Un dosage Neurosphère pour évaluer l’Activation endogène cellules souches neurales dans un modèle murin de minime de la moelle épinière

Nishanth Lakshman; Wenjun Xu; Cindi M. Morshead

doi:10.3791/57727

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Article de méthode

Un dosage Neurosphère pour évaluer l’Activation endogène cellules souches neurales dans un modèle murin de minime de la moelle épinière

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DOI :

10.3791/57727

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13 septembre 2018

Nishanth Lakshman¹^,² , Wenjun Xu² , Cindi M. Morshead¹^,²^,³

¹Institute of Medical Science, University of Toronto, ²Department of Surgery, University of Toronto, ³Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto

Dans cet article

Résumé

Ici, nous démontrons la performance d’un modèle de blessures médullaires minime dans une souris adulte qui épargne la niche de canal central logement cellules souches neuronales endogènes (CNS). Nous montrons comment le dosage Neurosphère peut être utilisé pour quantifier l’activation et la migration des CNS primitifs et définitifs après une blessure.

Résumé

Des cellules souches neurales (CNS) dans la moelle épinière chez les mammifères adulte sont une population relativement mitotiquement quiescente de leucomalacie cellules qui peuvent être étudiés in vitro à l’aide du test Neurosphère. Ce dosage formatrices est un outil puissant pour étudier la réaction des CNS à des facteurs exogènes dans un plat ; Toutefois, cela permet également d’étudier l’effet des manipulations de in vivo avec la bonne compréhension des points forts et les limites du dosage. Une manipulation de l’intérêt clinique est l’effet d’une lésion sur activation endogène de NSC. Les modèles actuels de la moelle épinière constituent un défi d’étudier ce que la gravité des modèles courants de contusion, compression et transection provoquent la destruction de la niche du NSC sur le site de la lésion, où résident les cellules souches. Nous décrivons ici un modèle de blessure minime qui provoque des dommages localisés à la surface superficielle dorso-latérale du niveau thoracique inférieur (T7/8) de la moelle épinière de souris adulte. Ce modèle de blessure du canal central au niveau de la blessure de pièces de rechange et permet l’analyse des CNS qui résident au niveau de la lésion à divers moments après une blessure. Ici, nous montrons comment le dosage Neurosphère peut être utilisé pour étudier l’activation de ces deux populations distinctes, linéaire-connexes, des CNS qui résident dans la région de la moelle épinière périventriculaire - CNS primitifs et définitifs (pNSCs et dNSCs, respectivement). Nous démontrons comment isoler et de la culture de ces CNS de la région périventriculaire au niveau de la lésion et le site de lésion de la substance blanche. Nos dissections médullaire postopératoire montrent un nombre accru de pNSC et neurospheres dNSC provenant de la région périventriculaire de cordons lésés par rapport aux témoins, s’adressant à leur mise en route par l’intermédiaire de blessures. En outre, après blessure, neurospheres dNSC dérivés peuvent être isolés depuis le site de la lésion, démontrant la capacité du CNS pour migrer de leur niche périventriculaire aux sites de blessure.

Introduction

Le système nerveux central contient une sous-population de cellules souches autorenouvellement, multipotentes qui ont la capacité de donner lieu à toutes les cellules neurales adultes différents types¹^,²^,³^,⁴. Ces cellules souches neurales (CNS) résident dans des créneaux spécialisés dans le cerveau et la moelle épinière et peut être activées après une blessure pour proliférer, migrer et se différencier en cellules neuronales matures. CNS et leur progéniture ont démontré à migrer vers le site de la lésion dans les lésions corticales modèles