In Situ MHC-tétramère de coloration et d’analyse Quantitative pour déterminer l’emplacement, l’abondance et le phénotype des cellules T CD8 spécifiques de l’antigène dans les tissus

Shengbin Li; Gwantwa Mwakalundwa; Pamela  J. Skinner

doi:10.3791/56130

Article de méthode

In Situ MHC-tétramère de coloration et d’analyse Quantitative pour déterminer l’emplacement, l’abondance et le phénotype des cellules T CD8 spécifiques de l’antigène dans les tissus

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DOI :

10.3791/56130

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22 septembre 2017

Shengbin Li¹ , Gwantwa Mwakalundwa¹ , Pamela J. Skinner¹

¹Department of Veterinary and Biomedical Sciences, University of Minnesota

Dans cet article

Résumé

Nous décrivons ici une méthode qui combine in situ MHC-tétramère de coloration avec l’immunohistochimie pour déterminer la localisation, phénotype et la quantité de lymphocytes T spécifiques de l’antigène dans les tissus. Ce protocole est utilisé pour déterminer les caractéristiques spatiales et phénotypiques des cellules CD8 T antigène-spécifiques par rapport à d’autre type de cellule et de structures dans les tissus.

Résumé

Les lymphocytes T sont essentiels pour beaucoup de processus immunologiques, y compris la détection et élimination des cellules infectées par le virus, empêchant l’auto-immunité, aidant à la production de B-cellule et cellule-plasma des anticorps et détecter et éliminer les cellules cancéreuses. Le développement de MHC-tétramère de coloration des cellules de T antigène-spécifiques analysés par cytométrie en flux a révolutionné notre capacité à étudier et comprendre l’immunobiologie des cellules T. Bien qu’extrêmement utiles pour déterminer la quantité et le phénotype des cellules T spécifiques de l’antigène, cytométrie de flux ne peut pas déterminer la localisation spatiale des lymphocytes T spécifiques de l’antigène à d’autres cellules et structures dans les tissus et les techniques actuelles de désagrégation pour extraire le T cellules nécessaires à la cytométrie ont une efficacité limitée dans les tissus non lymphoïdes. In situ MHC-tétramère coloration (IST) est une technique permettant de visualiser les cellules T spécifiques d’antigènes d’intérêt dans les tissus. En combinaison avec l’immunohistochimie (IHC), IST peut déterminer l’abondance, localisation et phénotype des cellules CD8 et CD4 T antigène-spécifiques des tissus. Nous décrivons ici un protocole pour la tache et énumérer les cellules CD8 T antigène-spécifiques, avec des phénotypes spécifiques situés à l’intérieur des compartiments de tissus spécifiques. Ces procédures sont les mêmes que nous avons utilisé dans notre publication récente par Li et al., intitulé « cellules productrices des Virus de l’immunodéficience simienne de follicules sont partiellement supprimée par CD8 cellules⁺ In Vivo." Les méthodes décrites sont largement applicables parce qu’ils peuvent servir à localiser, phénotype et quantifier essentiellement n’importe quelle cellule CD8 T antigène-spécifiques pour lesquels les tétramères MHC sont disponibles, dans n’importe quel tissu.