Hypofonction de la glande salivaire est une conséquence fréquente du traitement de la maladie et le rayonnement auto-immune. L’évaluation reproductible de fonction des glandes salivaires chez les modèles murins de ces maladies est un défi technique. Ici, on décrit une méthode simple pour la mesure précise et reproductible de la production de salive chez les souris.
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Article de méthode
Une méthode pour la mesure de la fonction des glandes salivaires chez les souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les patients atteints du syndrome de Sjögren, une maladie auto-immune affectant les glandes exocrines, développent une inflammation des glandes salivaires et ont réduit la production de salive. De même, la production de salive est gravement compromise chez les patients recevant des traitements de radiothérapie pour les cancers de la tête et du cou. Les modèles de rongeurs, mis au point pour imiter ces conditions cliniques, facilitent la compréhension de la pathogenèse de la maladie et permettant le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques. Par conséquent, la capacité pour mesurer la fonction des glandes salivaires chez les modèles animaux avec précision, de façon reproductible et à plusieurs reprises est essentielle. S’appuyant sur des procédures décrites précédemment dans la littérature, a développé une méthode qui remplit ces critères et a été utilisé pour évaluer la fonction des glandes salivaires chez les souris. Un autre avantage de cette nouvelle méthode est qu’elle est facilement maîtrisée et a peu de variation entre opérateurs. Fonction des glandes salivaires est évaluée comme la quantité (poids ou volume) ou le taux (mL/min) de la salive produite en réponse à la stimulation de la pilocarpine. La salive est une bonne source pour l’analyse de la teneur en protéines, les concentrations de l’immunoglobuline et autres biomolécules.
Introduction
Les glandes salivaires produisent la salive en réponse à divers stimuli neurologiques et mécanique1. Les stimuli sont transportés à travers le système nerveux sympathique et parasympathique sur les récepteurs adrénergiques et cholinergiques dans la glande. Pilocarpine est un agent cholinergique, para-sympathomimétique qui agit principalement sur les récepteurs muscariniques. Dans la glande salivaire, il induit la production de salive en agissant sur les récepteurs muscariniques de l’acétylcholine M31. La production de salive après l’administration de pilocarpine est un indicateur de la capacité des glandes salivaires à r....
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Protocole
Le protocole décrit ci-après a été approuvé par le Comité de l’emploi et d’institutionnels animalier et il suit les directives éthiques établies par le National Institutes of Health. Toutes les données présentées dans ce rapport ont été générées en utilisant des souris femelles qui étaient de 10-12 semaines d’âge. La suite de variétés de souris ont été utilisée : C57BL/6, BALB/c, DBA1, 129S et F1 (B6XA/J). Toutes les souris ont été logés dans des cages de barrière (5 animaux par cage) dans des conditions spécifiques exempts de micro-organismes pathogènes et fournis nourriture et eau ad libitum.
1. préparation
- Pour préparer une sol....
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Résultats
Dans les systèmes de modèle expérimental de souris, la capacité à produire de la salive en réponse à la stimulation de la pilocarpine est utilisée comme un indicateur de fonction des glandes salivaires. La production de salive a été mesurée chez des souris femelles C57BL/6 11 semaines par la méthode de l’écouvillon. Dans la Figure 1 a, les résultats sont exprimés comme la quantité de salive (mg) recueillie suite à des doses croissantes de la pilocarpine. À la.......
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Discussion
La production de salive est un processus complexe et dépend de nombreux facteurs. Par conséquent, la fonction des glandes salivaires chez les animaux de laboratoire de mesure peut être un défi. Un autre défi est que des mesures répétées de la fonction des glandes salivaires chez le même animal sont tenus d’établir l’apparition de la maladie ou de démontrer la récupération après un traitement.
L’écouvillonnage décrite dans le présent rapport est techniquement simple à réaliser avec de multiples.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêt à divulguer.
Remerciements
L’étude a été financée par une subvention du National Institutes of Health, National Institute of Dental and Craniofacial Research (DE025030).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Produits chimiques pour la collecte de la salive | |||
| Chlorhydrate de pilocarpine | Alfa Aesar, Tewksbury, MA, USA | B21410 | Diluer dans une solution saline isotonique stérile. Conservez les aliquotes à usage unique du stock 100X à -80oC |
| Name< | strong>Company | Catalog Number | <>Comments |
| Anesthesia Mix | Mix 1 mL de chlorhydrate de kétamine + 0,5 mL de xylazine + 8,5 mL de solution saline isotonique stérile dans un flacon stérile. Peut être utilisé pendant 3 mois. | ||
| Zetamine (chlorhydrate de kétamine) | Vet One, Boise, Idaho, USA | Le stock C3N VT1 | est de 100 mg/mL |
| Anased (Xylazine) | Med-Vet International, Mettawa, IL, USA | RXANASED-20 | Stock est de 20 mg/mL |
| Saline isotonique stérile | Vet One, Boise, Idaho, USA | 501032 | Utilisé comme diluant |
| Lacune artificielle (pommade ophtalmique lubrifiante) | Henry Schien, Dublin, OH, USA | 48272 | Utilisé pour empêcher les yeux de se dessécher pendant la procédure |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Matériaux pour la collecte de salive | |||
| SalivaBio Children’s écouvillon | Salimetrics, LLC Carlsbad, CA, USA | N/A | Écouvillons emballés individuellement Tubes en |
| polypropylène de 50 mL | VWR, Radnor, PA, USA | 89004-364 | Coupez la partie inférieure du tube de 1 cm. Assurez-vous que le bord de coupe est lisse. |
| Microtubes à centrifuger 0,6 mL | VWR, Radnor, PA, USA | 87003-290 | Faire des trous dans le fond du tube avec des aiguilles chauffées de calibre 18 Tubes |
| microcentrifuger 2 mL | VWR, Radnor, PA, USA | 87003-298 | |
| Seringues à insuline avec aiguilles fixées en permanence | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA | 324702 | |
| Aiguilles | à biseau régulier de calibre 18Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 305195 | |
| Lame de scalpel stérile #11 | Integra York Inc PA, USA | 4-311 | |
| Pince de microdissection | Roboz, Gaithersburg, MD, USA | RS-5139 | Pointe angulaire dentelée de 0,8 mm, longueur 4 |
| Ruban d’étiquette | Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA | sc-224487 | |
| Minuterie 3 canaux | Amazon.com, Seattle, WA, États-Unis | B06W2KCYVN | |
| Balance analytique | Mettler Toledo, Columbus OH, États-Unis | ||
| strong>Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Comments |
| >Chemicals/ réactifs pour induire un dysfonctionnement salivaire | |||
| LPS | Invivogen, San Deigo, CA, États-Unis | tlrl-b5lps | Dissoudre dans de l’eau exempte d’endotoxines et conserver la solution mère à 5 mg/mL . diluer dans un HBSS stérile 100 μg/ml - injecter 100 μl / moue ip |
| Imject Adjuvant d’alun | Thermo Scientific | 77161 | Diluer 1:1 dans une solution saline stérile. Injecter par voie intrapéritonéale 0,1 mL/souris |
| Antisérum anti-Ro52 pour lapin | Généré en laboratoire | Immunisation des lapins avec la souris recombinante Ro52 | |
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Comments |
| >Chemicals/ Kits pour analyses salivaires | |||
| Estimation du lysozyme salivaireEnzChek | |||
| Lysozyme | Assay Kit Molecular Targets, Eugene, OR, USA | E-22013 | Utilisé selon les instructions du fabricant |
| Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Estimation des IgA salivaires salivaires par ELISA | |||
| Mouse IgA | Southern Biotech, Birmingham, Alabama, États-Unis | 0106-01 | Normes pour les ELISA sandwich - plage de 30 ng/mL à 0,5 ng/mL IgA |
| anti-souris de chèvre non étiquetée | Southern Biotech, Birmingham, Alabama, États-Unis | 1040-01 | Enrobage à 1 ug/mL dans un tampon de bicarbonate |
| IgA anti-souris de chèvre HRP | Southern Biotech, Birmingham, Alabama, États-Unis | 1040-05 | Détection Anticorps utilisé à une dilution 1:4000 |
| Substrat TMB | Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, États-Unis | 555214 Utilisé | selon les instructions du fabricant |
| Immulon 4HBX Microtiter 96 plaques de puits | Thermo Scientific, Rochester, NY, États-Unis | 3855 | |
| Name | Company | Numéro de catalogue | Comments |
| Estimation des protéines salivaires | |||
| Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate | BioRad, Hercules, CA, USA | 5000006 | Pour l’estimation des protéines selon les instructions du fabricant |
Références
- Proctor, G. B. The physiology of salivary secretion. Periodontol 2000. 70 (1), 11-25 (2016).
- Fox, R. I. Sjögren's syndrome. Lancet. 366 (9482), 321-331 (2005).
- Eisbruch, A., Kim, H. M., Terrell, J. E., Marsh, L. H., Dawson, L. A., Ship, J. A.
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Réimpressions et autorisations
