Les têtards de Xenopus offrent une plate-forme unique pour étudier la fonction du système nerveux in vivo. Nous décrivons des méthodologies pour évaluer le traitement de l’information olfactive vie Xenopus larves dans des conditions normales d’élevage ou après une blessure.
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Article de méthode
Évaluation fonctionnelle des voies olfactives chez les têtards de Xenopus vivant
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les têtards de Xenopus offrent une plate-forme unique pour étudier la fonction du système nerveux. Ils offrent plusieurs avantages expérimentales, telles que l’accessibilité à nombreuses approches d’imagerie, des techniques électrophysiologiques et tests comportements. Le système olfactif de Xenopus têtard est particulièrement bien adapté pour étudier la fonction des synapses établis au cours du développement normal ou réformés après une blessure. Nous décrivons ici les méthodologies permettant d’évaluer le traitement de l’information olfactive dans la vie des larves de Xenopus . Nous exposons une combinaison de mesures in vivo des réponses de calcium présynaptique dans les glomérules du bulbe olfactif avec des essais de comportement olfactif guidée. Méthodes est cumulable avec la transection des nerfs olfactifs pour étudier le recâblage de la connectivité synaptique. Des expériences sont présentées à l’aide d’animaux sauvage et génétiquement modifiés exprimant des reporters de la GFP dans les cellules du système nerveux central. Application des méthodes décrites aux têtards génétiquement modifiés peut être utile pour démêler les bases moléculaires qui définissent le comportement de vertébrés.
Introduction
Les têtards de Xenopus constituent un excellent modèle animal pour étudier la fonction normale du système nerveux. Transparence, un génome entièrement séquencé1,2et l’accessibilité aux techniques chirurgicales, électrophysiologiques et d’imagerie sont des propriétés uniques des larves de Xenopus qui permettent d’étudier les fonctions neuronales in vivo3 . Quelques-unes des multiples possibilités expérimentales de ce modèle animal sont illustrés par les études approfondies réalisées têtard les systèmes sensoriels et moteurs4,
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Protocole
Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité d’éthique de la recherche animale à l’Université de Barcelone.
Remarque : Les têtards de X. tropicalis et X. laevis sont élevés selon les méthodes standard13,14. Eau de têtard est préparé en ajoutant des sels commerciales (voir Table des matières) à eau obtenue par osmose inverse. Conductivité est réglée à ∼700 µS et ∼1, 400 µS pour les têtards X. tropicalis et X. laevis , respectivement. Les larves peuvent être obtenus par accouplement naturel ou par fécondat....
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Résultats
Dans cet article, nous présentons une combinaison des deux approches complémentaires à effectuer en vivo étude des fonctionnalités du système olfactif Xenopus têtard : J’ai) une méthode d’imagerie présynaptique Ca2 + change dans les glomérules de la vie les têtards en utilisant un indicateur calcique fluorescent et ii) une odeur guidé analyse comportementale qui peut être utilisé pour étudier la réponse spécifique Odorisants d’origine hydrique. Étant donné que.......
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Discussion
Cet article décrit les techniques qui sont utiles pour étudier la fonctionnalité des voies olfactives dans vie Xenopus têtards. Le protocole actuel est particulièrement utile pour les laboratoires qui travaillent ou ont accès aux Xenopus; Toutefois, il est également intéressant pour les chercheurs qui étudient les bases cellulaires et moléculaires de la réparation et la régénération neuronale. Résultats obtenus chez Xenopus est cumulable avec les données recueillies dans d’autres vertébrés modè.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Ce travail a été soutenu par des subventions de El Ministerio de Economía y Competitividad (MINECO ; SAF2015-63568-R) co-financé par le Fonds européen de développement régional (FEDER), de bourses de recherche concurrentielle de la M. G. F. Fuortes Memorial Fellowship, le Stephen W. fonds de bourses Kuffler, Laura et Arthur Colwin doué Summer Research Fellowship Fund , la bourse de Fischbach et le grand fonds de génération du laboratoire de Biologie Marine et la National Xenopus ressources RRID:SCR_013731 (Woods Hole, Massachusetts), où une partie de ce travail a été effectuée. Nous remercions également le programme CERCA / Generalitat de Catalunya d’appui institution....
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Sels pour aquariums (Instant Ocean Salt) | Tecniplast | XPSIO25R | |
| Tricaine (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate) | Sigma-Aldrich | E10521 | |
| Pince à épiler #5 (pointe 0.025 x 0.005 mm) | World Precision Instruments | 501985 | |
| Vannas Ciseaux (pointe 0.015 x 0.015) | World Precision Instruments | 501778 | |
| Whatman papier filtre qualitatif | Fisher Scientific | WH3030917 | |
| X. laevis tubb2-GFP | National Xenopus Resource (NXR), RRID :SCR_013731 | NXR_0.0035 | |
| X.tropicalis NBT-GFP | European Xenopus Resource Center (EXRC) RRID :SCR_007164 | ||
| CellTracker CM-DiI | ThermoFisher Scientific | C-7001 | |
| Calcium Green dextran, Sel de potassium, 10 000 MW, Anionic | ThermoFisher Scientific | C-3713 | |
| Capillaires en borosilicate pour micro-injection | Instrument Sutter | B100-75-10 | D.E.=1,0 mm., D.I.=0,75 mm. |
| Extracteur | Sutter Instrument | P-97 | |
| Micro-injecteur | Parker Instruments | Picospritzer III | |
| Sylgard-184 | Sigma-Aldrich | 761028-5EA | |
| Micropipettes Microfil | World Precision Instruments | MF28G-5 | |
| Microscope droit | Zeiss | AxioImager-A1 | |
| Stimulateur Master-8 | A.M.P.I. | ||
| Caméra CCD | Hamamatsu | Image EM | |
| Électrovannes | Warner Instruments | VC-6 Système | |
| Dow Corning Graisse sous vide poussé | VWR Scientific | 636082B | |
| Chlorhydrate de tubocurine | Sigma-Aldrich | T2379 | |
| Caméra CCD | Zeiss | MRC-5 | Contrôlée par Zen logiciel |
| objectif de caméra | Thorlabs | MVL8ML3 | Il existe de multiples possibilités qui doivent être adaptées au modèle de caméra utilisé |
| Résine époxy | RS Components | ||
| Collecteur | Warner Instruments | MP-6 Collecteur de perfusion | |
| Micromanipulateur pour la livraison locale de solutions | Narishige | MN-153 | |
| Mini pinces magnétiques | Warner Instruments | MAG-7, MAG-6 | |
| Tubes en polyéthylène | Warner Instruments | 64-0755 | Diamètre extérieur = 1,57 mm, Diamètre intérieur = 1,14 mm. |
Références
- Hellsten, U., et al. The genome of the Western clawed frog Xenopus tropicalis. Science. 328 (5978), 633-636 (2010).
- Session, A. M., et al. Genome evolution in the allotetraploid frog Xenopus laevis. Nature. 538 (7625), 336-343 (2016).
- Zhang, L. I., Tao, H. ....
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Réimpressions et autorisations
