Injection de contraste percutanée guidée par échocardiographie intramyocardique et livraison de cellule dans un modèle préclinique grand

Summary

Nouvelles stratégies thérapeutiques en médecine régénérative cardiaque nécessitent des études étendues et détaillées dans des modèles animaux précliniques grands avant ils peuvent être considérés pour une utilisation chez l’homme. Ici, nous démontrons une technique d’injection de contraste percutanée guidée par échocardiographie intramyocardique chez le lapin, qui est précieux pour l’efficacité de ces traitements novateurs des tests d’hypothèses.

Abstract

Thérapie cellulaire et génique sont passionnants et des stratégies prometteuses dans le but de la régénération cardiaque dans le cadre de l’insuffisance cardiaque avec réduit la fraction d’éjection (HFrEF). Avant de pouvoir être considérées comme devant servir et mis en œuvre chez l’humain, des études précliniques sont tenus dans des modèles animaux grands pour évaluer l’innocuité, l’efficacité et sort de l’injection de co-Set (par exemple, les cellules souches) livrée une fois dans le myocarde. Petits rongeurs modèles offrent des avantages (p. ex., rapport coût/efficacité, susceptibilité manipulations génétiques) ; Cependant, compte tenu des limitations inhérentes à ces modèles, les résultats dans ces traduisent rarement à l’infirmerie. À l’inverse, grands modèles animaux comme les lapins, ont des avantages (p. ex., électrophysiologie cardiaque similaire, par rapport aux humains et autres animaux de grande taille), tout en conservant un bon équilibre économique. Ici, nous démontrons comment réaliser une technique d’injection (IMI) de guidée par échocardiographie intramyocardique contraste percutanée, qui est peu invasive, sûr, bien toléré et très efficace dans la prestation ciblée d’injectates, y compris les cellules, dans plusieurs localités dans le myocarde d’un modèle de lapin. Pour la mise en œuvre de cette technique, nous avons également pris avantage d’un système d’échocardiographie clinique largement disponibles. Après avoir mis en pratique le protocole décrit ici, un chercheur ayant connaissance de base d’échographie va devenir compétent dans l’exercice de cette technique polyvalente et mini-invasive pour utilisation en routine dans les expériences, visant à la vérification des hypothèses de la capacités de cardiaque thérapeutique régénératrice dans le modèle de lapin. Une fois que la compétence est atteint, l’ensemble de la procédure peut être réalisée au sein de 25 min après anesthésier le lapin.

Introduction

Thérapies cellulaires et géniques sont passionnant et jamais développer des stratégies pour régénérer/réparer le myocarde blessé dans HFrEF. Quelques études ont comparé l’efficacité (p. ex., taux de rétention cellulaire) des différentes routes de livraison de la cellule, qui ont constamment démontré la supériorité de l’IMI sur routes intracoronaire ou intraveineuse^{1,2 , 3 , 4 , 5}. il n’est donc pas surprenant qu’une grande partie des études sur des modèles translationnelles de la thérapie de cellul....

Protocol

Les expériences décrites dans les présentes ont été approuvées par le Comité éthique de la recherche de l’Université de Murcia, Espagne et ont été effectuées conformément à la Directive 2010/63/UE de la Commission européenne. Les étapes décrites ont été effectuées dans le cadre des protocoles d’exploitation standards qui faisaient partie du plan de travail et n’ont pas été effectuées uniquement dans le but de filmer la vidéo ci-jointe au présent document.

1. préparation des cellules et le vecteur d’Expression chez les mammifères

NOTE : Ici, nous décrivons brièvement un protocole pour la préparation et la transfecti....

Results

IMI du contraste percutanée guidée par échographie avec InI :

En utilisant le protocole décrit ci-dessus, et une fois le positionnement optimal de la pointe de l’aiguille a été confirmé par échocardiographie et l’injection initié, transmurale hyperechogenicity a été observée lors de la livraison de l’InI (10 % v/v dans du PBS) (Figure 2E) , aussi bien que peu de temps après l’IMI à .......

Discussion

L’objectif principal était de développer une technique mini-invasive qui pourrait être utilisée pour la livraison des cellules souches dans le myocarde de lapins (un grand taille animal modèle préclinique)^17,18, tout en profitant de l’utilisation d’un relativement peu coûteux d’imagerie système facilement disponible dans de nombreuses cliniques et centres de recherche. Ici, nous montrons que, en utilisant un système d’échocardiographie clinique, et aidé par l’InI.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Système d’échographie HD11 XE	Philips	10670267	Système d’échocardiographie.
S12-4	Philips	B01YgG	4-12 MHz transducteur à réseau
de phases Gel de transmission à ultrasons (Aquasone)	Parket laboratories Inc	N 01-08
Vasovet 24G	Braun	REF 381212	; cathéter à l’aiguille
Omnifix-F Seringue de 1 ml	Braun	9161406V
Imalgene (Kétamine)	Merial	RN 9767	Une prescription vétérinaire est nécessaire
Domtor (Medetomidine)	Esteve	CN 570686.3	Une prescription vétérinaire est nécessaire
Coussin
Faber-Castel TG1	Faber-Castel	16 33 99	Inde (Chine) Encre
Holter Syneflash	Ela médical	SF0003044S	système Holter ECG 24 h.
Électrodes Blue Sensor® ;	Ambu (NUMED)	VLC-00-S	Électrodes ECG Holter.
Microtome	Leica Biosystems	RM2155
Microscope	Olimpus	CO11
ABC Vector Elite	Vector Laboratories	PK-6200	Kit complexe de biotine Avidin.
Anticorps anti-GFP de poulet	Invitrogen	A10262	Anticorps primaire.
Anticorps IgG de chèvre biotinylés anti-poulet	Laboratoire	d’anticorps secondaires	BA-9010
3,30-diaminobenzidine tétrachlorhydrate (DAB)	DAKO (Agilent)	S3000
	Zeiss MicroImaging	Zeiss AX10 Axioskop
Holter ECG	Elamedical	Syneflash SF0003044S
Dulbecco' s Eagle medium modifié (DMEM)  ;	Fisher Scientific	11965084
10 % de sérum de veau fœtal (FCS)	Fisher Scientific	11573397
0,05 % d’acide trypsine-éthylènediaminetétraacétique (EDTA)	Fisher Scientific	25300054
Lipofectamine 2000 (réactif de transfection lipidique)	Fisher Scientific	11668019
milieu sérique réduit (Opti-MEM)	Fisher Scientific
Hygromycine B	Calbiochem (MERCK)	400051
Xylène (histologique)	Fisher Scientific	X3S-4
Solution de peroxyde d’hydrogène (H2O2)	Sigma	H1009
Pronase	Fisher Scientific	53-702-250KU