La synthèse de peptide axée sur les polyamines amphiphiles (AAE) est un défi significatif en raison de la présence de plusieurs atomes d’azote aminé, qui nécessite une utilisation judicieuse de la protection des groupes afin de masquer ces fonctionnalités réactives. Dans cet article, nous décrivons une méthode facile pour la préparation de ces nouvelle classe de molécules d’auto-assemblage.
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Article de méthode
Protocole facile pour la synthèse d’auto-assemblage axée sur les polyamines peptides Amphiphiles (AAE) et des biomatériaux
Dans cet article
Résumé
Résumé
Axée sur les polyamines peptides Amphiphiles (AAE) sont une nouvelle classe d’auto-assemblage amphiphiles biomatériaux liées aux peptides amphiphiles (Fe). PAs traditionnels possèdent des acides aminés chargés comme des groupes (lysine, arginine), qui sont directement reliés à un segment de lipides ou peuvent contenir une région d’éditeur de liens faite des acides aminés neutres de solubilisation. Réglage de la séquence peptidique de PAs peut produire diverses morphologies. De même, l’AAE possède un segment hydrophobe et acides aminés neutres, mais contiennent aussi des molécules de polyamines comme l’eau (hydrophiles) groupes de solubilisation. Comme c’est le cas avec un FE, AAE peut également s’auto-assembler en diverses morphologies, y compris les petites tiges, nano-rubans torsadés et fondus nano-feuilles, dissous dans l’eau. Toutefois, la présence d’amines primaires et secondaires sur une molécule unique polyamine pose un défi de taille quand synthèse AAE. Dans cet article, nous montrons un protocole simple, basé sur des précédents de littérature, d’atteindre une synthèse facile des AAE à l’aide de la synthèse des peptides en phase solide (SPPS). Ce protocole peut être étendu à la synthèse de PAs et autres systèmes similaires. Nous illustrons également les mesures qui sont nécessaires pour le clivage de la résine, l’identification et la purification.
Introduction
Auto-assemblage peptides amphiphiles (PAs) sont une classe des biomatériaux se compose habituellement des segments suivants : tête a hydrophile, région de l’éditeur de liens (b) et queue c hydrophobe. La plupart PAs décrits dans la littérature possèdent une tête hydrophile constitué de résidus d’acides aminés polaires ou chargées1,2,3,4. PAs ont trouvé un large éventail d’applications en biomédecine, y compris la délivrance de médicaments, diagnostic de la maladie, médecine régénérative, etc.5. Selon leur ord....
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Protocole
1. Généralités protocole pour la synthèse des AAE
- Calculer l’échelle de synthèse (habituellement mmol). Cette échelle est basée sur la masse de la quantité de PPA de cible. N’oubliez pas que l’efficacité de la réaction de RCR diminue graduellement avec une augmentation de la séquence d’acides aminés. Par conséquent, l’efficacité de la réaction exacte est difficile à calculer.
- Calculer le poids de la résine à utiliser en fonction du chargement de la résine. Le chargement est trouvé sur le conteneur ou le protocole d’analyse de la résine et exprimé en mmol/g. La formule suivante peut être utilisée pour calculer le poids de la résine :
- Peser....
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Résultats
Après la synthèse et purification et avant évaluation physico-chimiques ou biologique, il est recommandé des masses des AAE sont inspectés à nouveau et la pureté constatée par CLHP analytique. Pour la caractérisation des matériaux ou évaluation biologique, PPAs besoin d’avoir une pureté de > 95 %. La figure 2 montre la trace HPLC (en haut) et des spectres MALDI (en bas) confirmant la présence du produit. Systèmes d’analyse HPLC intégrera l’aire sous la cou.......
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Discussion
Les protocoles décrits ici peuvent être utilisés pour synthétiser les PPAs comme PAs de puits et des molécules peptidique (comme hybride PA-peptoids). Bien que la synthèse de peptides utilisant un RCR est une procédure simple et directe, la synthèse des peptides contenant des molécules biologiques de guidage peut être particulièrement difficile. Polyamines comme la spermine, spermidine, diethyelenetriamine, etc., peuvent fonctionner comme molécules autoguidage pour le ciblage de cellules de cancer du
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer
Remerciements
Ce projet a été financé par l’University of Nebraska Medical Center (fonds d’amorçage, MC-S) ; NIH-COBRE, 5P20GM103480 (T. Bronich) et l’American Chemical Society, PRF # 57434-DNI7(MC-S).
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Résine de chlorure de 2-chlorotrityle ; | AappTec | RTZ001 | |
| SynthwareTM récipient de synthèse ; | Aldrich | SYNP120050M | |
| Dichlorométhane | Acros | AC406920250 | Fisher Sci. Catalogue # |
| Wrist Shaker | Boekel Scientific | 401000-2 | |
| Kaiser test kit | Sigma-Aldrich | 60017 | |
| 2-[(4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohex-1-ylidene)ethyl-amino]-ethanol | Sigma-Aldrich | CDS004772 | |
| Méthanol anhydre | Acros | AC610981000 | Fisher Sci. Catalogue # |
| Kit d’essai Chloranil | TCI | TCC1771-KIT | Catalogue VWR # |
| Di-tert di-carbonate de butyle ; | Acros | AC194670250 | Fisher Sci. Catalogue # |
| Dimethylformamide | Fisher Scientific | BP1160-4 | |
| Hydrazine | Acros | AC296815000 | FIsher Sci. Catalogue # |
| (2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tétraméthyluronium hexafluorophosphate) | p3biosystems | 31001 | |
| 4-méthyl pipéridine ; | Acros | AC127515000 | FIsher Sci. Catalogue # |
| Acide trifluoroacétique | AappTec | CXZ035 | |
| Triisopropyl Silane | Sigma-Aldrich | 233781 | |
| Ether | Fisher Scientific | E138-1 | |
| &alpha ;-Cyano-4-hydroxycinnamic | acid Sigma-Aldrich | C8982 | |
| 9-Aminoacridine | Sigma-Aldrich | 92817 | |
| Fisherbrand ; Filtres pour seringues : Membrane PTFE | Fisher Scientific | 09-730-21 |
Références
- Cui, H., Pashuck, E. T., Velichko, Y. S., Weigand, S. J., Cheetham, A. G., Newcomb, C. J., Stupp, S. I. Spontaneous and x-ray-triggered crystallization at long range in self-assembling filament networks. Science. 327, 555-559 (2010).
- Pashuck, E. T., Cui, H., Stupp, S. I.
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Réimpressions et autorisations
