Méthodologie pour la chimie biomimétique Neuromodulation des rétines de Rat avec le neurotransmetteur Glutamate In Vitro

Corey M. Rountree; John B. Troy; Laxman Saggere

doi:10.3791/56645

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Méthodologie pour la chimie biomimétique Neuromodulation des rétines de Rat avec le neurotransmetteur Glutamate In Vitro

7.4K vues

⸱

DOI :

10.3791/56645

⸱

19 décembre 2017

Corey M. Rountree¹ , John B. Troy² , Laxman Saggere¹

¹Department of Mechanical and Industrial Engineering, University of Illinois at Chicago, ²Department of Biomedical Engineering, Northwestern University

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une nouvelle méthode pour étudier une forme de neurostimulation chimique de wholemount rat rétines in vitro avec le neurotransmetteur glutamate. Neurostimulation chimique est une alternative prometteuse à la neurostimulation électrique conventionnelle des neurones de la rétine pour traiter la cécité irréversible causée par des maladies dégénératives de photorécepteurs.

Résumé

Maladies dégénératives photorécepteur causent la cécité irréparable par la perte progressive des cellules photoréceptrices de la rétine. Prothèses rétiniennes sont un traitement émergent pour les maladies dégénératives de photorécepteurs qui visent à restaurer la vision en stimulant artificiellement les neurones rétiniens survivants dans l’espoir de susciter une perception visuelle compréhensible chez les patients. Prothèses rétiniennes actuels ont fait preuve de succès dans le rétablissement de la vision limitée aux patients utilisant un tableau d’électrodes pour électriquement stimule la rétine mais font face à des obstacles physiques considérables pour restaurer l’acuité élevée, une vision naturelle aux patients. Neurostimulation chimique à l’aide de neurotransmetteurs natives est une stimulation alternative électrique biomimétique et pourrait contourner les limitations fondamentales associées à des prothèses rétiniennes à l’aide de neurostimulation électrique. Plus précisément, neurostimulation chimique a le potentiel de restaurer une vision plus naturelle avec acuités comparables ou supérieure aux patients par l’injection de très faibles quantités de neurotransmetteurs, les mêmes agents naturels de communication utilisés par la rétine produit chimique synapses, à une résolution beaucoup plus fine que les prothèses électriques actuels. Cependant, comme un paradigme de stimulation relativement inexploré, il n’y a aucun protocole pour parvenir à la stimulation chimique de la rétine en vitro. Le but de ce travail est de fournir un cadre détaillé pour l’accomplissement de la stimulation chimique de la rétine pour les chercheurs qui souhaitent étudier le potentiel de neuromodulation chimique de la rétine ou similaire des tissus neuraux in vitro. Dans ce travail, nous décrivons le montage expérimental et la méthodologie pour ganglionnaires rétiniennes cellulaire (RGC) spike réponses similaire à visual réactions légères en sauvage et wholemount photorécepteur-dégénéré rétine de rat en injectant contrôlée des volumes de le neurotransmetteur glutamate dans l’espace sous-rétinienne utilisant des micropipettes de verre et un dispositif microfluidique multiport personnalisé. Cette méthodologie et le protocole sont assez générales pour être adapté à la neuromodulation à l’aide d’autres neurotransmetteurs ou même d’autres tissus nerveux.

Introduction

Photorécepteurs des affections dégénératives, comme la rétinite pigmentaire et la dégénérescence maculaire liée à l’âge, sont en tête des causes héréditaires de perte de vision et sont actuellement incurables¹^,². Bien que ces maladies proviennent d’une variété de mutations génétiques spécifiques, maladies dégénératives photorécepteurs sont caractérisés en tant que groupe par la perte progressive des cellules photoréceptrices de la rétine, qui finit par provoquer la cécité. La perte des déclencheurs de photorécepteurs généralisées transformant tout au long de la rétine, mais survivre les neurones de la rétine, ....