Les auteurs décrivent un protocole pour chirurgicalement exposer et stabiliser les glandes salivaires sous-maxillaires murine intravitale imagerie microscopie intravitale verticale. Ce protocole est facilement adaptable à d’autres glandes exocrines de la tête et la région du cou de la souris et autres petits rongeurs.
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Article de méthode
Préparation du murin des glandes salivaires sous-maxillaires pour la microscopie intravitale verticale
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
La glande salivaires sous-maxillaire (SMG) est l’une des trois principales glandes salivaires et présente un intérêt pour nombreux domaines de la recherche biologique, immunologie, oncologie, médecine dentaire et la biologie cellulaire. Le SMG est une glande exocrine, constituée de cellules épithéliales sécrétrices, myofibroblastes, cellules endothéliales, nerfs et la matrice extracellulaire. Des processus dynamiques cellulaires chez le rat et la souris SMG ont précédemment été imagés, utilisant surtout inversé systèmes de microscopie multiphotonique. Nous décrivons ici un protocole simple pour la préparation chirurgicale et la stabilisation de la SMG murin souris anesthésiés pour l’imagerie in vivo avec des systèmes de microscope multiphotonique vertical. Nous présentons ensembles image intravitale représentative d’endogène et transféré Moutschen cellules fluorescentes, y compris l’étiquetage des vaisseaux sanguins ou des conduits salivaires et génération de seconde harmonique de visualiser de collagène fibrillaire. En somme, notre protocole permet une préparation chirurgicale des glandes salivaires de la souris dans les systèmes de microscopie verticale, qui sont couramment utilisés pour l’imagerie intravitale dans le domaine de l’immunologie.
Introduction
Salive est sécrétée par les glandes exocrines pour lubrifier les aliments, protéger les muqueuses des voies orale et pour fournir des enzymes digestives ainsi que des substances antimicrobiennes1,2. En plus des glandes salivaires intercalés dans la sous-muqueuse buccale, il y a trois ensembles bilatérales des glandes principales identifiées comme parotide, sublingual et sous-maxillaires, selon leur emplacement1,2. Cellules épithéliales en forme de pyramide, organisés dans des sacs en forme de fiole (acini) ou demilunes qui sont entourées de cellules my....
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Protocole
Tout travail animal a été approuvé par le Comité Cantonal pour l’expérimentation animale et réalisé selon les lignes directrices fédérales.
1. anesthésier la souris
- Porter des équipements de protection individuelle, y compris les gants et blouse de laboratoire.
- Mélanger la kétamine, xylazine et une solution saline à une concentration de travail de 20 mg/mL et 1 mg/mL, respectivement. Injecter le stock de travail par voie intrapéritonéale (i.p.) à 8-10 µL/g de souris. Replacez la souris dans la cage.
Remarque : Ce protocole a été testé pour les souris mâles et femelles âgés de 6 à 40 semaines avec un fond de C57BL/6.
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Résultats
Ce protocole permet l’imagerie de presque l’ensemble côté dorsal ou ventral de la SMG. Généralement, le champ de vision inclut également la glande salivaire sublinguale, qui diffère légèrement de la SMG en composition cellulaire4. Les deux glandes sont encapsulées par collagène fibrillaire et divisés en lobes. La plupart 14:00 systèmes peuvent produire une image exempte d’étiquette de collagène fibrillaire en mesurant le signal harmonique 2nd , mais géné.......
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Discussion
Ce protocole propose une approche simple pour l’imagerie in vivo des glandes salivaires sous-maxillaires et sublinguales murines microscopie non linéaire verticale souvent utilisés dans le domaine de l’immunologie. La méthode peut être adaptée pour l’imagerie des autres glandes exocrines dans la région de la tête et du cou. Par exemple, notre laboratoire a réaliser l’imagerie de la glande lacrymale de manière analogue (non illustrée).
Enlever le tissu conjonctif autour de la SMG est l.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d’intérêts ne déclarés.
Remerciements
Ce travail a été financé par la Fondation National Suisse (FNS) projet grant 31003A_135649, 31003A_153457 et 31003A_172994 (pour JVS) et Leopoldina bourse 2011 DFP-16 (BS). Ce travail a bénéficié des configurations optiques du « Microscopie Imaging Center » (MIC) de l’Université de Berne.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Narketan 10 % ; (Kétamine) 20ml (100 mg/ml) | Vetoquinol | 3605877535982 | |
| Rompun 2 % (Xylazine) 25 ml (20 mg/ml) | Bayer | 680538150144 | |
| Saline NaCl 0,9 % | B. Braun | 3535789 | |
| Prequillan 1 % (Acépromazine) 10 ml (10 mg/ml) | Rasoir électrique Fatro | 6805671900029 | |
| Wahl | 9818L | ou similaire | |
| Épilation crème | Veet | 4002448090656 | |
| Durapore Ruban chirurgical (2,5 cm x 9,1 m et 1,25 cm x 9,1 m) | Durapore (3M) | 1538-1 | |
| Durapore Ruban chirurgical (2,5 cm x 9,1 m et 1,25 cm x 9,1 m) | Durapore (3M) | 1538-0 | |
| Super colle Ultra gel, colle instantanée | Pattex, Henkel | 4015000415040 | |
| Lames de verre de protection pour microscope 20 mm et 22 mm | Menzel-Glä ; ser | 631-1343/ 631-1344 | |
| Graisse pour laboratoires 60 g glisseal N | Borer (fournisseur VWR) | DECO514215.00-CA15 | |
| Ciseaux chirurgicaux | Outils pour les sciences fines (F.S.T | )14090-09 | ou similaires |
| Pinces fines | pour les sciences fines (F.S.T ) | 11252-20 | ou similaires |
| Coton-tige | Migros | 617027988254 | ou similaire |
| Gaze Gazin 5 x 5 cm | Lohmann et Rauscher | 18500 | ou similaire |
| Stéréomicroscope | Leica | MZ16 | ou similaire |
| Texas Red dextran 70kDa | ; Sondes moléculaires | D1864 | |
| Cascade Blue dextran 10kDa | invitrogen | D1976 | |
| Système à deux photons | LaVision Biotec | TrimScope I et II | ou similaire |
| XLUMPLANFL 20x/0,95 W Objectif | Olympus | n/a | ou autre objectif à immersion dans l’eau ; |
| Thermomètre numérique | Fluke | 95969077651 |
Références
- Pakurar, A. S., Bigbee, J. W. Digestive System. Digital Histology. , John Wiley & Sons. Hoboken, NJ, USA. 101-121 (2005).
- Carpenter, G. Role of Saliva in the Oral Processing of Food. Food Oral Processing. , Wiley-Blackwell. Oxford, UK. 45-60 (2012).
- Masedunskas, A., Weigert, R.
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Réimpressions et autorisations
