz, J., et al. Colorectal cancer. Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).
- Bork, U., et al.
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Réimpressions et autorisations
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