Une Technique de Squash de tube séminifère pour l’analyse cytologique de la spermatogenèse en utilisant le modèle de souris

Stephen R Wellard; Jessica Hopkins; Philip W. Jordan

doi:10.3791/56453

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Article de méthode

Une Technique de Squash de tube séminifère pour l’analyse cytologique de la spermatogenèse en utilisant le modèle de souris

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DOI :

10.3791/56453

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6 février 2018

Stephen R Wellard^*¹ , Jessica Hopkins^*¹ , Philip W. Jordan¹

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, Johns Hopkins Bloomberg School of Public Health

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

L’objectif de cette technique de courge tubule est d’évaluer rapidement les caractéristiques cytologiques de mettre au point les spermatocytes de souris tout en préservant l’intégrité cellulaire. Cette méthode permet l’étude de toutes les étapes de la spermatogenèse et peut être facilement mis en œuvre aux côtés d’autres approches biologiques biochimiques et moléculaires pour l’étude de la méiose de souris.

Résumé

La progression méiotique chez les mâles est un processus qui exige l’action concertée d’un certain nombre d’événements cellulaires très réglementés. Erreurs qui se produisent au cours de la méiose peuvent mener à l’infertilité, perte de grossesse ou des anomalies génétiques. Commençant au début de la puberté et tout au long de l’âge adulte, des ondes continues semi-synchrone des spermatocytes subissent la spermatogenèse et finalement forment les spermatozoïdes haploïdes. La première vague des spermatocytes de souris en cours de méiose initiation apparaissent au jour 10 après l’accouchement (10 dpp) et sont libérés dans la lumière des tubules séminifères comme les spermatozoïdes matures à 35 dpp. Par conséquent, il est avantageux d’utiliser des souris dans cette fenêtre de temps du développement afin d’obtenir des populations fortement enrichies d’intérêt. Analyse des étapes de rares cellules est plus difficile chez les souris âgées grâce à l’apport de la spermatogenèse vagues successives, qui augmentent la diversité des populations cellulaires dans les tubules. La méthode décrite ici est une technique facilement mis en œuvre pour l’évaluation cytologique des cellules trouvées dans les tubules séminifères des souris, y compris les spermatogonies, les spermatocytes et les spermatides. La technique de courge tubule maintient l’intégrité des cellules germinales des mâles isolés et permet l’examen des structures cellulaires qui ne sont pas facilement visualisés avec d’autres techniques. Pour illustrer les applications possibles de cette technique de courge tubule, l’axe a été suivie dans les spermatocytes progresse par le biais de la prophase à la métaphase qu'i de transition (transition G2/MI). En outre, duplication du centrosome, inactivation méiotique des chromosomes sexuels (MSCI) et formation de bouquet de chromosomes ont été évalués comme exemples des structures cytologiques que l'on peut observer à l’aide de cette méthode de squash du tubule. Cette technique peut servir à repérer les défauts spécifiques au cours de la spermatogenèse qui résultent de la mutation ou perturbations exogènes, et contribue ainsi à notre compréhension moléculaire de la spermatogenèse.

Introduction

La méiose est un événement cellulaire complexe dans lequel un rond simple de réplication de l’ADN est suivi de deux cycles successifs de la division cellulaire. Plusieurs événements spécifiques à la méiose doivent être coordonnés au cours des stades de la méiose pour assurer la ségrégation des chromosomes précis. Ces événements comprennent l’achèvement de la recombinaison, orientation Co de sœur kinétochores au cours de la première division méiotique et la perte progressive des cohesin complexes pour résoudre les chiasmes entre homologues. Régulation précise de ces processus est nécessaire pour maintenir la fertilité et d’empêcher les événements de missegregation de c....