Caractérisation des Thymus-dépendants et indépendants de Thymus immunoglobuline Isotype réponses chez la souris à l’aide d’Enzyme-linked Immunosorbent Assay

Almin I. Lalani; Sining Zhu; Ping Xie

doi:10.3791/57843

Article de méthode

Caractérisation des Thymus-dépendants et indépendants de Thymus immunoglobuline Isotype réponses chez la souris à l’aide d’Enzyme-linked Immunosorbent Assay

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DOI :

10.3791/57843

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7 septembre 2018

Almin I. Lalani¹ , Sining Zhu¹ , Ping Xie²^,³

¹Department of Cell Biology and Neuroscience and Graduate Program in Cellular and Molecular Pharmacology, Rutgers University, ²Department of Cell Biology and Neuroscience, Rutgers University, ³Rutgers Cancer Institute of New Jersey

Dans cet article

Résumé

Dans cet article, nous décrivons un protocole afin de caractériser les T-dépendants et indépendants de T les réponses isotype immunoglobuline (Ig) chez la souris à l’aide d’ELISA. Cette méthode utilisée seule ou en combinaison avec écoulement cytometry permettra aux chercheurs d’identifier les différences dans les réponses d’isotype Ig médiée par les lymphocytes B chez les souris après vaccination antigène T-dépendants et indépendants de T.

Résumé

Anticorps, appelés également comme différencient d’immunoglobulines (Ig), sécrétées par les lymphocytes B, plasmablasts/plasmocytes, immunité humorale fournissent une formidable défense contre l’invasion des agents pathogènes par l’intermédiaire de divers mécanismes. Un objectif majeur de la vaccination est d’induire des anticorps spécifiques de l’antigène protecteurs pour prévenir les infections mortelles. Les antigènes de thymus-indépendants (TI) et dépendant du thymus (TD) peuvent obtenir des réponses de IgM spécifiques de l’antigène robustes et peuvent également induire la production d’isotype commutation anticorps (IgG, IgA et IgE) ainsi que la production de cellules B mémoire à l’aide fourni par antigène présentant des cellules (CPA). Nous décrivons ici un protocole afin de caractériser les réponses d’isotype TD et TI Ig chez la souris à l’aide de dosage immuno-enzymatique (ELISA). Dans le présent protocole, les réponses de TD et TI Ig sont provoquées chez les souris par voie intrapéritonéale (i.p.) immunisation avec des antigènes conjugués haptène modèle PNT-KLH (dans l’alun) et PNT-polysaccharide (PBS), respectivement. Pour induire la réponse mémoire TD, une vaccination de rappel du TNP-KLH dans l’alun est donnée 3 semaines après la première vaccination avec le même antigène/adjuvant. Sérums de souris sont récoltées à des moments différents avant et après la vaccination. Total sérique Ig et anticorps spécifiques PNT sont ensuite quantifiées à l’aide "sandwich" de Ig isotype-spécifiques et test ELISA indirect, respectivement. Afin de correctement quantifier la concentration sérique de chaque isotype Ig, les échantillons doivent être convenablement diluée pour s’adapter au sein de la gamme de linéarité des courbes standards. Utilisant ce protocole, nous avons toujours obtenu des résultats fiables avec sensibilité et une spécificité élevée. Lorsqu’il est utilisé en combinaison avec d’autres méthodes complémentaires tels que la cytométrie en flux, in vitro culture spléniques des cellules B et immunohistochemical souillant (IHC), ce protocole permettra aux chercheurs d’acquérir une compréhension globale des anticorps réponses dans un cadre expérimental donné.

Introduction

Les lymphocytes B sont le principal acteur dans l’immunité humorale et le seul type de cellules chez les mammifères qui sont capables de produire des anticorps, appelés également immunoglobulines (Ig)¹^,². Les anticorps sécrétés par les lymphocytes B fournissent une formidable défense contre l’invasion des agents pathogènes par l’intermédiaire de divers mécanismes, y compris la neutralisation, opsonisation et activation du complément, conduisant à l’immunité protectrice³. Sécrétion d’anticorps par les lymphocytes B n’est possible qu’après la pleine activation des cellules B spécifiques, ....