Méthode de Culture organotypique pour étudier le développement des tissus embryonnaires de poulet

Résumé

Nous présentons ici un organotypique cultivant protocole pour cultiver des organes embryonnaires de poulet in vitro. En utilisant cette méthode, le développement des tissus embryonnaires de poulet peut être étudié, tout en conservant un haut degré de contrôle sur le milieu de culture.

Résumé

Le poulet embryonnaire est couramment utilisé comme un organisme modèle fiable pour le développement des vertébrés. Son accessibilité et son incubation courte période le rend idéal pour l’expérimentation. Actuellement, l’étude de ces voies de développement de l’embryon de poulet est réalisée en appliquant des inhibiteurs et des médicaments à des sites localisés et à de faibles concentrations en utilisant une variété de méthodes. Culture de tissus in vitro est une technique qui permet l’étude des tissus séparés de l’organisme hôte, tout en contournant en même temps beaucoup de limitations physiques présentes lorsque vous travaillez avec des embryons entiers, tels que la susceptibilité des embryons doses élevées de produits chimiques potentiellement mortels. Nous présentons ici un organotypique cultivant protocole pour cultiver le poulet embryonnaire demi tête in vitro, qui présente de nouvelles opportunités pour l’examen des processus de développement au-delà des méthodes actuellement établies.

Introduction

L’embryonnaire poulet (Gallus gallus) est un organisme d’excellent modèle couramment utilisé dans le domaine de la biologie. Sa période d’incubation est d’environ 21 jours et beaucoup d’oeufs peut être incubés simultanément, rendant les expérimentation rapide et efficace. Peut-être plus important encore, l’embryon est également facilement manipulé, permettant l’étude approfondie des principaux processus de développement et des gènes et des protéines qui animent ces processus.

L’oeil de l’embryon de poulet est un organe complexe qui se développe par l’interaction d’un certain nombre de différents tissus semblables à beaucou....

Protocole

Remarque : Pour les stades de l’embryon, utiliser le Hamburger et Hamilton¹² (HH) mise en scène de table.

1. embryon Incubation

1. Incuber les œufs de poule fécondés dans un incubateur stérile, contrôle de la température à 37 ° C ± 1 ° C et environ 40 % d’humidité.
2. Tournez les oeufs 1 x par jour et laisser incuber à HH34 (fécondation après 8 jours).

2. préparation et stérilisation du matériel

1. Pour 12 embryons, autoclave 2 L d’eau distillée, 1 L de solution saline à poussin 0,85 %, 12 pipettes en verre, 1 boîte de mouchoir en papier, 24 2,5 cm x 2,5 cm carré....

Résultats

En utilisant cette méthode, un oeil embryonnaire de poulet peut être cultivé de jour 8 de son développement (HH34) in vitro pendant 4 jours. Quatre jours de in ovo développement correspond à HH38.

Cette méthode de culture soutient le développement des bourgeons de plumes autour de le œil et des paupières (Figure 1 b). Ces bourgeons de plumes ne sont pas présents dans ovo à.......

Discussion

Ce protocole utilise des tissus établie des techniques de culture pour atteindre la croissance d’un oeil de poulet embryonnaire jour 8 (HH34) in vitro pendant 4 jours. Cette méthode de mise en réseau-culture a été initialement décrite par Trowell¹⁵. Nous avons optimisé un protocole de Pinto et Hall 1991 étude¹⁶ utilisant une membrane semi poreuse avec le réseau pour étudier les signaux inductifs entre les couches de tissus séparés des yeux embryonnaires de poulet

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Boîtes de Pétri pour culture cellulaire de 35 mm	Corning	353001	facile à saisir, polystyrène, non pyrogène
Boîtes de Pétri pour culture cellulaire de 100 mm	de culture tissulaire Corning	353003, polystyrène, papier mouchoir en
papier	apyrogène Kimtech	34155	Essuie-glaces de la marque Kimtech Science, 280 par carton
treillis métallique	n/a	/a	treillis métallique en acier inoxydable (taille de la grille 0,7 mm)
pipettes en verre jetables	VWR	14673-010	Verre borosilicaté jetable 5 3/4"
milieu nutritif	Gibco	12591-038	Fitton-Jackson Modification, [+] L-glutamine avec rouge de phénol (BGJB)
pénicilline-streptomycine	Sigma-Aldrich	P4458	10000 unités/mL pénicilline streptomycine solution filtre stabilisé
papier	Whatman	1454 090	papier filtre semi-poreux 90mm
œufs de poule fécondés	Dalhousie University Agricultural College	n/a	peut être obtenu auprès de fermes locales
chlorure de sodium (NaCl)	EMD	SX0420-3	cristaux de chlorure de sodium, qualité réactif
1 L bouteille en verre	VWR	89000-240	1 L bouteille en verre autoclavable en pyrex
éthanol	Fisher Scientific	BP82011	70 % de biologie moléculaire Récipients
tupperware	n/a	n/a n/a	achetés en magasin et stérilisés avec EtOH
lames de rasoir jetables	VWR	55411-050	lames de rasoir industriel à simple tranchant (acier au carbone chirurgical)
cuillères en plastique	n/a	n/a	achetées en magasin et stérilisées avec masque anti-poussière EtOH
	3M	n/a	3M 8500 Comfort Mask
paraformaldéhyde	Sigma-Aldrich	P6148	paraformaldéhyde, qualité réactif, formalin cristallin
tamponné neutre	Fisher Scientific	72210	10 %
tamponné salin (PBS)	n/a	n/a n/a	Saline tamponnée au phosphate 10X pH 7,4 (137mM NaCl, 2,5mM KCl, 4,3mM Na2HPO4, 1,4mM KH2PO4)
15 ml tubes faucon	VWR	21008-216	tubes à centrifuger préstérilisés
pince	FST	n/a	pince fine
sérum salin pour poussins  ;	n/a	n/a  ;	0,85 % de NaCl
papier d’aluminium	n/a	n/a
essuie-tout	n/a	/a	en magasin

Boîte de culture tissulaire Boîte n neutre phosphate de formalin du commerce n acheté