Une procédure complète d’évaluer la Performance In Vitro de la néovascularisation Hémangioblastome putatif à l’aide de l’ellipsoïde test de germination

Summary

Cet article présente une procédure complète pour évaluer in vitro si angiogenèse tumorale classique existe dans les hémangioblastomes (HBs) et son rôle dans HBs. Les résultats soulignent la complexité de la néovascularisation-HB et suggèrent que cette forme courante d’angiogenèse est seulement un mécanisme complémentaire dans la néovascularisation-HB.

Abstract

L’inactivation du gène suppresseur tumeur von Hippel-Lindau (VHL) joue un rôle crucial dans le développement des hémangioblastomes (HBs) dans le système nerveux central (CNS) humain. Toutefois, tant l’origine cytologique et le processus évolutif d’HBs (y compris la néovascularisation) demeurent controversées, et anti-angiogènes pour VHL-HBs, basés sur le classique HB angiogenèse, donnent des résultats décevants dans les essais cliniques. Un obstacle majeur à la traduction clinique réussie du traitement anti-vasculaire est l’absence d’une compréhension approfondie de la néovascularisation dans cette tumeur vasculaire. Dans cet article, nous présentons une procédure complète pour évaluer in vitro si angiogenèse tumorale classique existe en HBs, ainsi que son rôle dans HBs. Avec cette procédure, les chercheurs peuvent précisément comprendre la complexité de la néovascularisation HB et identifier la fonction de cette forme courante de l’angiogenèse dans HBs. Ces protocoles peuvent être utilisés pour évaluer la thérapie anti-vasculaire plus prometteur pour les tumeurs, qui a fort potentiel translationnel pour traitement de tumeurs, ou pour aider dans l’optimisation du traitement anti-angiogénique de HBs à l’avenir les traductions. Les résultats soulignent la complexité de la néovascularisation HB et suggèrent que cette angiogenèse forme commune est uniquement un mécanisme complémentaire dans la néovascularisation HB.

Introduction

Hémangioblastomes (HBs) sont des tumeurs vasculaires bénignes que l'on trouve exclusivement dans le système nerveux central (CNS) humain. Ils se développent dans les patients avec la maladie de von Hippel-Lindau (VHL) ou lésions sporadiques. VHL-HBs sont difficiles à guérir grâce à un traitement chirurgical en raison de la récurrence fréquente et lésions multiples qui résultent de cette génétique trouble¹. L’inactivation de la gène suppresseur de tumeur VHL a été considéré comme la cause première de la tumorigenèse de VHL-HBs, l’origine cytologique (y compris la néovascularisation) et le processus évolutif d’HBs restent largement controversée

Protocol

Cette méthode a été réalisée conformément aux lignes directrices approuvées et réglementation de la recherche éthique Comité de l’hôpital Huashan, Université Fudan. Les mesures de sécurité standard correspondantes ont été suivis à chaque étape. Pour une présentation schématique, veuillez vous reporter à la Figure 1.

1. cellules de Culture et la construction plasmidique

1. Maintenir régulièrement les cellules endothéliales de veine ombilicale humaine (HUVEC) dans Dulbecco de l’aigle modifié (DMEM) additionné de 10 % sérum fœtal (SVF), 100 unités/mL de pénicilline et 100 µg/mL de streptomycine dans un humidifié 5 % CO<....

Results

Images originales sont prises par microscopie inversée. Les images typiques du groupe témoin et du groupe VHL sont indiquées à la Figure 2-A1 et Figure 2-A2. La durée de germination du groupe témoin est plus courte que celle du groupe VHL.

Après avoir téléchargé les Images, la plateforme en ligne fournit des résultats d’analyse directem.......

Discussion

Récemment, plusieurs champs de recherche en biologie vasculaire ont été stimulées par l’étude de l' endothélium d’angiogénique¹⁵. Dans cet article, nous avons développé un sphéroïde endothélial germination technique comme modèle expérimental pour étudier la formation de vaisseaux qui provient de la perte du gène VHL de fonction dans les cellules endothéliales manipulés pour identifier les molécules de nouveaux candidats de la cascade d’angiogénique. Au meilleur de notre connaissance, c’est le prem.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
cellule endothéliale de la veine ombilicale humaine	Fudan IBS Cell Center	FDCC-HXN180
dulbecco' s aigle modifié' s medium  ;	Gibco	11995040
sérum fœtal bovin	Gibco	;
PLKO.1-puro vecteur	Addgene	#8453
plasmide d’emballage psPAX2  ;	Addgene	#12260
enveloppe plasmide pMD2.G	Addgene	#12259
3D à fond rond 96 puits	plaques S-Bio	MS-9096M
matrigel	BD Biosciences	354234
Opti-MEM medium	Gibco	31985-070	sérum réduit medium  ;
Plaque à 15 puits	Ibidi	81501	Les bulles d’air dans le gel peuvent être réduites en équilibrant le &mu ; &ndash ; Glisser l’angiogenèse avant l’utilisation à l’intérieur de l’incubateur pendant la nuit
suppléments de croissance des cellules endothéliales	Sciencell	#1052
Boîte de culture de 10 cm	Corning	Scipu000813
Puromycin	Gibco	A1113802
typsin-EDTA	Gibco	25200056
Système de comptage cellulaire automatisé   ;	BioTech
;	Winmasis		http ://mywim.wimasis.com  ;