Évaluation de sperme de poissons à l’aide de logiciels et de dispositifs de refroidissement

Summary

Le présent protocole décrit une procédure d’évaluation de sperme du poisson à l’aide de spermogramme assistée par ordinateur et de dispositifs de refroidissement. Le logiciel donne un rapide, précis et l’analyse quantitative de la qualité du sperme poisson basée sur la motilité des spermatozoïdes, qui peut être un outil utile pour l’aquaculture afin d’améliorer le succès de la reproduction.

Abstract

Pour l’évaluation de qualité de gamètes, il y a des techniques innovantes, rapides et quantitatives pouvant fournir des données utiles pour l’aquaculture. Systèmes informatisés pour l’analyse du sperme ont été développées pour mesurer plusieurs paramètres et un du plus souvent mesurée est la motilité des spermatozoïdes.

Au départ, cette technologie informatique a été conçue pour les espèces de mammifères, mais il peut également être utilisé pour l’analyse de sperme des poissons. Les poissons ont des caractéristiques spécifiques qui peuvent affecter le sperme évaluation comme un temps de motilité court après l’activation et, dans certains cas, adaptation aux températures inférieures. Ainsi, il est nécessaire de modifier les composants logiciels et du matériel pour faire l’analyse de motilité plus efficace pour l’analyse du sperme poisson. Pour des spermatozoïdes chez les mammifères, la plaque chauffante est utilisée pour maintenir les températures optimales de spermatozoïdes. Toutefois, pour certaines espèces de poissons, il est avantageux d’utiliser une température plus basse pour prolonger la durée de la motilité, étant donné que les spermatozoïdes restent actives pendant moins de 2 min. Dispositifs de refroidissement sont donc nécessaires de réfrigérer les échantillons à température constante pendant la durée de l’analyse, le microscope optique. Ce protocole décrit l’analyse de la motilité de sperme du poisson à l’aide de logiciels pour l’analyse du sperme et de nouveaux dispositifs afin d’optimiser les résultats de refroidissement.

Introduction

L’efficacité de la reproduction dépend de la qualité de ces deux gamètes (oeufs et du sperme)^1,2. C’est le principal facteur qui contribue à une fécondation réussie, permettant le développement d’une descendance viable^3,4. L’évaluation pratique de la qualité des gamètes est le meilleur outil pour définir le potentiel de fécondité d’un spécimen.

Mélange de spermatozoïdes provenant de plusieurs mâles est une pratique courante dans la production de nombreuses espèces commerciales aquatique⁴. Cependant, l....

Protocol

Procédures avec des sujets animaux ont été approuvées (2015/VSC/pois/00064) par la Direction générale de la Production agricole et l’élevage à l’Universitat Politècnica de València.

1. recueillir des spermatozoïdes d’anguilles européennes matures en captivité

Remarque : Utilisation anguille européenne les mâles maintenus dans des réservoirs avec l’eau de mer et un système de recirculation à température constante (20 ° C). Traiter avec des hormones par injection intrapéritonéale hebdomadaire (gonadotrophine chorionique humaine (hCG) ; 1,5 UI / g de poids poisson). Acclimater les poissons graduellement à partir de 3 ....

Results

Analyse de l’effet du temps sur la motilité des spermatozoïdes

Dans le cas de l’anguille européenne, le pourcentage de spermatozoïdes statiques est passée de 15 s à 120 s après l’activation (à partir de 24,4 % à 40,7 %) et le pourcentage de spermatozoïdes progressives mobiles a diminué (passant de 36,9 % à 20,9 %) (Figure 1 a et 1 b). Basé sur la vitesse, cellules s.......

Discussion

Le logiciel d’analyse de sperme utilisé dans le présent protocole a servi par des chercheurs dans le monde entier pour les différentes espèces, y compris les poissons. Cependant, les poissons ont certaines caractéristiques spécifiques qui peuvent influer sur l’évaluation de sperme. Spermatozoïdes de poissons a montré la grande vitesse au moment de l’activation qui décline rapidement et mène à une courte période de motilité après activation. En outre, la température de reproduction dépend de l’espèce et, dans certains cas.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Gonadotrophine chorionique humaine	Argent Chemical Laboratories	hCG	Hormone
Benzocaïne	Merck	E1501 Sigma	Anesthésie
bicarbonate de sodium	Merck	S5761 Sigma  ;	P1 moyen
chlorure de sodium	Merck	1.06406 EMD Millipore	P1 chlorure de
magnésium	Merck	1374248 USP	P1 chlorure de
potassium	moyen Merck	P3911-500G	P1 chlorure de
calcium	Merck	C7902-500G	P1
sel commercial	Aqua Medic ;	Meersalz	Activator solution  ;
BSA	Merck	05470 Sigma	Activator solution  ;
Tubes Falcon 15 ml	Merck	T1943-1000EA
Tubes Falcon support	Merck	R5651-5EA
Eppendorfs	Merck	T9661-1000EA
Micropipet 20 µ ; l	Gilson	PIPETMAN® ;
10 & micro ; l	Merck	Z683787-1EA
Embouts pour micropipets 20 µ ; l	Merck	Z740030-1000EA
Embouts pour micropipets 10 µ ; l	Merck	Z740028-2000EA
Spermtrack	PROiSER		de comptage
TruMorph	PROiSER	TruMorph
UB 200i Série	PROiSER	Microscope
Plaque réfrigérante	PROiSER Prototype PROiSER
Bloc réfrigérant	PROiSER		Prototype
ISAS v1	Logiciel PROiSER	ISAS