Une méthode d’analyse cellulaire pour le Condyle mandibulaire murin et morphométriques

Summary

Ce manuscrit présente des méthodes d’analyse morphométrique et changements cellulaires dans le condyle mandibulaire des rongeurs.

Abstract

L’articulation temporo-mandibulaire (ATM) a la capacité de s’adapter aux stimuli externes et chargement des changements peut affecter la position des condyles, ainsi que les composants structurels et cellulaires du cartilage condylien mandibulaire (MCC). Ce manuscrit décrit des méthodes pour l’analyse de ces changements et un procédé pour modifier le chargement de l’ATM chez la souris (c.-à-d., compression ATM statique de chargement). L’évaluation structurale illustrée ici est une approche morphométrique simple qui utilise le logiciel Digimizer et est réalisée dans les radiographies de petits os. En outre, l’analyse de systèmes cellulaires change conduisant à des altérations dans l’expression du collagène, remodelage osseux, la division cellulaire, et distribution de protéoglycanes dans le MCC est décrite. La quantification de ces changements dans les coupes histologiques - en comptant les pixels fluorescents positives à l’aide d’image logiciel et la cartographie de la distance de mesure et colorées de zone avec Digimizer - est également démontrée. Les méthodes indiquées ici ne se limitent pas à l’ATM murine, mais pourraient être utilisés sur les autres OS de petits animaux de laboratoire et dans d’autres régions de l’ossification endochondrale.

Introduction

L’ATM est une articulation portante unique située dans la région cranio-faciale et est formé de fibrocartilage. Le CMC de l’ATM est essentiel pour la fonction articulaire, y compris le mouvement de mâchoire sans entrave tout en parlant et pétrissage, mais il est souvent affecté par des maladies dégénératives, notamment l’arthrose¹. L’ATM a la capacité de s’adapter aux stimuli externes et des altérations de chargement, conduisant à des changements structurels et cellulaires aux composants du MCC^2,3,4,5. Les propriétés ....

Protocol

Le Comité de protection des animaux institutionnel de l’Université du Connecticut Health Center a approuvé toutes les procédures d’animaux.

1. compression statique TMJ chargement : Bouche ouverte de force

Remarque : Souris transgéniques de quatre semaines associées fluorescents reporters pour le collagène (Col2a1XCol10a1), aimablement fournies par m. David Rowe (Université du Connecticut), ont été utilisés pour les expériences décrites dans ce manuscrit (n = 8 ; 4 mâles et 4 femelles). Transgène Col2a1 cyan (bleu) est exprimé dans les cellules à la zone prehypertrophic de la MCC, tandis que le Col10a1 cerises globu....

Results

Statistiques descriptives ont été effectuées pour examiner la distribution des mesures morphométriques (longueur mandibulaire, longueur condylienne, largeur condylienne) et des analyses histologiques. Résultats ont été comparés entre le groupe chargé (c.-à-d., souris soumises à une charge de compression avec le ressort en titane bêta) et le groupe témoin (c.-à-d., correspondant à des souris témoins n’ayant pas reçu de toute procédure). Des différences statistiquement sig.......

Discussion

Ce manuscrit décrit les méthodes de mesure morphométriques et analyse cellulaire des condyles mandibulaires murins et mandibules. Les mesures radiographiques morphométriques permet également d’analyser d’autres ossements de petits animaux de laboratoire. En outre, l’analyse cellulaire (quantification de la cellule et la cartographie de distance du cartilage) ne se limitent pas à du condyle mandibulaire rongeur, mais peut être utilisé pour quantifier les coupes histologiques de nombreux tissus.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Système de radiographie MX20	Faxitron X-Ray LLC  ;
Logiciel Digimizer Image  ;	MedCalc Software
Shandon Cryomatrix résine d’encastrement	Thermo Scientific	6769006
Microscope manuel Axio Imager Z1	Carl Zeiss	208562
filtre à protéines fluorescent jaune  ; - EYFP	Chroma Technology Corp	49003
filtre à protéines fluorescent cyan - ECFP	Chroma Technology Corp	49001
filtre à protéines fluorescent rouge - Cy5	Chroma Technology Corp	49009
acétate de sodium anhydre	Sigma-Aldrich	S2889
L-tartrate de sodium dibasique dihydraté  ;	Nitrite de sodium Sigma-Aldrich	228729
	Sigma-Aldrich	237213
substrat ELF97	Thermo Fisher Scientific	E6600
ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kit	Life Technologies	C10339  ;	comprend de l’EdU (5-éthynyl-2'-désoxyuridine)  ;
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phénylindole, dichlorhydrate)	Thermo Scientific	D1306
Phosphate de sodium dibasique	Sigma-Aldrich	S3264
Phosphate de sodium monobasique	Sigma-Aldrich	71505
Bleu Toluidine	Sigma-Aldrich	T3260
Adobe Photoshop  ;	Adobe Systems Incorporated
Comprimés de solution saline tamponnés au phosphate (PBS)	Research Products International	P32080-100T
CNA Beta III Archwire	Ortho Organizers, Inc.
GraphPad Prisme  ;	GraphPad Software, Inc.