A11-positif β-amyloïde oligomère préparation et évaluation à l’aide de Dot Blot Analysis

Huang Chunhui; Xu Dilin; Zhang Ke; Shentu Jieyi; Yan Sicheng; Wu Dapeng; Wang Qinwen; Cui Wei

doi:10.3791/57592

Article de méthode

A11-positif β-amyloïde oligomère préparation et évaluation à l’aide de Dot Blot Analysis

11.3K vues

⸱

DOI :

10.3791/57592

⸱

22 mai 2018

Huang Chunhui¹^,² , Xu Dilin¹ , Zhang Ke¹ , Shentu Jieyi² , Yan Sicheng¹ , Wu Dapeng³ , Wang Qinwen¹ , Cui Wei¹^,²

¹Ningbo Key Laboratory of Behavioral Neuroscience, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Pathophysiology, School of Medicine, Ningbo University, ²Li Dak Sum Yip Yio Chin Kenneth Li Marine Biopharmaceutical Research Center, Ningbo University, ³School of Materials Science and Chemical Engineering, Ningbo University

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit comment préparer des oligomères bêta-amyloïdes d’un peptide synthétique in vitro et d’évaluer les quantités relatives des oligomères bêta-amyloïdes par une dot blot analyse.

Résumé

Β-amyloïde (Aß) est un peptide hydrophobe avec une tendance intrinsèque de s’auto-assembler en agrégats. Parmi les divers agrégats, oligomères bêta-amyloïdes est largement reconnue comme la neurotoxine de premier plan dans la progression de la maladie d’Alzheimer (ma) et est considéré comme l’événement crucial dans la pathogenèse de la ma. Par conséquent, Aβ oligomère inhibiteurs pourraient empêcher la neurodégénérescence et ont le potentiel d’être développé comme modificateurs traitements d’AD. Cependant, protocoles différents formation d’oligomères bêta-amyloïdes pourraient conduire à des oligomères présentant des caractéristiques différentes. En outre, il n’y a pas beaucoup de méthodes pour efficacement écran Aβ_1-42 oligomère inhibiteurs. Un anticorps A11 peut réagir avec un sous-ensemble de l’oligomère de_1-42 Aß toxique avec des structures de feuillet β antiparallèle. Dans ce protocole, nous décrivons comment préparer un échantillon de riche en oligomères Aβ A11-positif_1-42 d’un synthétique Aβ_1-42 peptide de vitro et d’évaluer les quantités relatives de l’oligomère_1-42 Aβ A11-positives dans les échantillons en une dot-blot analyse à l’aide de l’A11 et Aβ_1-42-anticorps 6E10 spécifiques. Utilisant ce protocole, inhibiteurs de l’oligomère_1-42 Aβ A11-positif peuvent également projetés de résultats expérimentaux semi-quantitative.

Introduction

La maladie d’Alzheimer (ma) est l’une des plus importantes maladies neurodégénératives touchant les personnes âgées dans le monde¹. Il est largement admis que l’agrégation anormale de la protéine β-amyloïde (Aß) peut être le principal facteur pathologique d’AD. Agrégats de bêta-amyloïdes sont les principaux composants des plaques séniles, un des marqueurs biologiques dans le cerveau des patients atteints de ma. En outre, agrégats de bêta-amyloïdes, notamment les oligomères provoquent une neurotoxicité puissante, qui pourrait être la cause de la mort neuronale au fur et AD. Par conséquent, l’inhibition de la formation d’oligomères bêta-amyloïdes....