Sous-rétinienne Transplantation de cellules souches embryonnaires humaines pigmentaires rétiniennes dérivées de cellules épithéliales dans un modèle grand aux yeux de l’atrophie géographique

Sandra Petrus-Reurer; Hammurabi Bartuma; Monica Aronsson; Sofie Westman; Fredrik Lanner; Anders Kvanta

doi:10.3791/56702

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Article de méthode

Sous-rétinienne Transplantation de cellules souches embryonnaires humaines pigmentaires rétiniennes dérivées de cellules épithéliales dans un modèle grand aux yeux de l’atrophie géographique

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DOI :

10.3791/56702

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22 janvier 2018

Sandra Petrus-Reurer^*¹^,² , Hammurabi Bartuma^*¹ , Monica Aronsson¹ , Sofie Westman¹ , Fredrik Lanner² , Anders Kvanta¹

¹Clinical Neuroscience, Section for Ophtalmology and Vision, Karolinska Institutet, ²Clinical Sciences, Intervention and Technology, Division of Obstetrics and Gynecology, Karolinska Institutet

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Cellules épithéliales pigmentaire rétinien pouvaient constituer une thérapie cellulaire-remplacement de la forme avancée de la dégénérescence maculaire sèche liée à l’âge. Ce protocole décrit la génération d’un modèle grand aux yeux de l’atrophie géographique et la sous-rétinienne transplantation de cellules épithéliales pigmentaire rétinien dérivé de cellules souches embryonnaires humaines dans ce modèle de la maladie.

Résumé

L’atrophie géographique (GA), le dernier stade de la dégénérescence maculaire liée à l’âge sèche se caractérise par la perte de la couche pigmentaire rétinien épithéliale (RPE), qui mène à la dégénérescence ultérieure des structures rétiniennes vitales (par exemple, photorécepteurs) causant déficience visuelle grave. De même, pre-perte et diminution de l’acuité visuelle est vu dans suivre à long terme jusqu'à des diabétiques avancée liées à l’âge dégénérescence maculaire humide (AMD) recevant un traitement anti-vasculaire facteur de croissance endothéliale (VEGF) intravitréenne. Par conséquent, d’une part, il est fondamental pour calculer efficacement les cellules RPE provenant d’une source illimitée qui pourrait servir de traitement substitutif. En revanche, il est important d’évaluer le comportement et l’intégration des cellules dérivées d’un modèle de la maladie entraînant chirurgicale et des méthodes d’imagerie comme près que possible de celles appliquées dans les humains. Ici, nous fournissons un protocole détaillé basé sur nos publications antérieures qui décrit la génération d’un modèle préclinique de l’Assemblée générale à l’aide de le œil de lapin albinos, pour évaluer les cellules souches embryonnaires humaines dérivées des cellules épithéliales pigmentaire rétinien (CSEh-RPE) dans un paramètre cliniquement pertinente. PRE-CSEh différenciée sont transplantées yeux naïfs ou les yeux NaIO₃-induite de GA-comme la dégénérescence rétinienne à l’aide d’une technique 25 G transvitreal pars plana. Évaluation des zones dégénérées et transplantés est réalisée par imagerie en temps réel non invasif multimodale à haute résolution.

Introduction

Ce protocole décrit la génération d’un modèle préclinique grand aux yeux de l’atrophie géographique (GA) qui permet l’évaluation de l’intégration de CSEh-RPE transplanté dans l’espace sous-rétinienne. Les méthodes décrites en détail ici ont été utilisés dans les 3 publications récentes qui démontrent la production d’une population enrichie, pure et fonctionnelle des cellules RPE de CSEh¹, ainsi que la création de dommages rétiniens externe et un phénotype de type GA induite par l’injection sous-rétinienne de solutions salines et physiologiques (c.-à-d., BSS et PBS) ou NaIO₃ dans le lapin yeux²^,