Quantification de l’abondance de lipides et évaluation de la Distribution des lipides du Nil rouge et huile rouge O coloration de Caenorhabditis elegans

Résumé

Nil rouge coloration fixe Caenorhabditis elegans est une méthode pour la mesure quantitative des dépôts de lipides neutres, alors que l’huile rouge O coloration facilite l’évaluation qualitative de la répartition des lipides entre les tissus.

Résumé

Caenorhabditis elegans est un organisme modèle exceptionnel permettant d’étudier le métabolisme des lipides et l’homéostasie énergétique. Beaucoup de ses gènes de lipides sont conservés chez les humains et sont associées à un syndrome métabolique ou d’autres maladies. Examen de l’accumulation de lipides dans cet organisme peut être effectué par colorants fixateur ou méthodes exempte d’étiquette. Taches de fixateur comme Nil rouge et huile O rouge sont des moyens peu coûteux et fiables de mesurer quantitativement le taux de lipides et de qualitativement observer distribution des lipides dans les tissus, respectivement. De plus, ces taches permettent de criblage à haut débit des diverses voies et les gènes du métabolisme lipidique. En outre, leur caractère hydrophobe facilite la liposolubilité, réduit l’interaction avec les tissus environnants et empêche la dissociation dans le solvant. Bien que ces méthodes sont efficaces pour examiner le contenu en lipides générales, ils ne fournissent pas d’informations détaillées sur la composition chimique et la diversité des dépôts lipidiques. Pour ces fins, exempte d’étiquette des méthodes telles que la microscopie GC-MS et les voitures sont mieux adapté, leurs coûts par dérogation.

Introduction

Les lipides sont essentiels à la vie. Ils font partie intégrante des membranes, agissent comme des messagers secondaires et transducteurs de signal et ont des fonctions cruciales dans le stockage de l’énergie. Lorsque le métabolisme des lipides est dysrégulation, elle conduit à des maladies comme l’obésité et le diabète de type II, qui sont en appuyant sur les préoccupations de santé publique⁹. Caenorhabditis elegans (C. elegans) est un organisme excellent modèle pour l’étude du métabolisme lipidique, parce qu’il a un cycle de vie relativement court, un corps transparent, une lignée de cellules connues et un génome entièrement....

Protocole

1. Nil rouge (NR) coloration des lipides

1. Préparation de la solution mère de 5 mg/mL, NR
   1. Dans une bouteille de 500 mL, ajouter 100 mg de poudre de NR à 200 mL d’acétone 100 %.
   2. Couvrir la bouteille avec du papier aluminium pour éviter toute exposition à la lumière.
   3. Avant utilisation, agiter la solution pendant 2 h dans l’obscurité.
   4. Pour utilisation à long terme, conserver la solution mère NR dans un flacon hermétique sans toute exposition à la lumière. Solution mère NR selon les besoins de recherche à l’échelle. Veiller à ce que la même solution est utilisée à travers des expériences de coloration NR pour obtenir la col....

Résultats

SKN-1 est un bZip, facteur de transcription cytoprotecteurs qui partage une homologie avec NRF2 mammifères et a été montré à la médiation d’oxydation des acides gras. Selon la concentration de glucose dans leur alimentation, worms avec un allèle constitutivement activées skn-1 montrent des niveaux de lipides différents lorsqu’elle est colorée avec Nil rouge⁷. Figure 1 a -C indique activé skn-1 animaux.......

Discussion

L’augmentation de l’obésité et les taux de maladies métaboliques rend c. elegans , un modèle approprié pour étudier les mécanismes qui régulent l’accumulation de graisses dans les cellules et les tissus. Des preuves récentes suggèrent que les changements dans les taux de lipides sont corrélés avec des processus cellulaires, allant de l’insuline signalisation⁸, l’activation des récepteurs hormone², à la capacité reproductrice⁵. Par rapport à .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Imager.M2m Microscope	Zeiss	n/a	Microscope à fluorescence
Caméra ERC5s	Axiocam	n/a	compatible avec les couleurs
	Axiocam	n/a	Capable de fluorescence
Rouge du Nil	Thermo Fisher	N1142	Coloration
lipidique Rouge huile O	Alfa Aesar	A12989	Coloration lipidique
DAPI	Thermo Fisher	D1306	Coloration à l’ADN
Alcool isopropylique	BDH	BDH1133-1LP	Solution fixatrice
0.2 µ ; Filtre à seringue séteriel	m VWR	28145-477	Filtre en acétate de cellulose
Centrifugeuse 5430	Eppendorf	5428000015
Centrifugeuse Agitateur Rôtissoire	de laboratoire Quake	400110Q	Agitateur
Tube Rotateur	VWR	10136-084	Rotateur
K2HPO4	Sigma-Aldrich	7758-11-4	NGM
KH2PO4	Sigma-Aldrich	7778-77-0	NGM
MgSO4	Alfa Aesar	7786-30-3	NGM
CaCl2	Sigma-Aldrich	10035-04-8	NGM
NaCl	Sigma-Aldrich	7647-14-5
NGM Cholestérol	Sigma-Aldrich	57-88-5
NGM Peptone	BD Biosciences	211677	NGM
Agar Teknova		L9110	NGM
LB media	Sigma-Aldrich	L3147	Croissance bactérienne

Caméra MRm