Nanosponge accordabilité en taille et en densité de réticulation

Résumé

Cet article décrit un processus pour le réglage de la densité de taille et de la réticulation de façon covalente réticulé nanoparticules de polyesters linéaires comportant une fonction pendentif. En adaptant les paramètres de synthèse (poids moléculaire de polymères, incorporation de fonctionnalités pendentif et RETICULATION équivalents), une densité de taille et réticulation de nanoparticules souhaitées peut être obtenue pour demandes de livraison de drogue.

Résumé

Les auteurs décrivent un protocole pour la synthèse de polyesters linéaires contenant pendentif époxyde fonctionnalité et leur incorporation dans un nanosponge avec dimensions contrôlées. Cette démarche commence par la synthèse d’une lactone fonctionnalisée qui est la clé de la fonctionnalisation de pendentif du polymère qui en résulte. Valérolactone (VL) et allyl-valérolactone (AVL) sont retrouvées ensuite à l’aide de polymérisation par ouverture. Après polymérisation modification est utilisée pour installer un groupement époxyde sur certains ou tous les groupes d’allyle. Chimie de l’époxy-amine est employé aux nanoparticules de forme dans une solution diluée de polymère et de petites molécules diamine RETICULATION basé sur la densité de réticulation et de taille nanosponge désiré. Nanosponge tailles peuvent être caractérisées par transmission d’images de microscopie électronique (met) pour déterminer la dimension et la distribution. Cette méthode fournit une voie par laquelle polyesters hautement accordables peuvent créer des nanoparticules accordables, qui peuvent être utilisés pour l’encapsulation de drogue de petite molécule. En raison de la nature de la colonne vertébrale, ces particules sont hydrolytique et enzymatiquement dégradables pour une libération contrôlée d’un large éventail de molécules petites hydrophobes.

Introduction

Tuning avec précision la taille et réticulation de la densité de nanoparticules issus d’intermoléculaire réticulation est d’une grande importance pour influencer et orienter le profil de libération de médicaments de ces nanosystèmes¹. Conception nanosponge accordabilité, c'est-à-direpréparer des particules de densité de réseau différent, est dépendante de la fonctionnalité de pendentif du polymère précurseur et les équivalents de la RETICULATION hydrophile constituée. Dans cette approche, la concentration du précurseur et RETICULATION dans le solvant est importante pour la forme de nanoparticules d’une taille discrète plutôt qu’un gel en vrac. Utilisant la spectroscopie quantitative la résonance magnétique nucléaire (RMN) comme une technique de caractérisation permet la détermination précise des fonctionnalités incorporées de pendentif et de poids moléculaire de polymères. Une fois que les nanoparticules sont forment, ils peuvent être concentrés et solubilisées dans matières organiques sans avoir le caractère d’un nanogel.

Des travaux récents NANOPARTICULE drug delivery a porté sur l’utilisation de poly (lactique-co-glycolique acide) (PLGA) self-assembled nanoparticules^2,3,4,5,6. PLGA a liens dégradables ester qui le rendent approprié pour des applications de livraison de drogue et est souvent combiné avec poly(ethylene glycol) (PEG) en raison de ses propriétés furtif⁷. Cependant, en raison de la nature auto-assemblés PLGA formation de particules, les particules ne peuvent pas être solubilisées dans organiques pour davantage de fonctionnalisation. Contrairement aux nanoparticules PLGA, la méthode proposée fournit réticulation covalente formant une NANOPARTICULE avec tailles définies et la morphologie, qui sont stables en matières organiques et se dégradent dans des solutions aqueuses¹. Avantages de cette approche sont la possibilité d’autres chimiquement fonctionnaliser la surface de la nanosponge⁸, et sa stabilité dans les solvants organiques peut être utilisée pour le chargement après des particules avec des composés pharmaceutiques^1,9. Avec cette méthode, l’encapsulation de molécules hydrophobes de petites est possible par précipitation en milieu aqueux. L’hydrophobicité du squelette polyester ainsi que de la RETICULATION hydrophile court donne à ces particules un caractère amorphe à la température corporelle. En outre, après la drogue de chargement, la particule peut former des suspensions fines en milieu aqueux pour être facilement injecté in vivo. C’est notre objectif dans ce travail d’évaluer les paramètres pour la synthèse de ces nanosponges de polyester et de déterminer celles qui sont importantes pour la conception et le contrôle de la taille et la morphologie.

Protocole

1. Synthèse et caractérisation de la LAV

1. Placez une barre d’agitation magnétique à l’intérieur d’une fiole à fond rond de 500 ml à 2 cols (fiole 1) et scellez-la à l’aide d’un septum en caoutchouc de taille appropriée et d’un fil d’acier. Séchez le flacon à la flamme pour éliminer l’humidité en le purgeant avec de l’azote gazeux relié par une aiguille d’entrée et une aiguille de sortie ouverte dans le septum, tout en utilisant un chalumeau à flamme au butane pour chauffer doucement l’extérieur du ballon en déplaçant la flamme le long de la surface.
   1. Continuez à chauffer tout le ballon en faisant couler la flamme sur la surface jusqu’à ce que l’humidité qui trouble l’intérieur du ballon ne soit plus visible. Retirez la flamme et laissez le ballon refroidir à température ambiante tout en continuant le flux d’azote tout au long de la réaction.
2. Ajouter 156,25 mL de tétrahydrofurane anhydre (THF) à l’aide d’une seringue de 30 mL dans la fiole 1. Refroidir la fiole de 1 à -78 °C avec un bain de glace carbonique/acétone. Surveillez la température à l’aide d’un thermomètre tout au long de la réaction et ajoutez de la glace sèche au besoin pour maintenir -78 °C. Commencez à agiter la barre d’agitation magnétique à l’aide d’une plaque d’agitation magnétique pour créer un léger vortex.
3. Ajouter la N,N-diisopropyléthylamine (DIPA) (3,30 mL, 2,3 x ^10-2 mol) à l’aide d’une seringue de 5 mL, suivie de l’ajout goutte à goutte de 2,5 M de n-butyllithium (9,34 mL, 2,3 x ^10-2 mol) à l’aide d’une seringue en verre de 10 mL munie d’un mécanisme de verrouillage de l’aiguille et d’une aiguille métallique dans la fiole 1. Continuez à remuer à l’aide d’une plaque d’agitation magnétique pendant 15 min à -78 °C.
4. Sécher à la flamme (comme décrit à l’étape 1.1) et purger avec du gaz argon (comme décrit à l’étape 1.1 avec de l’azote gazeux) une fiole à fond rond de 100 mL (fiole 2). Retirez l’entrée et la sortie du gaz argon en même temps une fois que le ballon est suffisamment froid pour être touché. Ajouter 56 ml de THF anhydre à l’aide d’une seringue de 30 mL et de δ-valérolactone (VL) (1,97 mL, 2,1 x ^10-2 mol) à l’aide d’une seringue de 5 mL.
5. Ajouter la solution dans la fiole 2 dans la fiole 1 à l’aide d’une petite canule goutte à goutte pendant 45 minutes tout en remuant continuellement à l’aide d’une barre d’agitation magnétique. Une fois que le ballon 2 est vide, retirez la canule et laissez le ballon 1 continuer à agiter pendant 15 min à -78 °C.
6. Sécher à la flamme (comme décrit à l’étape 1.1) et purger avec du gaz argon (comme décrit à l’étape 1.1 avec de l’azote gazeux) une fiole à fond rond de 25 mL (fiole 3). Retirez l’entrée et la sortie du gaz argon en même temps une fois que le ballon est suffisamment froid pour être touché afin de maintenir une pression positive à l’intérieur du ballon. Ajouter du bromure allié (2,02 ml, 2,3 x ^10-2 mol) et de l’hexaméthyphosphoramide (HMPA) (4,43 ml, 2,5 x ^10-2 mol) chacun à l’aide d’une seringue de 5 ml.
7. Ajouter la fiole 3 à la fiole 1 à l’aide d’une petite canule dans le sens de la goutte. Une fois le flacon 3 vide, retirez la canule.
   1. Retirez autant de glace carbonique et d’acétone froide que possible du bain de glace carbonique/acétone dans lequel le flacon 1 est immergé à l’aide d’une cuillère et d’un gobelet en plastique. Remplacer par de l’acétone à température ambiante pour élever le bain à -40 °C et laisser le flacon 1 continuer à agiter pendant 2 h tout en surveillant la température. Si la température dépasse -40 °C, ajoutez quelques morceaux de glace carbonique pour refroidir l’acétone.
   2. Réchauffez à -10 °C en enlevant l’acétone froide et la glace sèche et remplacez-les par de l’acétone à température ambiante.
8. Retirer le septum de la fiole 1 et éteindre la réaction avec une solution saturée de chlorure d’ammonium de 150 mL tout en agitant à l’aide d’une barre d’agitation magnétique. Placez le flacon 1 au congélateur à -20 °C pendant la nuit pour le stockage.
9. Sortez le flacon 1 du congélateur et laissez-le chauffer à température ambiante. Verser la solution de la fiole 1 dans un entonnoir séparateur de 500 mL.
10. Ajoutez 50 ml de dichlorométhane (DCM), bouchez l’entonnoir séparateur et basculez doucement pour mélanger le DCM et le mélange aqueux/THF afin d’extraire le produit dans la couche organique. Recueillir la couche organique dans un bécher de 500 mL contenant une barre d’agitation magnétique de taille appropriée en ouvrant le robinet d’arrêt de l’entonnoir séparateur et mettre de côté. Répétez l’opération deux fois.
11. Rassemblez tous les composés organiques dans le même bécher et mélangez le sulfate de magnésium (pour éliminer toute eau résiduelle) à l’aide d’une plaque d’agitation magnétique jusqu’à ce que le sulfate de magnésium ne s’agglutine plus lorsqu’il est ajouté à la solution. Jetez les déchets aqueux.
12. Retirer le sulfate de magnésium solide de la solution de produit organique à l’aide d’un papier filtre à l’intérieur d’un entonnoir en verre et recueillir les matières organiques dans une fiole à fond rond de 250 ml. Rincez le papier filtre et le sulfate de magnésium solide avec l’excès de DCM pour vous assurer que tout le produit est recueilli.
13. Éliminer le solvant du produit par évaporation rotative tout en chauffant à 30 °C et en utilisant un aspirateur d’eau comme source de vide.
14. Purifier le produit brut par chromatographie sur colonne¹⁰ en utilisant un gel de silice comme phase stationnaire et en éluant en commençant par 3 % d’acétate d’éthyle/hexanes pour 1 volume de colonne (CV), en augmentant le gradient à 29 % d’acétate d’éthyle/hexanes sur 5 CV. Collecter les fractions dans des tubes en verre borosilicaté de¹⁶ x 150 mm 2.
15. Effectuer une chromatographie sur couche mince en utilisant de l’acétate d’éthyle/hexanes à 20 % comme éluant pour déterminer les fractions de produit.
16. Mélanger toutes les fractions de produit dans une fiole à fond rond de taille appropriée et éliminer le solvant par évaporation rotative à 40 °C. Transférer dans un flacon de produit prépesé et placer sous vide poussé à 0,05 torr pour obtenir une AVL pure. Caractériser le produit par ^{RMN 1}H¹¹ (CDCl₃, 400 MHz) : δ 5,75 (m, 1H), 5,06 (m, 2H), 4,26 (m, 2H), 2,54 (m, 3H), 2,28 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 1,54 (m, 1H). Rendement : 2,07 g (70,56 %).

2. Synthèse et caractérisation des VL- co- AVL

1. Sécher à la flamme et purger à l’azote gazeux une fiole à fond rond de 25 mL équipée d’une barre d’agitation magnétique et d’un septum.
   1. Séchez le flacon à la flamme pour éliminer l’humidité en le purgeant avec de l’azote gazeux relié par une aiguille d’entrée et une aiguille de sortie ouverte dans le septum, tout en utilisant un chalumeau à flamme au butane pour chauffer doucement l’extérieur du ballon en déplaçant la flamme le long de la surface.
   2. Continuez à chauffer tout le ballon en faisant couler la flamme sur la surface jusqu’à ce que l’humidité qui trouble l’intérieur du ballon ne soit plus visible. Retirez la flamme et laissez le ballon refroidir à température ambiante tout en continuant le flux d’azote tout au long de la réaction.
2. Retirez rapidement le septum du fond rond et ajoutez du triflate d’étain(II) (2,5 mg, 5,9 x ^10-6 mol) tout au fond du ballon à l’aide d’une spatule. Replacez le septum.
3. Ajouter séquentiellement du 3-méthyl-1-butanol (72,6 μL, 6,6 x ^10-3 mol) à l’aide d’une microseringue de 100 μL et 1,33 mL de DCM anhydre à l’aide d’une seringue de 2 mL. Remuez à l’aide d’une plaque d’agitation magnétique pendant 10 min.
4. Ajouter AVL (0,48 mL, 3,7 x ^10-3 mol) et VL (1,37 mL, 1,4 x ^10-2 mol) séquentiellement à l’aide d’une seringue. Laisser reposer pendant 18 à 20 h
   REMARQUE : Les pourcentages AVL et VL dans le copolymère final peuvent être modifiés par stœchiométrie dans cette étape.
5. Éteindre la réaction en ajoutant ~5 mL de méthanol (MeOH). Ajouter ~100 mg de piégeur d’étain à support solide et remuer pendant 2 h. Filtrer par filtration par gravité pour éliminer le solide.
6. Éliminer le solvant par évaporation rotative à l’aide d’un aspirateur d’eau comme source de vide tout en chauffant à 30 °C jusqu’à ce que la solution soit visqueuse. Précipiter la solution goutte à goutte dans 500 mL de MeOH froid (refroidi avec de la glace sèche pendant au moins 1 h) pour produire des flocons de solide blanc. Filtrez la solution par filtration sous vide dans un entonnoir contenant un disque de verre fritté avec du papier filtre pour recueillir le solide.
   REMARQUE : Si les précipitations produisent un surnageant trouble ou une poudre fine qui traverse le papier filtre, alors la solution du produit est trop diluée. Tout solvant surnageant doit être éliminé par évaporation rotative à l’aide d’un aspirateur d’eau comme source de vide tout en chauffant à 30 °C jusqu’à ce que la solution soit visqueuse, puis la précipitation doit être effectuée à nouveau.
7. Transférez le produit solide dans un flacon pré-pesé à l’aide d’une spatule et séchez-le pendant la nuit à une pression de vide élevée de 0,05 torr pour recueillir le solide blanc et feuilleté.
Caractérisation du polymère par 1 H RMN11 (CDCl 3, 400 MHz) : δ 5,71 (m, 1H), 5,03 (t, 2H), 4,08 (m, 4H), 3,65 (t, 2H), 2,15 - 2,50 (m, 5H), 1,47-1,78 (m, 9H), 0,91 (d, 6H). 81,42 % VL, 18,58 % AVL, 2 940 g/mol, 578 g/mol unité de répétition AVL.
8. Rendement : 1,43 g, (73,43 %).

3. Époxydation post-polymérisation pour produire des unités de copolymère époxy-valérolactone (EVL)

1. Ajoutez le copolymère VL-co-AVL (500 mg, 1,7 x ^10-4 mol, 2 940 g/mol) dans un flacon de 6 drams avec un barreau d’agitation magnétique. Ajouter 6,15 mL de DCM anhydre dans le flacon et vortex pour solubiliser le polymère.
2. Ajouter de l’acide méta-chloroperoxybenzoïque (mCPBA) (74,53 mg, 4,3 x ^10-4 mol) dans un deuxième flacon de 6 drams. Ajouter 6,15 mL de DCM anhydre et agiter jusqu’à ce que le mCPBA soit complètement solubilisé.
   REMARQUE : Le rapport de conversion des allyles en époxydes peut être modifié en modifiant la stœchiométrie dans cette étape. La concentration finale d’allyle dans le solvant doit être de 0,065 M.
3. Transférez la solution mCPBA vers la solution VL-AVL. Boucher la réaction et couvrir d’un film de paraffine plastique. Laisser agir pendant 48 h.
4. Transférez le mélange réactionnel dans un entonnoir séparateur de 50 ml. Ajouter 15 ml de bicarbonate de sodium saturé, boucher l’entonnoir séparateur et le secouer doucement pour mélanger. Recueillir la couche organique contenant le produit dans un erlenmeyer de 50 mL muni d’un barreau d’agitation magnétique de taille appropriée (fiole de produit).
   1. Ajoutez 5 ml de DCM à la couche aqueuse qui se trouve encore dans l’entonnoir de séparation, le couvercle, puis basculez doucement. Recueillir les matières organiques dans la fiole du produit. Jetez les déchets aqueux. Transférez la couche organique dans un entonnoir de séparation. Répétez ce lavage aqueux deux fois.
5. Ajouter du sulfate de magnésium (pour éliminer toute eau résiduelle) dans la fiole de produit en remuant sur une plaque d’agitation magnétique. Continuez à ajouter de petites cuillères de sulfate de magnésium jusqu’à ce qu’il ne s’agglutine plus lors de l’ajout. À l’aide d’un entonnoir en verre muni d’un papier filtre, enlever le sulfate de magnésium solide tout en transférant le mélange dans une fiole à fond rond de 50 ml.
6. Évacuer le solvant par évaporation rotative à l’aide d’un aspirateur d’eau et chauffage à 25 °C. Transvaser le contenu de la fiole à fond rond dans un flacon de produit prépesé et retirer le solvant par évaporation rotative. Mettre sous vide poussé à 0,05 torr pendant la nuit pour produire un solide blanc et cireux.
7. Caractérisation par RMN ¹H¹¹ (CDCl₃, 400 MHz) : δ 5,71 (m, 1H), 5,03 (t, 2H), 4,08 (m, 4H), 3,65 (t, 2H), 2,94 (d, 1H), 2,90 (s, 1H), 2,74 (s, 1H), 2,15-2,50 (m, 5H), 1,47-1,78 (m, 9H), 0,92 (d, 6H). 84,53 % VL, 9,65 % AVL, 5,82 % EVL, 2 855 g/mol, 1 841 g/mol unité de répétition EVL. Rendement : 417,3 mg, (83,46 %).

4. Synthèse et caractérisation des nanoéponges

1. Dissoudre le polymère VL-co-AVL-co-EVL (200 mg, 7,0 x ^10-5 mol, 2 855 g/mol) dans 20,01 mL de DCM anhydre pour une concentration d’époxyde de 0,0054 M. Transférer dans une fiole à fond rond de 100 mL avec un col 14/20.
   REMARQUE : Pour catalyser la réaction, 100 μL de bicarbonate de sodium saturé aqueux peut être ajouté à cette étape.
2. Placer la fiole réactionnelle dans un bain d'huile à 50 °C. Agiter la solution à l'aide d'un tourbillon rapide et ajouter de la 2,2'-(éthylènedioxy)bis(éthylamine) (21,45 μL, 2,9 ^10-4 mol) à l'aide d'une microseringue dans le sens de la goutte à goutte. Équiper le col de la fiole d’un condenseur à chemise d’eau traversée par de l’eau froide, équipé d’un adaptateur de col 14/20, et faire refluer la solution pendant 12 h. Assurez-vous d’une étanchéité très étanche entre le col du ballon et le condenseur pour éviter l’évaporation du solvant.
3. Éliminer l’excès de solvant de la fiole réactionnelle par évaporation rotative à 25 °C jusqu’à l’obtention d’une solution visqueuse.
4. Placez une grande barre d’agitation magnétique dans un bécher de 2 L. Coupez une section d’environ six pouces d’un tube de dialyse de coupure de poids moléculaire (MWCO) de 10 K et pliez une extrémité, puis fermez-la à l’aide d’une pince de dialyse.
   1. Transférer le produit dans une tubulure de dialyse MWCO de 10 K. Rincez le ballon avec l’excédent de DCM et transférez-le dans la tubulure. Pliez le haut du tube et fermez-le à l’aide d’une pince de dialyse munie d’un fil pour la suspendre. Accrochez le tube de dialyse sur le côté du bécher à l’aide du fil et remplissez le bécher de DCM jusqu’à ce que le tube de dialyse soit complètement immergé.
   2. Placer sur une plaque d’agitation magnétique et remuer doucement. Couvrez le bécher d’une feuille d’aluminium pour éviter l’évaporation du solvant. Retirer le solvant en le versant dans un récipient à déchets et le remplacer par du DCM frais trois fois par jour pendant 48 h pour éliminer le polymère et l’agent de réticulation n’ayant pas réagi.
5. Retirer tout le solvant du bécher et transférer le contenu de la tubulure de dialyse dans une seringue de 10 mL munie d’un filtre à seringue en polytétrafluoroéthylène (PTFE) de 0,45 μm. Poussez la solution à travers le filtre directement dans un flacon de produit pré-pesé pour éliminer toutes les impuretés restantes. Retirez le solvant par évaporation rotative à 25 °C, puis placez-le sous vide poussé à 0,05 torr pendant la nuit pour recueillir le solide cireux jaune clair.
6. Caractérisation par RMN¹H class="xref">11 (CDCl₃, 400 MHz) : δ 5,71 (m, 1H), 5,03 (t, 2H), 4,08 (m, 4H), 3,60-3,67 (t, 14H), 2,94 (d, 1H), 2,90 (s, 1H), 2,74 (s, 1H), 2,15-2,50 (m, 5H), 1,47-1,78 (m, 9H), 0,92 (d, 6H). Rendement : 176,9 mg (88,45 %).

5. Imagerie TEM de la morphologie et de la taille des nanoéponges

1. Filtrez 5 mL d’eau de culture cellulaire à travers un filtre à seringue en PTFE de 0,2 μm.
2. Placez 0,5 mg de nanoéponges dans un tube à centrifuger de 1,5 ml. Ajouter 1 mL d’eau de culture cellulaire filtrée. À l’aide d’un sonificateur (20 kHz, 40 a), sonicer la solution en rafales de 2 s 4 à 5 fois à température ambiante jusqu’à ce que les particules aient développé une suspension fine. N’utilisez pas de sonication prolongée et ne laissez pas la solution chauffer car cela provoquerait une agrégation.
3. Ajouter 30 mg d’hydrate d’acide phosphotungstique (ATP) à 1 mL d’eau de culture cellulaire filtrée dans un tube à centrifuger de 1,5 mL. Vortex sur le réglage le plus élevé pendant 10 s ou jusqu’à ce que le PTA soit complètement solubilisé pour produire une solution de PTA à 3 %.
4. À l’aide d’une seringue de 1 mL avec une aiguille de 22 g, prélever une solution de PTA à 3 % de 0,5 mL. Ajoutez 4 gouttes de la solution PTA à 3 % aux particules et faites un tourbillon sur le réglage le plus élevé pendant 10 s. À l’aide d’une pince à épiler à fermeture automatique, prenez une grille TEM, puis plongez-la rapidement dans la solution de particules, trois fois. Laissez sécher la grille pendant 5 h sous un couvercle pour réduire l’accumulation de poussière sur la grille.
5. Effectuez l’imagerie TEM¹² de l’échantillon en utilisant un contraste élevé et un objectif de 40 μm.

Résultats

Pour évaluer la relation entre les paramètres de synthèse de la nanosponge et sa taille qui en résulte, la fonctionnalité de concentration et pendentif de chaque précurseur de polymère est importante. Dans la Figure 1, un système de successfulsynthetic de nanosponges est effectué dans des conditions de reflux après avoir incorporé les deux précurseurs polymères et diamine RETICULATION dans DCM pendant 12 h. La concentration d’époxydes dans la solution est éga...

Discussion

L’obtention reproductible nanosponge tailles est vital dans les demandes de livraison de drogue. Plusieurs paramètres dans la synthèse de la polymérisation et nanosponge affectent la taille et crosslink de la densité de la particule qui en résulte. Trois paramètres importants ont été identifiés dans notre analyse : poids moléculaire de polymères, la fonctionnalité pendentif époxyde et RETICULATION équivalents. Afin de produire un éventail de poids moléculaires et fonctionnalités époxyde pour la synthèse de nanosponge, la...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
2,2'-(Ethylènedioxy)bis(éthylamine)	Sigma-Aldrich	385506-100ML
3-méthyl-1-butanol	Sigma-Aldrich	309435-100ML	anhydre, &ge ; 99 %
Acétone	Sigma-Aldrich	179124-4L
Bromure d’allyle	Sigma-Aldrich	A29585-5G	&ge ; 99 %
Chlorure d’ammonium	Fisher Scientific	A661-500	solution saturée dans de l’eau DI
Eau de culture cellulaire	Sigma-Aldrich	W3500-500ML	Filtré à travers 0,45 &mu ; m filtre seringue
Dichlorométhane (DCM)	Sigma-Aldrich	270997-100ML	anhydre, &ge ; 99 %, contient 40 - 150 ppm d’amylène comme stabilisant
Acétate d’éthyle	Fisher Scientific	E145SK-4
EZFlow 0.2 &mu ; m Filtre pour seringue	Foxx Life Sciences	386-2116-OEM	PTFE hydrophile, 13 mm
EZFlow 0.45 &mu ; m Filtre à seringue	Foxx Life Sciences	386-3126-OEM	PTFE hydrophile, 25 mm
Fisherbrand Tubes à essai jetables en verre borosilicaté avec extrémité lisse	Fisher Scientific	14-961-31
Fisherbrand Tubes à centrifuger	Fisher Scientific	14-666-318	1,5 mL
Hamilton Microliter Seringue, 100 &mu ; L	Hamilton Company	80600	Modèle 710 N SYR, NDL cimenté, 22s ga, 2 in, point style 2
Hexamethylphosphoramide	Sigma-Aldrich	H11602-100G	&ge ; 99 %, contient &le ; 1 000 ppm d’oxyde de propylène comme stabilisant
Hexanes	Fisher Scientific	H292-4
Sulfate de magnésium anhydre	Fisher Scientific	M65-500
Méta-chloroperoxybenzoïque	Sigma-Aldrich	273031-100G	Purifié à &ge ; 99 % par lavage tampon
Méthanol (MeOH)	Sigma-Aldrich	322415-100ML	anhydre, &ge ; Solution de
N-butyllithium	Sigma-Aldrich	230707-100ML	2,5 M dans les hexanes
N,N-diisopropyléthylamine	Sigma-Aldrich	550043-500ML	&ge ; 99 %
Parafilm M	Sigma-Aldrich	P7793-1EA
PELCO Pro Reverse (Auto-Closer) Pince à épiler	Ted Pella, Inc.	5375-NM
Acide phosphotungstique hydraté	Alfa Aesar	40116
Q55 Sonicateur	Qsonica	Q55-110	55 Watts, 20 kHz
SiliaMetS Cysteine	Silicycle	R80530B-10g
SnakeSkin Clips de dialyse	Thermo Scientific	68011
SnakeSkin Tube de dialyse, 10K MWCO	Thermo Scientific	68100
Bicarbonate de sodium	Fisher Scientific	5233-500	solution saturée dans l’eau DI
Réseau TEM	Ted Pella, Inc.	01822-F	Carbone ultrafin Type-A, 400 mesh, cuivre, taille approximative du trou de la grille : 42 & micro ; m
Tétrahydrofurane (THF)	Sigma-Aldrich	401757-1L	Anhydre, &ge ; 99,9 %, sans inhibiteur
Tin(II) trifluorométhanesulfonate	Sigma-Aldrich	388122-1G
Vortex-Genie 2	Scientific Industries	SI-0236
Papier filtre Whatman, grade 1	Fisher Scientific	09-805H	Cercles, 185 mm
&delta ;-valerolactone	Sigma-Aldrich	389579-100ML	Purifié par distillation sous vide