Nous présentons ici un protocole visant à développer un modèle cancer in vivo à l’aide de la technologie des cellules feuille. Un tel modèle pourrait être très utile pour l’évaluation des traitements anticancéreux.
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Article de méthode
Explorer le potentiel des cellules souches mésenchymateuses feuille sur le développement du carcinome hépatocellulaire In Vivo
Dans cet article
Résumé
Résumé
Un modèle in vivo animal qui imite le cancer chez l’homme pourrait avoir plusieurs applications qui fournissent des informations cliniques significatifs. Les techniques actuellement utilisées pour le développement de modèles in vivo de cancer ont des limites considérables. Par conséquent, dans cette étude, nous visons à mettre en œuvre de la technologie des piles à feuille pour développer un modèle de cancer in vivo . Carcinome hépatocellulaire (CHC) est développé avec succès chez le rat nude en utilisant des feuilles de cellule créées à partir des cellules de la lignée cellulaire HCC. Les feuilles de cellules de cancer sont générés par adhérence intracellulaire et la formation d’une structure stratifiée, contrôlée par la matrice extracellulaire. Cela permet la transplantation de feuille HCC dans le foie et la création d’un modèle animal de tumeur-roulement, moins d’un mois. En outre, on étudie le rôle des cellules souches mésenchymateuses (CSM) dans le développement de ce modèle de cancer. En plus de la plaque de ligne de cellules HCC, un autre des feuilles de deux cellules sont créées : une feuille de cellules HCC et moelle osseuse MSCs (BMMSCs) et une feuille de cellules HCC et cordon ombilical MSCs (UCMSCs). Les feuilles qui ont une combinaison des cellules de la HCC et MSCs sont aussi capables de produire un animal avec tumeur. Toutefois, l’ajout de MSCs réduit la taille de la tumeur formée, et cet effet néfaste sur le développement de tumeurs varie selon source des MSCs utilisé. Cela indique qu’il pourrait utiliser une feuille de cellules de certains sous-types MSC dans le contrôle et la gestion de la tumeur.
Introduction
HCC est un cancer primitif du foie qui est significativement associé à un mauvais pronostic. Chaque année, presque un demi-million de nouveaux patients sont diagnostiqués avec HCC, qui représentent 85 % des patients de cancer du foie dans le monde1. Hepatocarcinogenesis n’est pas une maladie unique-forme ; C’est plutôt un ensemble de maladies qui ont différentes caractéristiques histopathologiques et variabilité génétique et génomique, outre varié résultats pronostiques1. Par conséquent, les principaux défis à l’élaboration d’une stratégie thérapeutique efficace pour HCC sont la connaissance limitée de la biologie de la ....
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Protocole
Le protocole suit les directives de protection des animaux du Comité d’éthique de l’Université du Roi Saoud. Interventions chirurgicales et anesthésiques autres médicaments utilisés pour les animaux sont approuvés par le Comité d’éthique de l’Université du Roi Saoud. Tous les travaux expérimentaux sont effectuée par un personnel convenablement formé.
1. cellule feuille Construction
- Enduire le Pétri (3,5 cm température Pétri) de sérum non dilué fœtal (SVF) et faire en sorte de couvrir toute la surface du plat.
Remarque : Cette étape est importante pour le détachement de la feuille de la cellule car elle favorise la croissance de....
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Résultats
Tumorigénicité des feuilles de transplantation cellulaire chez les Rats :
Un mois après la transplantation, toutes les feuilles de cellules transplantées dans le foie des rats ont développé des tumeurs (Figure 3). La taille moyenne des tumeurs développées de HepG2, HepG2/BMMSC et les feuilles de cellulaire HepG2/UCMSC étaient de 4,5 cm, 4 cm et 2,5 cm, respectivement
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Discussion
Une quantité considérable de recherche se consacre au développement adéquat en vivo précliniques modèle animal qui ressemble à des cancers humains. Actuellement, les principales approches utilisées pour créer des modèles animaux de cancer impliquent de transplantation de génie génétique et la cellule11. Modèles animaux génétiquement modifiés sont de bons outils pour l’identification et la validation des gènes cibles, ainsi que la compréhension des mécanismes moléculaires qui sous-tendent .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier le personnel de la chirurgie expérimentale et les animaux de laboratoire à la faculté de médecine, Université du Roi Saoud, pour leur coopération et soutien-surtout Hussain Almukhayzim et Hisham Aloudah. Les auteurs aimerait également remercier l’équipe de médias à la King Saud bin Abdul-Aziz University pour préparer le visuel matériel, surtout Muath bin Ghannam et Abdulwahab Alsulami.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| fortsnbsp ; | |||
| FBS ; | Gibco/Invitrogen | 10270106 | |
| DMEM à haute teneur en glucose | Sigma | D5671-500ML | |
| Pénicilline/streptomycine ; | Technologie de la vie | 15070063 | |
| Saline physiologique stérile | Sigma ; | S0817-1GA | |
| Lignée cellulaire HepG2 humaine | ATCC, USA | HB-8065 | |
| Moelle osseuse humaine Lignée cellulaire MSCs | PromoCell, USA | C-12974 | |
| tissu de cordon ombilical humain MSCs | PromoCell, USA ; | C-12971 | |
| Kétamine 50 % | Rompun, Bayer | ||
| Xylazine 2 % | Rompun | 23076-35-9 | |
| Alphadine® ; ; solution. | Riyadh Pharma | LBL0816 | |
| Jetables : ; | |||
| 15mL Polypropylène Haute Clarté | Tube à Centrifuger Falcon ; | ||
| boîtes de culture UpCell stériles de 3,5 cm avec le papier filtre (membrane) | Sigma | 174904-1CS | |
| 100-1000 & micro ; l ; Pointes de pipette ; | Sigma | CLS4868-1000EA ; ; | |
| Procédure de base Drape | Thermofisher | PMD5293.0 | |
| Equipment ; Pipette | |||
| Plus, volume variable | Eppendorf® ; ; Recherche® ; | Z683779-1EA | |
| Incubateur de culture tissulaire 37 ° ; C, 5 % CO2 | Toute marque | ||
| Armoire de sécurité biologique | Toute marque | ||
| Incubateur de culture tissulaire 20 ° ; C, 5 % CO2 | Toute marque | ||
| Outils chirurgicaux stériles et rats nus : ; | |||
| Pince | |||
| Scalpel à ciseaux | |||
| ; | |||
| ; Suture en nylon ; 5-0 | Accutome | AB-3854S | Monofilament, Lancet |
| 1 ml Seringues à tuberculine | Fisher Scientific | 14-826-88 | |
| Rats nus ; | Rivière |
Références
- Marra, M., et al. Molecular targets and oxidative stress biomarkers in hepatocellular carcinoma: an overview. Journal of Translational Medicine. 9, 171(2011).
- Yamada, K. M., Cukierman, E. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell.
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Réimpressions et autorisations
