Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par le Comité local d’éthique (Comité éthique de l’Université Doshisha : 15033) et étaient en stricte conformité avec les normes fixées par la déclaration d’Helsinki. Le consentement éclairé a été obtenu de tous les participants. Participants étaient de sexe masculin "loisir" (âge, 20,1 ± 1,2 ans ; poids, 69.7 ± 6,2 kg ; hauteur, 176,1 ± 5,8 cm ; corps gras 13,6 ± 1,5 % et VO2max, 52,6 ± 6,6 mL/min1/kg1).
1. mise en place du protocole exercice
Remarque : La présente étude se composait de l’évaluation du sang hormonal et dynamique des métabolites par prélèvement de sang de la veine antécubitale pendant un protocole HIIE.
- Demander l’objet pour effectuer une chaleureuse place avec 5 min de vélo à l’ergomètre à faible intensité. Après l’échauffement, laisser le sujet reposer pendant 5 min.
- Demander l’objet pour effectuer la HIIE suivant dans la bicyclette ergométrique à jambe : trois périodes d’exercice de haute intensité 30 s, séparés par 4 min de repos (Figure 1).
Remarque : Les 30 épisodes de s doivent être réglées avec une intensité égale à 90 % la moyenne de la puissance d’un test de Wingate auparavant pratiquées. Voir ailleurs8 pour une description complète de l’épreuve de Wingate.
- Pour calculer la charge de travail pour les 30 épisodes de s, utiliser les équations suivantes :
Travail = Force x Distance (équation 1)
Force = masse x accélération (équation 2)
Travail = (masse x accélération) x Distance (équation 3)
Remarque : Dans ce modèle, la Messe est à la charge de travail (kg), et l’accélération est 9,81 m/s2. La distance est le diamètre de la roue (1,622 m). Parce que la roue tourne 3.7 rotation /peal temporisée, la distance par tour de pédale est 3,7 x 1.662. En outre, parce que le pédalage est 90 tr/min1, nous devons multiplier une distance pédale par 90.
Travail = charge de travail x 9,81 x 3,7 x 1,622 x 90 (équation 4)
Charge de travail = travail / (9,81 x 3,7 x 1,622 x 90) (équation 5)
2. cathétérisme
NOTE : Tubes et Vacutainer devrait être étiquetés à l’avance pour ne pas perdre de temps.
- Enroulez un garrot au bras sélectionné pour le cathétérisme. Pour ce faire, placez une bande élastique à l’arrière de la branche choisie. La bande d’élongation, faire une boucle avec la bande autour du bras et nouer l’élastique.
- Sélectionnez la veine antécubitale visible et stériliser la peau avec l’éthanol ou alcool.
- Insérez l’extrémité de la canule stérile dans la veine à un angle d’environ 15° avec la peau.
Remarque : La canule doit être insérée de proximale à distale direction. Si canulation est réussie, on devrait observer une backflush de sang.
- Fixez la canule avec la main et retirer l’aiguille doucement.
Remarque : Pour maintenir l’angle de l’aiguille au cours de l’exercice, tissus de coton peuvent être utilisés entre la peau et l’aiguille. Fixez cette structure avec un ruban.
- Connecter un vacutainer avec l’héparine et aspirer pour le premier échantillon de sang (environ 2,5 mL). Immédiatement après, réfrigérer l’échantillon de sang en le plaçant dans une boîte de glace pendant pas plus de 40 minutes. Demander un assistant de l’aide, si les gaz sanguins vont être analysés.
- Raccorder un tube sur le cathéter et injecter l’héparine toute la longueur du tube pour éviter la coagulation du sang. Fermer le papillon.
- À l’aide de ruban adhésif, stabiliser le cathéter. Veiller à ce qu’à ce stade, la mobilité du bras du sujet n’interfère pas avec le prélèvement de sang. Pour confirmer cette condition, n’oubliez pas que la position de l’aiguille n’est pas affectée par n’importe quel mouvement.
3. prélèvements de sang
- Supprimer l’héparine en utilisant un vacutainer dans le cathéter, il y a que du sang. Lorsqu’on observe de flashback de sang, recueillir l’échantillon comme indiqué au point 2.5.
- Après le prélèvement des échantillons, injecter l’héparine à nouveau dans le tube du cathéter pour éviter la coagulation du sang. Après cette action, étape 2.5 peut être répété avec plusieurs collection d’échantillons.
- Après que le dernier échantillon est recueilli, retirer le tube de canulation soigneusement et nettoyer la peau avec de l’alcool. Pour éviter tout saignement possible, demander l’objet pour garder le coton stérilisé à l’endroit où le cathétérisme a été effectué.
- Après que le sang est recueilli dans les tubes vacutainer, soigneusement passer environ 1,5 mL de sang dans un tube de 1,5 mL et garder les tubes sur la glace.
- Mesure de lactate sanguin du sang restant à l’aide d’un détecteur de lactate. Le même jour, obtenir le plasma, les échantillons de sang (environ 1,5 mL de sang).
- Pour la séparation du plasma, centrifuger les échantillons de sang pendant 5 min à 5000 x g à 4 oC et séparer le surnageant dans un nouveau tube de 1,5 mL.
- Répétez la centrifugation une fois de plus pour purifier le plasma.
- Après la séparation du plasma, stocker les échantillons à-80 oC jusqu'à l’analyse de l’hormone.
- Mesurer l’insuline plasmatique à l’aide d’un kit ELISA que par le fabricant protocole (voir Table des matières).