Method Article

Dissection et préparation de tranches coronales de développer la glande pituitaire souris

DOI:

10.3791/56356

⸱

November 16th, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Pathophysiology, Second Military Medical University, 2Department of Cell Biology, Second Military Medical University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nous présentons un protocole pour disséquer les glandes pituitaires et préparer hypophysaires sections coronales des pays en développement de la souris.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

La glande pituitaire ou hypophyse est un organe endocrine sécrétant des hormones essentielles pour l’homéostasie. Il se compose de deux glandes avec origines embryonnaires distinctes et les fonctions — la neurohypophyse et l’adénohypophyse. L’hypophyse en développement de souris est minuscule et délicat avec une forme ovale allongée. Une section coronale est préférée à afficher l’adénohypophyse et la neurohypophyse en une seule tranche de l’hypophyse de la souris.

Le but du présent protocole est d’atteindre la bonne sections coronales hypophysaires avec des architectures de tissu bien préservé des pays en développement de la souris. Dans ce protocole, nous décrivons en détail comment disséquer et traiter des glandes pituitaires correctement des pays en développement de la souris. Tout d’abord, les souris sont fixés par transcardial perfusion de formaldéhyde avant la dissection. Puis les trois techniques différentes de dissection sont appliquées pour obtenir les hypophyses intacts selon l’âge de la souris. Chez les souris foetales de jours embryonnaires (E) 17,5-18,5 et nouveaux-nés vers le haut à 4 jours, les régions de sella entière y compris le sphénoïde, glandes et des nerfs trijumeau sont disséquées. Pour les petits âgés jours (P) 5-14, les glandes pituitaires reliés aux nerfs trijumeau sont disséqués dans son ensemble. Pour les souris âgé de plus de 3 semaines, les glandes pituitaires sont soigneusement disséqués gratuite les tissus environnants. Nous affichons également comment intégrer les glandes pituitaires dans une orientation appropriée en utilisant les tissus environnants comme repères pour obtenir satisfaisant des sections coronales. Ces méthodes sont utiles dans l’analyse des caractéristiques histologiques et du développement des glandes pituitaires dans le développement des souris.

Introduction

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La glande pituitaire ou hypophyse est un organe endocrine sécrétant des hormones essentielles pour l’homéostasie1,2. Anatomiquement, l’hypophyse est une structure '' two-in-one'', consistant en la neurohypophyse et l’adénohypophyse. Ces pièces ont très différemment de fonction et différentes origines embryonnaires. La neurohypophyse est dérivée de l’ectoderme neural et sécrète de l’ocytocine et l’hormone antidiurétique. L’adénohypophyse provient de la poche de Rathke et est responsable de la libération d’hormones dont l’hormone de croissance, prolactine, hormone stimulant la thyroïde, hormone folliculo - stimu....

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Protocol

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souris C57BL/6 sont élevés dans des conditions spécifiques exempts de micro-organismes pathogènes. Toutes les méthodes expérimentales animales sont en conformité avec les directives approuvées par le Comité d’éthique à l’Université de médecine militaire de seconde et animalier.

1. dissection de Postnatal développant hypophyse

  1. Perform anesthésie : placer la souris néonatales (P0 - P5) sur la glace pilée pour induire l’hypothermie. Pour les souris âgées de 5 jours, injecter 5 % uréthane (30 µL/g de poids corporel) par voie intrapéritonéale pour induire l’anesthésie. Évaluer les réponses pour queue/orteil pincées. Poursuivre unique....

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Results

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Ce protocole présente une méthode pour disséquer les glandes pituitaires des pays en développement de la souris. Pour la souris néonatale, des régions entières sella contenant la glande pituitaire, les nerfs trijumeau et le dessous sphénoïde ont été disséqués à partir de la base du crâne. L’hypophyse minuscule et délicate sont restés intact au cours du processus (Figure 1 a). Pour les souris plus de 5 jours, les glandes pituitaires attachés aux nerfs trijumea.......

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Discussion

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Pour développer des hypophyses murins, il a été techniquement difficile d’obtenir des sections coronales appropriées en raison de leurs caractéristiques de minuscules et fragiles et les particularités anatomiques6,8. Certains groupes de recherche a donc choisi des sections misagittal d’analyser la morphologie embryonnaire et néonatale hypophysaire11,,12. Bien que la section longitudinal de l’hypophyse es.......

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ce travail a été soutenu par les subventions de la Fondation de sciences naturelles nationales de la Chine (31201086, 31470759 et 31671219) et la Fondation des sciences naturelles de Shanghai (12ZR1436900).

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Tools/Equipment
Ciseaux chirurgicaux-droitsJinZhongJ21010peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Ciseaux fins à tensionJinZhongWA1010peut être acheté auprès d’autres fournisseurs Pince
émousséeJinZhongJD1020peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Pinces finesDumontRS-5015pour l’isolement de l’aiguille pituitaire
26G (0,45 mm)HongDapour perfusion transcardique
Seringue (1 mL)BD300841 peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Seringue (10 mL)BDpeut être acheté auprès d’autres fournisseurs Antenne
de 35 mmCorning430165peut être achetée auprès d’autres fournisseurs
Le papier de nettoyaged’objectif ShuangQuanpeut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Microscope anatomiqueOLYMPUSSZX-ILLB2-200peut être acheté auprès d’autres fournisseurs Cassette
d’encastrementThermo Fisher22-272423peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Système de console d’encastrement de tissusKEDEE KD-BM11peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
MicrotomeThermo FisherHM315Rpeut être acheté auprès d’autres fournisseurs Lames
Superfrost-PlusThermo Fisher22-037-246peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Verre de couvertureThermo Fisher12-543peut être acheté auprès d’autres fournisseurs
Microscope à fluorescenceOLYMPUSBH2-RFCApeut être acheté auprès d’autres fournisseurs
NomEntrepriseNuméro de catalogueComments
Reagents
UrethaneBBI EB0448
NaClSigmaS9625pour PBS
KClSigmaP9541pour PBS
Na2HPO4.12H2OSigma71650pour PBS
K2HPO4SigmaP2222pour PBS
NaNO2Sigma237213
Héparine sodique injectableSPHH31022051pour perfusion saline
Paraformaldéhyde (PFA)SigmaP6148
EthanolSCR10009218
XylèneSCR10023418
ParaffineThermo Fisher8330
HématoxylineSigmaH9627pour H& Coloration E
Eosin YSigmaE4009pour H& E coloration lapin
anti hormone de croissance (GH)Hormonepour immunocoloration anticorps
hypophysaire
Lapin anti-souris Anticorps GFAPSigmaG9269pour immunocoloration
Chèvre anti-lapin IgG, HRPJackson111-035-003pour immunocoloration
Système TSANEN Produits de sciences de la vieNEL700pour l’immunomarquage
Streptavidine, Alexa Fluor 594Thermo FisherS32356pour l’immunomarquage
Anti-FITC Alexa Fluor 488Thermo FisherA11090pour l’immunomarquage
nationale Programme

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauquier, T., Lacampagne, A., Travo, P., Bauer, K., Mollard, P. Hidden face of the anterior pituitary. Trends Endocrinol Metab. 13 (7), 304-309 (2002).
  2. Haedo, M. R., et al. Regulation of pituitary function by cytokines. Horm Res. 72 (5), 266-274 (2009).
  3. Zhu, X., Gleiberman, A. S.....

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Pituitary Gland DissectionCoronal Section PreparationMouse Pituitary DevelopmentTissue Embedding TechniqueSellar Region IsolationTrigeminal Nerve OrientationParaffin Wax SectioningHistological Analysis MethodImmunolabeling CompatibilityDeveloping Mouse Pituitaries

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