Un modèle polyvalent d’Infestation de tiques dures sur des lapins de laboratoire

Résumé

Nous avons mis au point un système simple et versatile pour nourrir les tiques dures sur des lapins de laboratoire. Notre protocole non-laborieux utilise des matériaux facilement accessibles et peut être ajusté selon les besoins des divers paramètres expérimentaux. La méthode permet de surveillance confortable et/ou un échantillonnage des tiques pendant toute la période d’alimentation.

Résumé

L’utilisation d’animaux vivants dans la recherche de tiques est cruciale pour une variété de fins expérimentales, y compris le maintien des colonies de tiques dures en laboratoire. Tiques, tous les stades de développement (à l’exception de le œuf) sont hématophages, en acquérant un repas de sang lorsqu’il est attaché à leurs hôtes vertébrés est essentiel pour la réussite de leur cycle de vie. Nous démontrons ici une méthode simple qui utilise des capsules facilement ouvrables pour l’alimentation des tiques dures sur les lapins. Les avantages de la méthode proposée sont sa simplicité, de courte durée et de surtout polyvalent ajustement aux besoins des conditions expérimentales spécifiques. La méthode rend possible l’utilisation de chambres multiples (de différentes tailles) sur le même animal, permettant l’alimentation de plusieurs étapes ou différents groupes expérimentaux, tout en réduisant la condition animale dans l’ensemble. Les matériaux non irritant et facilement accessibles minimise la gêne pour les animaux, qui peuvent être facilement récupérées à partir d’une expérience et proposés pour adoption ou réutilisées si le protocole éthique lui permet.

Introduction

Les tiques dures (Ixodidae) sont bien connus comme les arthropodes alimentation lentes et peuvent être fixés sur un hôte pendant plusieurs jours ou semaines, selon les espèces et le développement étape¹. Ces arthropodes hématophages obligatoires sont des vecteurs d’une grande variété d’agents infectieux, tels que les bactéries, protozoaires et virus et donc présentent un risque important pour l’homme et de la santé animale¹. Quand étudie la biologie de la tique ou évaluation de nouvelles méthodes de contrôle, la mise en place d’une tique efficace système d’alimentation est cruciale pour efficacement les expériences de conception et accomplir les objectifs de l’étude. Récemment, plusieurs systèmes d’alimentation artificielle tique (évitant l’utilisation d’animaux vivants) ont été développés^2,3,4 , et ils devraient être utilisés chaque fois que possible. Toutefois, ces systèmes n’ont pas été en mesure de remplacer complètement les tiques se nourrissent des animaux vivants, et ils ne sont pas des substituts appropriés pour de nombreuses conditions physiologiques nécessaires à des études scientifiques. Par conséquent, dans certains cas, l’utilisation d’hôtes animaux expérimentaux est cruciale pour garantir la pertinence des résultats expérimentaux.

Lapins néo-zélandais de laboratoire ont montré pour être les hôtes plus appropriées et accessibles pour plusieurs piqûre tique espèces^5,6,7,8,9. Deux stratégies communes de tique se nourrissant de lapins ont été fréquemment utilisés : un) se nourrissant des oreilles de lapin recouverts de coton tissu ou chaussettes^6,7et b) alimentation en coton sacs⁹, nylon bouteilles¹⁰ ou néoprène chambres¹¹ collée au dos du lapin. L’alimentation sur les oreilles du lapin n’est pas un système élégant, car les tiques (surtout les débuts, larves ou nymphes) peuvent ramper et attacher profondément dans le conduit auditif, ce qui est mal à l’aise pour l’animal et rend le contrôle des tiques alimentation et/ou la récupération des engorgés tiques sont difficiles. Ce système est également limité à seulement deux groupes de tique sur oreilles entièrement couverts par les chaussettes protégés par collier élisabéthain, ce qui représente une gêne importante pour l’animal. Autres systèmes^9,10,11 sont certainement plus avancées et bien adapté pour l’entretien de colonie de tiques dures. Cependant, ils sont limités dans le nombre de groupes expérimentaux placés chez le lapin, ainsi que dans les tailles/formes modifiables des chambres alimentation. En outre, ces protocoles exigent souvent clopinant les pattes arrière de lapin afin d’éviter les rayures et l’utilisation de colliers élisabéthains pour empêcher le toilettage.

Dans les présentes, nous proposons une méthode simple, non-laborieux et très efficace pour nourrir plusieurs groupes de tiques dures dans les chambres fermées collés au lapin retour couvert par une veste, éliminant le besoin de colliers élisabéthains ou clopinant pendant l’expérience. Plus précisément, notre système utilise des élastiques gélules composées d’une feuille de mousse d’éthylène-vinyle acétate (EVA) couvertes par le filet de moustique et collés sur le lapin rasé revient avec la solidification de rapide (3 min) de colle latex non irritant. Cette technique permet la fixation de plusieurs capsules de forme ou de taille désirée, et quelques semaines après l’expérience les lapins sont complètement rétablis. Le système est destiné principalement aux stades larvaire et adulte tiques dures, mais avec une petite modification, il peut être utilisé pour les larves aussi bien. Les méthodes de base mousse EVA pour tique dure d’alimentation peuvent être adaptées à d’autres types de vertébrés hôtes, par exemple les moutons (qui apparaît comme l’une des alternatives dans le présent document).

Protocole

Remarque : Dans cette étude, les lapins ont été gardés en cages standards avec de la nourriture et l’eau offert ad libitum à l’Office Français pour la nourriture, de l’environnement et hygiène et sécurité (ANSES) accrédité animaleries à Maisons-Alfort, France. Animaux ont été suivies deux fois par jour par deux techniciens expérimentés réactions cutanées anormales, des problèmes de santé ou des complications. La chambre expérimentale a été assurée en encadrant l’intérieur de la porte avec du ruban double-face pour éviter une fuite accidentelle de tiques. La méthode fonctionne mieux si deux personnes travaillent en équipe, mais il est possible de compléter single handedly par une personne expérimentée. Bien que la plupart des lapins sont dociles et calmes, les signes de stress peuvent se produire pendant la manipulation. Pour s’assurer qu’un lapin ne pas blesser lui-même en luttant, retenue manuelle peut être effectuée par tenant doucement de la peau du cou dans une main tandis que l’autre main il supporte croupe. Les six mois, Rambouillet ovins femelles a été maintenu au Centre pour les installations de recherche biomédicale (CRBM) à l’Ecole nationale vétérinaire d’Alfort (ENVA), où l’eau et nourriture ont été fournis ad libitum, et il a été vérifié deux fois par jour.

NOTE : Notre laboratoire a reçu l’autorisation d’utiliser des lapins et des moutons pour tique d’alimentation par le Comité d’éthique pour des expériences de l’Animal vient Anses/ENVA/UPEC, permis numéros 01741.01 et 11/10/16-5 b, respectivement. Puisque nous avons utilisé uniquement les tiques exempts de micro-organismes pathogènes dans nos expériences, tous les lapins utilisés dans cette étude ont été proposés pour adoption par l’intermédiaire de l’Association du lapin blanc, Paris, France.

1. préparation des gélules

1. Couper la taille désirée de la capsule de la feuille de mousse EVA (Figure 1A). Autour de l’extérieur dans les coins (Figure 1B) de la capsule afin de minimiser le détachement accidentel lors de coller à la peau de lapin.
   Remarque : L’épaisseur de la capsule doit être environ 8 mm. utiliser une feuille de mousse épaisse de 5 mm pour les larves, nymphes et petites tiques adultes espèces tels que Ixodes. Une feuille de mousse épaisseur 1 cm est adaptée aux grandes tailles tiques adultes tels que Amblyomma SP., Hyalomma SP., etc. , que la taille de la capsule varie basés sur les conditions expérimentales. Par exemple, pour 20 Ixodes couples adultes, 200 nymphes ou 1 000 larves, nous utilisons une taille capsule intérieure de 5 x 5 cm², 6 x 7 cm² ou 7 x 9 cm², respectivement.
2. Couper le 8 mm de large bandes de crochet autocollant l’entrée tape (voir Table des matières) et collez-les à cadre en mousse EVA préparé (Figure 1C).
3. Couper les bandes de même taille de boucle autocollante l’entrée tape (voir Table des matières) et lient aux côtés crochet fixé au cadre EVA-mousse (Figure 1D).
4. Couper la taille appropriée de la maille fine de moustique (maillage inférieur à 50 µm) à la taille du cadre en mousse EVA et collez-la à la boucle autocollante (Figure 1E et 1F). Si nécessaire, couper les surplombs.
   Remarque : Ce type de capsule peut servir à nourrir les nymphes et les adultes des espèces de tiques dures, tandis qu’un autre système d’étanchéité des capsules est nécessaire destinés à l’alimentation larvaire (la Figure 1) pour empêcher la fuite accidentelle des larves via l’attaché auto-agrippante côté.

2. préparation du lapin avant l’Infestation de tiques

1. Raser la zone du lapin dos et côtés pour être utilisé avec une tondeuse (Figure 2A).
2. Enduire de colle au latex non irritant la totalité de la surface de la capsule préparée et attendre 1 min (Figure 2B).
3. Coller la capsule en appuyant sur la peau (surtout dans les coins) avec les doigts pendant 3 minutes environ (Figure 2 et 2D).
   Remarque : Lors du collage de plus d’une capsule, assurez-vous de garder au moins 5 mm d’espace entre eux (Figure 2E et 2F). Nous évitons habituellement la région de la colonne vertébrale, mais elle peut être utilisée si nécessaire.
4. Soulevez légèrement les capsules pour vérifier visuellement leur attachement à la peau. Si les régions non inscrits se trouvent, appliquer la colle à l’aide d’une spatule, puis appuyez sur pour 3 autres minutes.
5. Appliquer du ruban adhésif protecteur pour les pattes arrière du lapin pour éviter tout dégât veste (Figure 2G).
   Remarque : Cette étape est facultative et est principalement pour éviter tout dégât de veste, pas de dommages à la capsule de la tique.
6. Mettre sur la veste de lapin en plaçant les pattes à travers les ouvertures et en serrant le cou, rendre sûr lapin respiration reste confortable. Ne pas placer les pattes arrière à travers les enceintes élastiques à cette étape et laissez la fermeture éclair ouverte (Figure 2H).

3. Infestation de tiques

1. Placez les tiques dans une seringue en plastique (1 ou 5 mL selon le nombre d’individus) avec l’aiguille bout couper et bouchées avec du coton (Figure 1G). Si une petite quantité de tiques est infestés, utiliser des pinces.
   Remarque : Pour entretien de colonie tique permettent la tique engorgée ou à pondre avec ultérieures d’incubation à l’intérieur de la seringue (5 ou 10 mL) couverte par le maillage de moustique encapsulé par une bande de caoutchouc¹² pour éviter la manipulation laborieuse des larves au moment où ils sont appliqué à l’hôte (Figure 1H). En outre, entièrement gorgée de larves peuvent être autorisés à muer dans la seringue (Figure supplémentaire 1I; 5 ou 10 mL) d’infestation directe du lapin par des nymphes.
2. Placer la seringue profondément dans la capsule par l’intermédiaire de l’open des décideurs et ensemencer les tiques en poussant le piston de la seringue. Tourner lentement le piston vers la peau de lapin pour enlever les tiques restants attachés au plongeur et tirez simultanément de la capsule (Figure 2j’ai).
   NOTE : Si certains des individus rampent hors de la capsule, les retourner avec une pincette.
3. Fermer la capsule en assujettissant la bande auto-agrippante.
4. Placer les pattes arrière du lapin dans l’arrière élastiques enclos de la veste et zip fermés.
   Remarque : Assurez-vous que l’index peut s’insérer entre le col de la veste et le lapin pour assurer confort et aussi d’éviter la mastication sur la veste.
5. Retourner le lapin à la cage (Figure 2J).
   NOTE : Le temps de l’infestation à la collection de pleine de tiques varient selon les espèces de tiques différentes et les stades de développement. Par exemple, pour Ixodes scapularis et Ixodes ricinus, les durées d’alimentation pour adultes, nymphes et larves sont entre 6 et 9, 3 et 4 et 2 à 3 jours, respectivement. Une liste de références pour 29 cycles de vie différents tiques dures conditions de laboratoire se trouvent dans Levin et Shumacher (2016)⁹.

4. la collecte et le suivi des tiques

1. Prenons le lapin de la cage sur le banc et décompressez la veste.
2. Doucement retenir le lapin avec les mains. Ouvrir la capsule en détachant la bande auto-agrippante (Figure 2 K et 2 L) et recueillir les tiques en brossant les larves gorgées (la Figure 1) ou nymphes dans un plat en plastique ou avec une pincette pour les adultes (Figure 2L ). Si partiellement alimenté (non remplie) tiques sont nécessaires, utiliser un twister tique ou une pince à détacher.
   Remarque : Si maintenant les colonies de tiques s’il vous plaît voir la note à l’étape 3.1. Maintien des conditions de température selon l’espèce de tique particulière et les tiques gorgées dans approprié humides.
3. Si nécessaire, fixez de nouveau la bande auto-agrippante pour fermer la capsule.

5. récupération du lapin

1. Retirer le filet de moustique complètement de la capsule et laisser le manteau chez le lapin (Figure 2M).
2. Attendre 3-4 semaines et essayer d’enlever la capsule en taillant délicatement un des coins (Figure 2N). Si la capsule est encore solidement attachée, répétez cette étape une semaine plus tard.
3. Enlever la veste et le laissez que le lapin récupérer dans la cage.
   Remarque : Une fois que la capsule est éteint, vérifiez la peau du lapin pour des réactions anormales. Bien que normalement, aucun traitement n’est nécessaire, une lotion émolliente peut être utilisée en cas d’irritation.
4. Si le protocole et les expériences permettent, le lapin récupéré (Figure 2-O) ou peut être recyclé offerts pour adoption.
   NOTE : Lapins auraient dû être divulgués en vue d’acquérir la résistance tique une fois exposée à des infestations de tiques répétés¹³; par conséquent, reinfestations ne sont pas recommandées à moins que l’expérience exige.

Résultats

Ici, pour la première fois, nous proposons une méthode détaillée étape par étape de tiques dures alimentation en mousse EVA capsules appliqués au dos du lapin rasé, couvert par une gaine (Figure 1 et Figure 2). Ce protocole est adapté aux différents types d’expériences où tique différents groupes sur le même hôte sont nécessaires et peuvent également être utilisés pour l’élevage de masse des tiques dures. La tiqu...

Discussion

L’étape la plus importante dans cet ensemble du protocole est de coller la capsule fermement sur la peau rasée. Pour cette raison, une pression constante pendant au moins 3 minutes est essentielle, surtout dans les coins. Lorsque inoculer les tiques dans la capsule, il est important de les appliquer dans le coin opposé de celui ouvert afin d’éviter les tiques s’échapper durant l’étanchéité. Lorsque vous planifiez les expériences, s’assurer que toutes les capsules sont couverts par la veste pour éviter tout dommage dû à m...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Lapins de Nouvelle-Zélande (2,5-3,5 kg)	Charles River  ;	Code de souche 571
Mouton Rambouillet	Fournisseur local Ferme sans tiques	Femelle 6 mois
Mousse EVA 5 mm d’épaisseur	Cosplay Shop	EVA-PE451kg (950mm x 450mm)	10 mm PE45 kg mousse de la boutique Cosplay peut être utilisée pour la grande espèce de tique adulte
Feuille de mousse 9 » X 12 » 6 mm-Blanc	Amazon	FOAMSHT6-20	6 mm-EVA mousse peut être commandé via Amazon comme alternative à la mousse de Cosplay Shop
Vestes de lapin pleine longueur  ;	Harvard Apparatus, Inc.  ;	620077- moyen, 6270078 - grand  ;
Colle latex non toxique	Réparateur de larmes  ;	Tissu & Cuir Adhésif
Jersey orthopédique en coton tubulaire	BSN Medical	9076 (12-15 cm de large)
Moustiquaire  ;	Loisirs Créatifs	Tissu en maille de nylon filtre très fin	Tout matériau de moustiquaire, ou de rideau dont la taille de maille est inférieure à 50 &mu ; m convient.
Leucoplaste  ;	BSN medical S.A.S	LF 72361-02
Ruban adhésif auto-agrippant	AIEX store	AIEX 39,37 pieds/12m Crochet et boucle Rouleau de ruban auto-adhésif, largeur 20 mm, couleur blanche	Fullfiled by Amazon
Colle à séchage rapide   ;	Fixtout  ;	Superglue