Culture de tissus ovariens pour visualiser les phénomènes dans les ovaires de souris

Résumé

Les cultures de tissus ovariens peuvent être utilisés comme modèles de l’atrésie folliculaire développement, ovulation et follicule et indiquer les mécanismes de régulation de processus ovariens dynamiques.

Résumé

Chez les mammifères femelles ovulent périodiquement un nombre d’ovocytes presque constant au cours de chaque cycle oestrus. Pour soutenir cette régularité et la périodicité, la régulation se fait au niveau de l’axe hypothalamo-hypophyso-gonadique et sur le développement de follicules dans l’ovaire. Malgré des études actives, les mécanismes de développement folliculaire ne sont pas claires, en raison des plusieurs étapes de l’activation de dormance follicule primordial à l’ovulation et la complexité de la réglementation qui diffère à chaque phase folliculaire. Afin d’étudier les mécanismes de développement folliculaire et la dynamique des follicules au cours du cycle oestral, nous avons développé un modèle de culture de tissus ovariens de souris qui peut être utilisé pour observer le développement folliculaire à l’aide d’un microscope. Développement systématique de follicule, l’ovulation périodique et l’atrésie folliculaire peuvent être reproduits dans le modèle de l’ovaire cultivées, et les conditions de culture peuvent être modulées de façon expérimentale. Ici, nous démontrons l’utilité de cette méthode dans l’étude des mécanismes de régulation du développement folliculaire et d’autres phénomènes ovariennes.

Introduction

Ovaires de souris femelles contiennent plusieurs milliers de follicules¹, et l’ovulation périodique mûrit environ dix ovocytes à chaque cycle oestrus. Follicules sont classées en plusieurs stades de développement : primordial, primaire, secondaire, antre et follicules de Graaf, selon la forme de la couche cellulaire de la granulosa entourant chaque ovocyte. La plupart des follicules primordiaux sont en dormance, et certains d'entre eux sont activent et se développer dans les follicules primaires à chaque cycle oestrus². Après la phase folliculaire secondaire, le développement folliculaire est principalement régie par gon....

Protocole

Souris ont été logés dans une environnement contrôlée chambre à 23 ± 1 ° C, avec un cycle foncé h de lumière/12 12 h. Expériences et protocoles de soins des animaux ont été effectuées conformément aux directives pour l’expérimentation animale à l’Université médicale de Aichi et ont été approuvés par le Comité de l’emploi et les animalerie titulaires.

1. préparation du milieu de Culture et de la vaisselle

1. Pour préparer le milieu de culture de base, ajoutez le sérum fœtal (SVF, 5 % v/v), FSH (100 mUI/mL), LH (10 mU/mL) et la pénicilline-streptomycine (pénicilline, 100 U/mL, streptomycine, 100 mg/mL) au minimum indispensable moyen al....

Résultats

La figure 1 montre le protocole pour les changements dans les médias au cours de la culture de tissus ovarienne. Suite à ce programme, les ovaires de souris ICR 4 semaines ont été cultivés et imagé à intervalles de 24 h à l’aide de la microscopie confocale (Figure 2). Au cours de la culture de tissus de l’ovaire pendant 3 semaines, plus de follicules antrums et secondaires ont dégénéré de l’atrésie folliculaire et certains étaien.......

Discussion

Dans cette étude, nous avons développé deux nouvelles méthodes pour l’étude de développement folliculaire dans les ovaires de souris. La première méthode consiste en l’élevage des tissus en tranches ovarienne chez la souris adulte suivie d’analyses du développement folliculaire, et la seconde implique l’utilisation de Time-lapse d’imagerie afin de visualiser le développement folliculaire précoce pendant la phase de gonadotrophine indépendant. Auparavant, nous avons utilisé la méthode de culture de tissus ovaire présente .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Hormone folliculostimulante de l’hypophyse humaine	SIGMA	F4021
Hormone luténisante de l’hypophyse équine	SIGMA	L9773
Solution de pénicilline-streptomycine	Wako Pure Chemical Industries	168-23191
MEM a, GlutaMax, sans nucléotides	Thermo Fisher	32561037
Plat à fond de verre	MatTek	P35G-0-10-C	Plat de 35 mm, lamelle n° 0, diamètre du verre de 10 mm
Insert de culture cellulaire Millicell	Merck Millipore	PICM0RG50	Diamètre : 315 mm, taille des pores : 0,4 mm, matériau : PTTE hydrophile
3,5 cm Plats de culture cellulaire	Greiner Bio-One	627160
50ml / Tube à centrifuger avec capuchon d’étanchéité triple	IWAKI	2345-050
Lames jetables à profil bas 819	Leica	14035838925
LSM 710	Carl Zeiss		Microscope confocal
CellVoyager, CV1000	Yokogawa Electric Corporation		Imagerie en accéléré
BZ-X700	KEYENCE		Imagerie en accéléré